Microorganisms and growth condition

Microorganisms and growth conditions. Pantoea agglomerans 33.1, isolated
from Eucalyptus grandis plants (58), and its derivative tagged strain,
33.1::pNKGFP (25), as well as Escherichia coli derivatives were routinely
grown at 28°C and 37°C, respectively, on Luria-Bertani (LB) medium
(67). The tagged strain 33.1::pNKBOR was obtained according to the
methodology described by Ferreira et al. (25). All of the strains (Table 1)
were stored in 20% glycerol at
80°C. The plasmids were propagated and
isolated from E. coli DH5 pir or Top10 and purified with a plasmid
miniprep kit (Mobio) according to the manufacturer’s recommendations.
Plant material. The sugarcane seedlings (varieties SP80-1842 and
SP80-3240) were initially cultivated under in vitro conditions. The seedlings
were supplied by Sabrina Moutinho Chabregas (CTC, Piracicaba,
SP, Brazil).
Cross-colonization under gnotobiotic assays. For plant inoculation,
the bacterial cells were transferred to 50 ml of LB medium supplemented
with kanamycin (100 g/ml) and incubated at 28°C under shaking conditions
(150 rpm) until the late log phase. The cells were harvested (by
centrifugation at 4,500  g for 15 min) and washed with phosphatebuffered
saline (PBS) at pH 6.5, and the cell density was adjusted to 105
CFU/ml. The SP80-1842 sugarcane seedlings were cultured in 50-ml tubes
containing 7 ml of agar-free MS medium (51) with the endophytic bacteria
at 28°C under 16-h photoperiods. In the control plants, PBS was used
in place of the bacterial suspension. Eighteen days after bacterial inoculation
(DAI), three plants per treatment were sampled for fluorescence microscopy
(FO) and scanning electron microscopy (SEM) analysis. The
reisolation and qPCR procedures were performed on 5 plants at 5 and
14 DAI.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จุลินทรีย์และสภาพการเจริญเติบโต Agglomerans Pantoea 33.1 แยกต่างหากจากยูคาลิปตัส grandis พืช (58), และอนุพันธ์ของแท็กต้องใช้33.1::pNKGFP (25), ตลอดจนตราสารอนุพันธ์ Escherichia coli ได้เป็นประจำปลูกที่ 28° C และ 37° C ตามลำดับ ในสื่อ Luria-Bertani (ปอนด์)(67) . 33.1::pNKBOR ต้องใช้แท็กได้รับตามวิธีที่อธิบายไว้โดย Ferreira et al. (25) ทุกสายพันธุ์ (ตารางที่ 1)ถูกเก็บไว้ในกลีเซอร 20% ที่ 80 องศาเซลเซียส Plasmids ถูกเผยแพร่ และแยกต่างหากจากกัน DH5 E. coli หรือ Top10 และบริสุทธิ์ที่ มี plasmid เป็นชุด miniprep (Mobio) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตพืชวัสดุ กล้าไม้อ้อย (พันธุ์ SP80-1842 และSP80-3240) ได้เริ่ม cultivated ภายใต้เงื่อนไขในการ กล้าไม้ได้จัดทำ โดย Chabregas Moutinho Sabrina (CTC, PiracicabaSP บราซิล)ข้ามสนามภายใต้ gnotobiotic assays สำหรับพืช inoculationเซลล์แบคทีเรียถูกโอนย้ายไป 50 ml ของปอนด์กลางเสริมกับกานามัยซิน (100 g/ml) และ incubated ที่ 28° C ภายใต้เงื่อนไขการสั่น(150 รอบต่อนาที) จนถึงขั้นตอนการบันทึกล่าช้า เซลล์ถูกเก็บเกี่ยว (โดยcentrifugation ที่ g 4500 สำหรับ 15 นาที) และล้าง ด้วย phosphatebufferedน้ำเกลือ (PBS) ที่ pH 6.5 และความหนาแน่นเซลล์ถูกปรับ 105CFU/ml กล้าไม้อ้อย SP80 1842 มีอ่างในหลอด 50 mlประกอบด้วย 7 ml ของ agar ฟรี MS ขนาดกลาง (51) กับแบคทีเรีย endophyticที่ 28° C ภายใต้ 16 h photoperiods ในโรงงานควบคุม ใช้ PBSแทนการระงับเชื้อแบคทีเรีย วันที่สิบแปดหลัง inoculation แบคทีเรีย(ได), พืชสามต่อรักษามีความสำหรับ fluorescence microscopy(โฟ) และการสแกน microscopy อิเล็กตรอน (SEM) วิเคราะห์ ที่reisolation และ qPCR ดำเนินใน 5 โรงที่ 5 และได 14

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จุลินทรีย์และเงื่อนไขในการเจริญเติบโต Pantoea agglomerans 33.1 แยก
จากยูคาลิป grandis พืช (58) และอนุพันธ์ของสายพันธุ์ที่ติดแท็ก,
33.1 :: pNKGFP (25) เช่นเดียวกับ Escherichia coli ถูกอนุพันธ์ประจำ
เติบโตที่ 28 องศาเซลเซียสและ 37 องศาเซลเซียสตามลำดับ Luria- Bertani (LB) ขนาดกลาง
(67) สายพันธุ์ที่ติดแท็ก 33.1 :: pNKBOR ที่ได้รับเป็นไปตาม
วิธีการอธิบายโดย Ferreira และคณะ (25) ทุกสายพันธุ์ (ตารางที่ 1)
ได้รับการจัดเก็บไว้ในกลีเซอรอล 20% ที่ 80 ° C พลาสมิดที่ถูกแพร่กระจายและ
แยกได้จาก E. coli DH5? PIR หรือ Top10 และบริสุทธิ์ที่มีพลาสมิด
ชุด miniprep (Mobio) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต.
วัสดุพืช ต้นกล้าอ้อย (พันธุ์ SP80-1842 และ
SP80-3240) ได้รับการปลูกฝังในขั้นต้นภายใต้เงื่อนไขในหลอดทดลอง ต้นกล้าที่
ถูกจัดทำโดยซาบ Chabregas มูตินโญ่ (CTC, Piracicaba,
SP, ประเทศบราซิล).
การล่าอาณานิคมข้ามภายใต้การตรวจ gnotobiotic สำหรับการฉีดวัคซีนพืช
เซลล์แบคทีเรียถูกย้ายไป 50 มล. ของกลาง LB เสริม
กับ KANAMYCIN (100 g / ml) และบ่มที่อุณหภูมิ 28 ° C ภายใต้เงื่อนไขสั่น
(150 รอบต่อนาที) จนถึงขั้นตอนการเข้าสู่ระบบในช่วงปลาย เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยว (โดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 4,500? กรัมเป็นเวลา 15 นาที) และล้างด้วย phosphatebuffered
น้ำเกลือ (PBS) ที่ pH 6.5 และความหนาแน่นของเซลล์ได้รับการปรับให้ 105
CFU / ml SP80-1842 ต้นกล้าอ้อยมาเพาะเลี้ยงในหลอด 50 มล.
มี 7 มลสูตร MS วุ้นฟรี (51) ที่มีเชื้อแบคทีเรียเอนโดไฟต์
ที่ 28 ° C ภายใต้ photoperiods 16 ชั่วโมง ในพืชควบคุมพีบีเอสถูกนำมาใช้
ในสถานที่ของการระงับแบคทีเรีย สิบแปดวันหลังจากการฉีดวัคซีนเชื้อแบคทีเรีย
(DAI) สามต้นต่อการรักษาทำการเก็บตัวอย่างสำหรับกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
(FO) และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (SEM) การวิเคราะห์
reisolation qPCR และวิธีการดำเนินการในวันที่ 5 โรงที่ 5 และ
14 DAI

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จุลินทรีย์และสภาวะการเจริญเติบโต pantoea agglomerans 33.1 , แยก
จากยูคาลิปตัสสักพืช ( 58 ) และอนุ Tagged ความเครียด
33.1 : : pnkgfp ( 25 ) เช่นเดียวกับ Escherichia coli ซึ่งถูกตรวจ
โตที่ 28 ° C และ 37 ° C ตามลำดับ เมื่อลุเรียแบร์ตานิ ( ปอนด์ ) (
( 67 ) ที่ติดแท็กสายพันธุ์ 33.1 : : pnkbor ได้ตามวิธีการที่อธิบายโดย
Ferreira et al . ( 25 )ทุกสายพันธุ์ ( ตารางที่ 1 )
ถูกเก็บไว้ใน 20 % กลีเซอรอลที่
80 องศา และมีทั้งพลาสมิดที่แยกจากเชื้อ E . coli DH5
 PIR หรือ Top10 และบริสุทธิ์กับชุด miniprep พลาสมิด
( mobio ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต
วัสดุพืช ( sp80-1842 ต้นกล้าพันธุ์อ้อยและ
sp80-3240 ) เริ่มต้นที่ปลูกภายใต้สภาพปลอดเชื้อ . ต้นกล้า
ถูกจัดโดย Sabrina moutinho chabregas ( CTC , ปิราคิคาบ้า
, SP , ประเทศบราซิล ) .
ข้ามอาณานิคมภายใต้ gnotobiotic ) . สำหรับการปลูกพืช
เซลล์แบคทีเรียที่ถูกโอนไปยัง 50 ml ของปอนด์ MS
กับ kanamycin ( 100  กรัม / มิลลิลิตร ) และบ่มที่อุณหภูมิ 28 องศา C ภายใต้สั่นเงื่อนไข
( 150 รอบต่อนาที ) จนถึงขั้นตอนบันทึกสาย เซลล์เก็บ (
3 ใน 4 500 กรัมสำหรับ 15 นาทีและล้างด้วยน้ำเกลือ phosphatebuffered
( PBS ) ที่พีเอช 6.5 และความหนาแน่นเซลล์ปรับ 105 CFU / ml
sp80-1842 อ้อยต้นกล้าที่เพาะเลี้ยงในหลอดบรรจุ 50 มล.
7 ml ของวุ้นฟรี MS ( 51 ) กับแบคทีเรียเอนโดไฟท์
ที่ 28 ° C ภายใต้ 16-h photoperiods . ในโรงงานควบคุม , PBS ใช้
ในสถานที่ของการระงับแบคทีเรียแปดวันหลังจากแบคทีเรียเชื้อ
( ได ) , สามต้นต่อ การรักษา จำนวนสำหรับกล้องจุลทรรศน์
( FO ) และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( SEM ) การวิเคราะห์ ขั้นตอน และ qpcr
reisolation จำนวน 5 โรงที่ 5
14 ได้