2.9. Western blot Cell lysates cont

2.9. Western blot
Cell lysates containing 30 μg of protein were separated by 10% sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Then, it was transferred to nitrocellulose sheet in a western blot apparatus (Bio-Rad, Hercules, CA,
USA). The nitrocellulose sheet was blocked with 5% skim milk for 1 h, rinsed by Tris-buffered-saline with Tween (1mol/L Tris, 5 mol/L NaCl, and 0.1% Tween 20), and incubated for overnight with primary antibodies of iNOS and GLUT4.
Nitrocellulose membrane was again washed with Trisbuffered-saline with Tween followed by incubation with
secondary antibody (horseradish peroxidase-conjugated IgG 1:2000) for 1 h. Finally, the expressed proteins were measured
by analyzing the signal captured in nitrocellulose membrane
using chemiluminescent substrate and VisionWorksTMLS
(Analysis software, Upland, CA, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.9 แบบตะวันตกน้า Lysates เซลล์ที่ประกอบด้วย 30 μโปรตีนถูกคั่น โดย 10% โซเดียม dodecyl ซัลเฟตตรวจสอบวิเคราะห์อิ แล้ว มันถูกถ่ายโอนไปแผ่นไนโตรเซลลูโลสอุปกรณ์น้าตะวันตก (Bio-ล้อ เฮอร์คิวลิส CAสหรัฐอเมริกา) แผ่นไนโตรเซลลูโลสถูกบล็อก ด้วยนมพร่องมันเนย 5% สำหรับ h 1 ล้าง โดยทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์เกลือกับโลก (1mol/L ทริสเรทติ้ง 5 mol/L NaCl และ 0.1% แต่ 20), และรับการกกหลายกับแอนติบอดีหลักของ iNOS GLUT4ไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนถูกล้างอีกครั้ง ด้วยเกลือ Trisbuffered กับโลกตาม ด้วยกกไข่ด้วยแอนติบอดีรอง (เป็ดน้ำผันฮอส IgG 1: 2000) สำหรับ 1 h ในที่สุด โปรตีนแสดงถูกวัดโดยการวิเคราะห์สัญญาณที่จับภาพในไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนใช้พื้นผิว chemiluminescent และ VisionWorksTMLS(วิเคราะห์ซอฟต์แวร์ Upland, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.9 . Western blotเซลล์ lysates ที่มี 30 μกรัมของโปรตีนแยก 10% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตโพลีอะคริลาไมด์เจล แล้ว มันถูกโอนไปยังแผ่นไนโตรเซลลูโลสใน Western blot เครื่องมือ RAD ( ไบโอ , Hercules , แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา ) ที่ถูกปิดกั้นด้วยแผ่นไนโตร 5 % นมไขมันต่ำเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ล้างด้วยน้ำเกลือกับบริษัทนี้ก่อน ( 1mol / ลิตรหรือ 5 NaCl / L mol และ 0.1% Tween 20 ) และบ่มเพื่อค้างคืนกับแอนติบอดี และการ inos glut4 .ไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ล้างด้วยน้ำเกลือด้วย trisbuffered อีกครั้งก่อนตามด้วยการบ่มเพาะด้วยระดับแอนติบอดี ( พืชชนิดหนึ่ง peroxidase และ IgG 1:2000 ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในที่สุด แสดงโปรตีนถูกวัดโดยการวิเคราะห์สัญญาณจับในเมมเบรนไนโตรเซลลูโลสการใช้สาร visionworkstmls chemiluminescent และการวิเคราะห์ซอฟต์แวร์ , ไร่ , CA , USA )