C6 cells (3 · 106) were lysed by re

C6 cells (3 · 106
) were lysed by repeated freezing and thawing in a
50 mM HEPES buffer, pH 7.4, containing 1 mM dithiothreitol,
1 mM EDTA and protease inhibitors. After centrifugation
(16500 · g for 30 min at 4 C) the particulate fractions were washed
with the lysis buffer, solubilized with 20 mM CHAPS and centrifuged
(25000 · g for 30 min at 4 C). An aliquot of the cytoplasmatic and
membrane fractions (40 lg proteins/lane) were loaded on to 7.5%
SDS–polyacrylamide gel. After the electrophoresis, proteins were blot-
ted to a PVDF membrane (Immobilon P, Millipore S.p.A., Rome,
Italy) and Western blot analysis was performed using an anti-eNOS
monoclonal antibody (BD Transduction Laboratories, Franklin
Lakes, NJ, USA). Protein concentration in samples was determined
by the method of Bradford [14].

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ C6 (3 · 106
) ถูก lysed โดยแช่แข็งและละลายซ้ำใน
50 มิลลิ HEPES bu FF เอ้อค่า pH 7.4 ที่มี dithiothreitol มิลลิ 1
EDTA 1 มิลลิและน้ำย่อย หลังจากการหมุนเหวี่ยง
(16500 ·กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส) เศษส่วนอนุภาคถูกล้าง
ด้วยสลาย bu FF เอ้อ, ละลาย 20 มิลลิ CHAPS และหมุนเหวี่ยง
(25000 ·กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส) aliquot ของ cytoplasmatic และ
เศษส่วนเมมเบรน (40 LG โปรตีน / เลน) ถูกโหลดไป 7.5%
เจลอะคริเลตระบบ SDS- หลังจากที่อิโปรตีนถูก blot-
เท็ดเมมเบรนจะ PVDF (Immobilon P, คสปา, โรม,
อิตาลี) และการวิเคราะห์ดวงตะวันได้รับการดำเนินการโดยใช้ต่อต้าน eNOS
โมโนโคลนอลแอนติบอดี (BD Transduction ห้องปฏิบัติการ, แฟรงคลิน
เลคส์, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) ความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างถูกกำหนด
โดยวิธีการของแบรดฟอ [14]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์ ( C6
3 ด้วย 106 ) lysed โดยการแช่แข็งและละลายซ้ำใน
50 mm ฮีเปสบูffเอ้อ , pH 7.4 มีบัตรแข็ง 1 มม. ,
1 mM EDTA และ protease inhibitors . หลังการปั่นเหวี่ยง
( 16 , 500 ด้วย G สำหรับ 30 นาทีที่ 4  C ) อนุภาคเศษส่วนถูกล้าง
กับการสลายบูffเอ้อสร้าง 20 Chaps มม. และไฟฟ้า
( 25 , 000 ด้วย G สำหรับ 30 นาทีที่ 4  C ) เป็นส่วนลงตัวของ cytoplasmatic และ
เมมเบรนเศษส่วน ( 40 LG โปรตีน / ช่อง ) และโหลดบน 7.5 %
SDS - polyacrylamide gel . หลังจากอิเล็ก โปรตีนถูกลบ -
เท็ดกับเมมเบรน PVDF ( มิลลิ immobilon P , ฮา , โรม ,
อิตาลี ) และการวิเคราะห์ Western blot แสดงโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านนะ
( BD ผ่านห้องปฏิบัติการ , แฟรงคลิน
ทะเลสาบ , NJ , USA ) ความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างตั้งใจ
โดยวิธี Bradford [ 14 ]