Results and discussionIsolation and

Results and discussion
Isolation and characterization of endophytic fungus
The endophytic fungus FC-46 (KC989106) in nature was found
associated with C. annum. Colonies of FC-46 showed growth of
6–7 cm on a PDA plate after 7 days. The color of the strain on
obverse view was white to light brown and the reverse was dark
brown (see Supporting info, Fig. 1a and b). The morphological characteristics
of FC-46 supported the genus Alternaria. For molecular
characterization of strain FC-46, ITS1-5.8S rDNA-ITS2 region was
amplified, sequenced and submitted at NCBI nucleotide database
using BLAST program. Sequences of identity greater than 90% were
retrieved, aligned with the sequence of strain FC-46 using clustal
W program and subjected to neighbor-joining (NJ) analysis to
obtain the phenogram (Fig. 1). In the NJ-tree Pyrenophora leucospermi
(JN712479) was used as out group. The ITS sequence of strain
FC-46 had the highest nucleotide similarities with A. alternata
(AF455506) and formed a clade with 99% bootstrap value.
Fermentation and isolation of secondary metabolites
The fungus was cultured in potato dextrose broth (PDB), pH 5.5
at 28 C for 7 days with constant shaking at 200 rpm. The fermentation
broth was then extracted with dichloromethane following
the National Cancer Institute’s protocol (McCloud, 2010). The extract
was concentrated in vacuo and subjected to column chromatography
on silica gel using hexane-ethyl acetate with increasing
polarity leading to the isolation of two compounds, identified as
2,4-di-tert-butyl phenol (2) (Sang and Kim, 2012) and alternariol-
10-methyl ether (3), which is new to the literature (Fig. 2).
Structure elucidation
The molecular formula of 3 was established as C15H12O5 by
high-resolution positive-ion-mode electrospray ionization mass
spectrometry [HR-ESI(+)-MS] at m/z 273.0756 [M+H]+ (calcd. for
C15H24O, 272.0685). The IR spectrum displayed absorbances at
1658.39 and 3400.86 cm1 indicating the presence of carbonyl
and hydroxyl groups respectively. 13C NMR displayed 15 carbon
resonances, which were classified by distortionless enhancement
by polarization transfer (DEPT) and heteronuclear single-quantum
coherence (HSQC) NMR experiments as 2 methyls including one
methoxy, 4 methines and 9 non-protonated carbons (Table 1). 1H
NMR pattern showed close relation with alternariol’s chemical
skeleton having difference in splitting of aromatic peaks. Two
doublets with J = 2.5 Hz showed the presence of meta coupling at
C-2 and C-4, while two doublets with J = 5.7 Hz indicated the presence
of ortho coupled protons at C-8 and C-9. The characteristic
peak of hydroxyl group involved in strong hydrogen bonding
Fig.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการอภิปรายและ
การแยกและลักษณะของเชื้อราเอนโดไฟท์
เชื้อราเอนโดไฟท์ FC-46 (KC989106) ในธรรมชาติถูกพบ
ที่เกี่ยวข้องกับซีปี อาณานิคมของ FC-46 แสดงให้เห็นว่าการเจริญเติบโตของ
6-7 ซม. บนแผ่น PDA หลังจากวันที่ 7 สีของความเครียดใน
มุมมองด้านเป็นสีขาวสีน้ำตาลอ่อนและกลับมืด
สีน้ำตาล (ดูข้อมูลสนับสนุน, รูป. 1a และ b) ลักษณะทางสัณฐานวิทยา
ของ FC-46 ได้รับการสนับสนุน Alternaria ประเภท สำหรับโมเลกุล
ลักษณะของสายพันธุ์ FC-46, ITS1-5.8S ภูมิภาค rDNA-ITS2 ถูก
ขยายติดใจและส่งที่ฐานข้อมูล NCBI เบื่อหน่าย
การใช้โปรแกรม BLAST ลำดับของตัวตนมากกว่า 90% ถูก
เรียกสอดคล้องกับลำดับของสายพันธุ์ FC-46 ใช้ Clustal
โปรแกรม W และยัดเยียดให้เพื่อนบ้านเข้า (NJ) การวิเคราะห์เพื่อ
ให้ได้ phenogram (รูปที่ 1). ในนิวเจอร์ซีย์ต้นไม้ Pyrenophora leucospermi
(JN712479) ถูกใช้เป็นกลุ่มที่ออกมา ลำดับของสายพันธุ์
FC-46 มีความคล้ายคลึงกันมากที่สุดเบื่อหน่ายกับ A. alternata
(AF455506) และกลายเป็น clade มีมูลค่าบูต 99%.
การหมักและการแยกสารทุติยภูมิของ
เชื้อราเป็นที่เลี้ยงในน้ำซุปมันฝรั่งเดกซ์โทรส (PDB), พีเอช 5.5
วันที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วันด้วยการเขย่าคงที่ 200 รอบต่อนาที การหมัก
น้ำซุปถูกสกัดด้วยไดคลอโรมีเทนต่อไปนี้
สถาบันมะเร็งแห่งชาติของโปรโตคอล (McCloud 2010) สารสกัด
เข้มข้นในสุญญากาศและเป็นไปคอลัมน์
บนซิลิกาเจลโดยใช้อะซิเตทเอทิลเฮกเซนที่มีการเพิ่ม
กระแสไฟฟ้าที่นำไปสู่การแยกสารสองระบุว่าเป็น
2,4-di-tert บิวทิลฟีนอล (2) (Sang และคิม 2012) และ alternariol-
อีเทอร์เมธิล 10 (3) ซึ่งเป็นวรรณกรรมใหม่ (รูปที่. 2).
หาสูตรโครงสร้าง
สูตรโมเลกุล 3 ก่อตั้งขึ้นเป็น C15H12O5 โดย
ความละเอียดสูงบวกไอออนโหมด electrospray ไอออนไนซ์มวล
spectrometry [ HR-ESI (+) - MS] ที่ม. / z 273.0756 [M + H] + (สำหรับ calcd.
C15H24O, 272.0685) IR สเปกตรัมแสดง absorbances ที่
1,658.39 และ 3,400.86 ซม. 1 แสดงให้เห็นการปรากฏตัวของคาร์บอนิล
กลุ่มและไฮดรอกตามลำดับ 13C NMR แสดง 15 คาร์บอน
resonances ซึ่งจัดโดยการเพิ่มประสิทธิภาพ distortionless
โดยการโอนโพลาไรซ์ (DEPT) และวิวิธพันธ์เดียวควอนตัม
การเชื่อมโยงกัน (HSQC) ทดลอง NMR 2 methyls รวมถึงหนึ่ง
methoxy 4 methines และ 9 ก๊อบปี้ที่ไม่ใช่โปรตอน (ตารางที่ 1) 1H
NMR รูปแบบที่แสดงให้เห็นความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับสารเคมี alternariol ของ
โครงกระดูกที่มีความแตกต่างในการแยกของยอดเขาที่มีกลิ่นหอม สอง
doublets กับ J = 2.5 เฮิร์ตซ์แสดงให้เห็นว่าการปรากฏตัวของการมีเพศสัมพันธ์ที่เมตา
C-2 และ C-4 ขณะที่ทั้งสอง doublets กับ J = 5.7 เฮิร์ตซ์ชี้ให้เห็นการปรากฏตัว
ของออร์โธคู่โปรตอนที่ C-8 และ C-9 ลักษณะ
จุดสูงสุดของกลุ่มไฮดรอกมีส่วนร่วมในไฮโดรเจนที่แข็งแกร่ง
รูป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลลัพธ์และการแยกและศึกษาลักษณะของเชื้อราเอนโดไฟท์อภิปราย

fc-46 เชื้อราเอนโดไฟท์ ( kc989106 ) ในธรรมชาติพบ
ที่เกี่ยวข้องกับ C . ปี อาณานิคมของ fc-46 แสดงการเจริญเติบโตของ
6 – 7 ซม. บน PDA แผ่นหลัง 7 วัน สีเมื่อย
ด้านตรงข้ามวิว ขาว น้ำตาลอ่อน และน้ำตาลเข้ม
( เห็นขึ้นมา สนับสนุนข้อมูล รูปที่ 1A และ B )ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของพืชสกุล =
fc-46 สนับสนุน . สำหรับคุณสมบัติของโมเลกุล
fc-46 เมื่อย its1-5.8s rdna-its2 ภูมิภาค
ขยายยีนและการแสดงความคิดเห็นที่เบส ncbi
ฐานข้อมูลโดยใช้โปรแกรมระเบิด ลำดับของตนมากกว่า 90% มี
ดึงให้สอดคล้องกับลำดับของ fc-46 สายพันธุ์โดยใช้ clustal
W โปรแกรม และต้องเพื่อนบ้านร่วม ( NJ ) การวิเคราะห์

ขอรับ phenogram ( รูปที่ 1 ) ในนิวเจอร์ซีย์ต้นไม้ pyrenophora leucospermi
( jn712479 ) ถูกใช้เป็นกลุ่ม ของลำดับของ fc-46 เมื่อย
สูงมีความคล้ายคลึงกันกับ เบส alternata
( af455506 ) และรูปแบบที่ clade ที่มีค่าเท่ากับ 99% .
การหมักและการแยกสาร secondary metabolites
เชื้อราที่เลี้ยงใน broth potato dextrose ( PDB ) , pH 5.5
ที่ 28  C เป็นเวลา 7 วัน มีค่าคงที่เขย่า 200 รอบต่อนาที การหมักน้ำสกัดด้วย dichloromethane แล้ว

ต่อไปนี้โปรโตคอลสถาบันมะเร็งแห่งชาติ ( McCloud , 2010 ) สารสกัดจาก vacuo
ในและภายใต้คอลัมน์โครมาโทกราฟีบนซิลิกาเจล
ใช้เฮกเซน เอทิลอะซิเตทกับเพิ่ม
ขั้วที่นำไปสู่การแยกสารประกอบสองชนิดที่ระบุเป็น
2,4-di-tert-butyl ฟีนอล ( 2 ) ( แซง และ คิม , 2012 ) และ alternariol -
10 เมทิลอีเทอร์ ( 3 ) ซึ่งเป็นใหม่ในวรรณคดี ( รูปที่ 2 )

สูตรสูตรโครงสร้างโมเลกุลของ 3 ก่อตั้งขึ้นเป็น c15h12o5
ความละเอียดสูงบวกไอออนโดย โหมดวิธีพ่นละอองไฟฟ้ามีประจุมวล spectrometry ( ) - hr-esi
[ MS ] M / Z 273.0756 [ M ] ( Calcd .