Eight separate tests were carried o

Eight separate tests were carried out to evaluate the selectivity of the system and our ability to determine the number and types of strands in solutions containing mixtures of the different targets (Figs. 2 and 3). The concentrations of the target strands were kept constant for all of these experiments (100 pM each), and the hybridization conditions were as described above. In the first test (Fig. 3, row 1), all spots show the same intense gray color associated with Ag deposition. However, they can be differentiated simply by using the Raman scanning method. Once the spectroscopic fingerprint of the Ag-containing spot has been determined, the correct Raman label and, therefore, target sequence can be identified. To simplify the analysis, we assigned a color (rectangular box) to each Raman-labeled probe (Fig. 2A and Fig. 3B). In the first test (Fig. 3A), all six targets were present, and all showed strong gray-scale values when measured by means of the flatbed scanner as well as the expected Raman fingerprints. In the next seven tests, we systematically removed one or more of the targets to evaluate the suitability of this method for multiplexing. With the single-color gray-scale method one cannot determine if any cross-hybridization has occurred. However, with this “multiple color” scanning Raman method, one can carefully study the SERS spectra of each spot to determine which labels make up each spot. For the experiments described in Fig. 3, where the sequences are very dissimilar, we found that other than the expected spectroscopic probe signature for each target, there were virtually no other detectable Raman lines, indicating no cross-hybridization between different targets and probes. The SERS signal was obtained only from areas of the substrate where the Raman dye-labeled Au particles have initiated Ag formation. Therefore, this “multiple color” scanning Raman detection method does not record background signal due to Ag deposition where Au particles do not exist. This is not the case for the previous gray-scale scanometric approach, especially at ultralow target concentrations (≤50 fM) (1–3). The current unoptimized detection limit of this Raman scanning method is 20 fM (11).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การทดสอบแยกแปดได้ดำเนินการประเมินวิธีของระบบและความสามารถในการตรวจสอบหมายเลขและชนิดของเส้นในการแก้ปัญหาที่ประกอบด้วยส่วนผสมของเป้าหมายต่าง ๆ (มะเดื่อ. 2 และ 3) ความเข้มข้นของเส้นเป้าหมายถูกเก็บไว้คงที่สำหรับทั้งหมดของการทดลองนี้ (100 pM แต่ละ), และเงื่อนไข hybridization อธิบายข้างต้น ในการทดสอบครั้งแรก (รูป 3 แถวที่ 1), ทุกจุดแสดงเข้มสีเทาสีเดียวเกี่ยวข้องกับ Ag สะสม อย่างไรก็ตาม พวกเขาสามารถแยกแยะได้ง่าย ๆ โดยใช้รามันวิธีการสแกน เมื่อได้รับการพิจารณาลายสเปคตรัมของจุดที่ประกอบด้วย Ag สามารถระบุฉลากรามันถูกต้องและ จึง ลำดับเป้าหมาย เพื่อให้ง่ายต่อการวิเคราะห์ เรากำหนดสี (กล่องสี่เหลี่ยม) ให้แต่ละวัดป้ายรามัน (รูป 2A และมะเดื่อ 3B) ในการทดสอบครั้งแรก (รูปที่ 3A), เป้าหมายหกทั้งหมดถูกนำเสนอ และทั้งหมดแสดงให้เห็นว่าค่าสีเทาขนาดเมื่อวัดโดยวิธีแฟลตเบดสแกนเนอร์เป็นรามันคาดลายนิ้วมือ ในการทดสอบเจ็ดถัดไป เราเป็นระบบออกเป้าหมายเพื่อประเมินความเหมาะสมของวิธีการนี้สำหรับมัลติเพล็กซ์แบบอย่างใดอย่างหนึ่ง มีสีเดียวสีเทาขนาดวิธี หนึ่งไม่สามารถกำหนดถ้าข้าม hybridization ใด ๆ เกิดขึ้น อย่างไรก็ตาม ด้วยเหตุนี้ "หลายสี" วิธีรามัน การสแกนหนึ่งสามารถศึกษาสเปกตรัมแคมป์ส์อีลีสซีของแต่ละจุดเพื่อกำหนดป้ายกำกับที่ทำขึ้นแต่ละจุด สำหรับการทดลองที่อธิบายไว้ในรูป 3 ลำดับที่แตกต่างกันมาก เราพบไม่ใช่ลายเซ็นวัดสเปคตรัมที่คาดไว้สำหรับแต่ละเป้าหมาย มีแทบไม่ตรวจรามันบรรทัดอื่น ๆ ไม่มี hybridization ข้ามระหว่างเป้าหมายต่าง ๆ และสามารถแสดง สัญญาณแคมป์ส์อีลีสซีได้รับจากพื้นที่ของพื้นผิวที่อนุภาคย้อมชื่ออูรามันมีจุดเริ่มต้นก่อตัว Ag เท่านั้น ดังนั้น นี้ "หลายสี" รามันตรวจจับวิธีการสแกนบันทึกพื้นหลังสัญญาณเนื่องจากสะสม Ag ที่ Au อนุภาคไม่มีอยู่ นี้ไม่ใช่สำหรับวิธี scanometric สีเทาขนาดก่อนหน้านี้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นกระจายเป้าหมาย (≤50 fM) (1-3) ปัจจุบัน unoptimized การตรวจหาจำนวนวิธีการสแกนนี้รามันมี fM 20 (11)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แปดแยกการทดสอบได้ดำเนินการในการประเมินผลการคัดสรรของระบบและความสามารถของเราในการกำหนดจำนวนและประเภทของเส้นในการแก้ปัญหาที่มีส่วนผสมของเป้าหมายที่แตกต่างกัน (มะเดื่อ. 2 และ 3) ความเข้มข้นของเส้นเป้าหมายถูกเก็บไว้อย่างต่อเนื่องสำหรับทุกการทดลองเหล่านี้ (100 PM แต่ละ) และเงื่อนไขการผสมพันธุ์ที่ถูกอธิบายไว้ข้างต้น ในการทดสอบครั้งแรก (รูปที่. 3 แถวที่ 1) ทุกจุดแสดงสีเดียวกันสีเทารุนแรงที่เกี่ยวข้องกับการสะสม Ag แต่พวกเขาสามารถที่แตกต่างได้ง่ายๆโดยการใช้วิธีการสแกนรามัน เมื่อลายนิ้วมือสเปกโทรสโกของจุด Ag ที่มีได้รับการพิจารณาฉลากรามันที่ถูกต้องและมีเป้าหมายลำดับสามารถระบุได้ เพื่อให้ง่ายต่อการวิเคราะห์เราได้รับมอบหมายให้เป็นสี (กล่องสี่เหลี่ยม) แต่ละสอบสวนรามันติดฉลาก (รูป. 2A และรูป. 3B) ในการทดสอบครั้งแรก (รูป. 3A) ทั้งหกเป้าหมายอยู่ในปัจจุบันและมีค่าสีเทาขนาดแข็งแกร่งเมื่อวัดโดยวิธีการของสแกนเนอร์เช่นเดียวกับที่คาดว่าลายนิ้วมือรามัน ในการทดสอบต่อไปเจ็ดเราเอาออกอย่างเป็นระบบหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งของเป้าหมายในการประเมินความเหมาะสมของวิธีการนี้สำหรับมัลติ ที่มีสีเดียววิธีการสีเทาขนาดหนึ่งไม่สามารถตรวจสอบว่าการผสมพันธุ์ข้ามได้เกิดขึ้น แต่กับเรื่องนี้ "หลายสี" วิธีการสแกนรามันหนึ่งสามารถควรศึกษาสเปกตรัม SERS ของแต่ละจุดเพื่อตรวจสอบว่าป้ายที่ทำขึ้นในแต่ละจุด สำหรับการทดลองที่อธิบายไว้ในรูป 3 ที่ลำดับที่มีแตกต่างกันมากเราพบว่าอื่น ๆ นอกเหนือจากที่คาดว่าลายเซ็นสเปกโทรสโกสอบสวนสำหรับแต่ละเป้าหมายมีอื่น ๆ แทบจะไม่มีสายรามันตรวจพบแสดงให้เห็นไม่มีการผสมพันธุ์ข้ามระหว่างเป้าหมายที่แตกต่างและฟิวส์ สัญญาณ SERS ที่ได้รับจากพื้นที่ของพื้นผิวที่รามันย้อมติดฉลากอนุภาค Au ได้เริ่มต้นการก่อ Ag ดังนั้นนี้ "หลายสี" วิธีการตรวจสอบการสแกนรามันไม่บันทึกสัญญาณพื้นหลังเนื่องจากการสะสม Ag ที่อนุภาค Au ไม่อยู่ กรณีนี้ไม่ได้สำหรับสีเทาขนาด scanometric วิธีการก่อนหน้านี้โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นเป้าหมาย ultralow (≤50 fm) (1-3) ปัจจุบันการตรวจสอบวงเงินไม่ได้เพิ่มประสิทธิภาพของวิธีการสแกนรามันนี้คือ 20 fM (11)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

8 การทดสอบแยกต่างหากเพื่อประเมินสมรรถนะของระบบและความสามารถในการกำหนดจำนวนและประเภทของเส้นในสารละลายที่มีส่วนผสมของเป้าหมายที่แตกต่างกัน ( Figs 2 และ 3 ) ความเข้มข้นของชิ้นงานถักไว้คงที่ทั้งหมดของการทดลองเหล่านี้ ( 100 น. แต่ละ ) , และ เงื่อนไข คือ ( ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ในการทดสอบครั้งแรก ( ภาพที่ 3 แถวที่ 1 ) ทุกจุดแสดงที่รุนแรงเหมือนสีเทาที่เกี่ยวข้องกับ AG ให้การ อย่างไรก็ตาม , พวกเขาสามารถที่แตกต่างเพียงโดยใช้วิธีการสแกนรามัน . เมื่อลายนิ้วมือสเปกของ AG ที่มีจุดที่ได้รับการกำหนดป้ายที่ถูกต้อง รามัน และ ดังนั้น ลำดับเป้าหมายสามารถระบุ เพื่อให้ง่ายต่อการวิเคราะห์ เรากำหนดสี ( กล่องสี่เหลี่ยม ) แต่ละข้อความ ( รูปที่ 2A รามัน probe และมะเดื่อ 3B ) ในการทดสอบครั้งแรก ( รูปที่ 3 ) , ทั้งหมดหกเป้าหมายที่เป็นปัจจุบัน และมีค่าสเกลสีเทาแข็งแรง เมื่อวัดโดยวิธีของสแกนเนอร์ รวมทั้งคาดว่า รามัน ลายนิ้วมือ ในอีกเจ็ดวัด เราสามารถออกหนึ่งหรือมากกว่าของเป้าหมายเพื่อประเมินความเหมาะสมของวิธีการนี้เพื่อการสื่อสาร . สเกลสีเทากับสีเดียววิธีหนึ่งไม่สามารถตรวจสอบว่าข้ามชนิดได้เกิดขึ้น อย่างไรก็ตาม เรื่องนี้หลายคน " สี " สแกน รามัน วิธีหนึ่งที่สามารถ sers รอบคอบศึกษาสเปกตรัมของแต่ละจุดเพื่อตรวจสอบ ซึ่งป้ายที่ทำขึ้นในแต่ละจุด สำหรับการทดลองที่อธิบายไว้ในรูปที่ 3 ซึ่งลำดับมีมากแตกต่างกัน พบว่า นอกจากคาดหัวลายทางสำหรับแต่ละเป้าหมายมีแทบไม่มีอื่น ๆที่ตรวจพบ รามัน บรรทัด ระบุว่า ไม่มีข้ามชนิดระหว่างเป้าหมายที่แตกต่างกันและเครื่องมือตรวจสอบ การ sers สัญญาณได้จากพื้นที่ของพื้นผิวที่ย้อม รามัน ติดป้ายหรืออนุภาคได้ริเริ่มโดยการสร้าง ดังนั้น นี้ " สี " หลายสแกนรามัญวิธีตรวจจับไม่ได้บันทึกสัญญาณเนื่องจาก AG สะสมที่ AU อนุภาคที่ไม่มีพื้นหลัง กรณีนี้ไม่ได้สำหรับก่อนหน้านี้สีเทาขนาด scanometric วิธีการ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ultralow เป้าหมายความเข้มข้น ( ≤ 50 FM ) ( 1 - 3 ) ปัจจุบัน unoptimized ขีดจำกัดของรามันวิธีสแกน 20 FM ( 11 )