2. Materials and methods2.1. Collec

2. Materials and methods
2.1. Collection of samples
Total of one hundred and twelve samples of withered pigeon
droppings were collected from 12 different sites within the city
(Figure 1b), over a period of six months (July to December, 2014).
The samples were placed in sterile universal bottles and processed in
the same day of sampling.
2.2. Isolation and identification of C. neoformans and other
fungi
The method described by Xavier et al. was adapted as follows:
About 10 g of withered pigeon droppings from each site were
transferred to Erlenmeyer flasks containing a saline solution (0.9%)
with chloramphenicol (200 mg/L), achieving 1:10 dilution (w/v)
[9]. The mixture was shaken for 20 min and allowed to settle for 30
min. Aliquots of 0.5 mL supernatant were streaked on esculin agar
(Oxoid, Basingstoke, UK) for isolation of C. neoformans and on
Sabouraud dextrose agar (SDA) (Oxoid), for isolation of other fungal
species[10]. The plates were then incubated at 37 °C for 10 days.
Each inoculated plate was examined daily for yeast growth. Colonies
with a mucous appetence and those with brown pigmentation
on esculin agar (Oxoid) were selected and subcultured on SDA
slants to obtain pure cultures. For identification of C. neoformans,
morphological and biochemical tests were used. The presence of
capsule on India ink preparation was considered as one of the bases
of C. neoformans identification and confirmed by melanin synthesis
on esculin agar (Oxoid), urease production on urea agar (Oxoid), and
ability to grow at 37 °C[9,11]. The other fungal species growing on
SDA were identified microscopically.
2.3. Antifungal susceptibility testing
Agar disk diffusion method described by Elbanna et al. was
mainly applied, and five antifungal compounds were purchased
from different pharmacies in Makkah city to examine the antifungal
susceptibility patterns of C. neoformans and other medically
important fungal species that were recovered from pigeon feces[12].
These antifungal drugs were: Batrafen (ciclopirox–olamine),
Canasten (clotrimazole), Flucoral (fluconazole), Fungican
(fluconazole) and Mycosat (nystatin). The tested species were
Aspergillus flavus (A. flavus), Candida albicans (C. albicans),
C. neoformans, Rhizopus stolonifer (R. stolonifer), Rhodotorula
mucilaginosa (R. mucilaginosa), Syncephalastrum racemosum (S.
racemosum), Trichoderma harzianum (T. harzianum), Trichosporon
asahii (T. asahii) and Trichosporon mucoides (T. mucoides). Potato
dextrose agar plates were inoculated with each tested species
by swabbing the fresh cultures onto the surface of agar plates.
Sterilized filter paper discs (6 mm) were saturated with 100 µg/
mL of each tested antifungal drug and subsequently dried at 40 °C.
The dried disks were transferred to the surface of the inoculated
plates in triplicates. Plates were incubated for 36 h at the optimum
temperature for each fungal species and their sensitivity to the
antifungal compounds was determined by measuring the diameter of
inhibition zones (mm). Sterilized water without tested compounds
was used as a control

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. Materials and methods2.1. Collection of samplesTotal of one hundred and twelve samples of withered pigeondroppings were collected from 12 different sites within the city(Figure 1b), over a period of six months (July to December, 2014).The samples were placed in sterile universal bottles and processed inthe same day of sampling.2.2. Isolation and identification of C. neoformans and otherfungiThe method described by Xavier et al. was adapted as follows:About 10 g of withered pigeon droppings from each site weretransferred to Erlenmeyer flasks containing a saline solution (0.9%)with chloramphenicol (200 mg/L), achieving 1:10 dilution (w/v)[9]. The mixture was shaken for 20 min and allowed to settle for 30min. Aliquots of 0.5 mL supernatant were streaked on esculin agar(Oxoid, Basingstoke, UK) for isolation of C. neoformans and onSabouraud dextrose agar (SDA) (Oxoid), for isolation of other fungalspecies[10]. The plates were then incubated at 37 °C for 10 days.Each inoculated plate was examined daily for yeast growth. Colonieswith a mucous appetence and those with brown pigmentationon esculin agar (Oxoid) were selected and subcultured on SDAslants to obtain pure cultures. For identification of C. neoformans,morphological and biochemical tests were used. The presence ofcapsule on India ink preparation was considered as one of the basesof C. neoformans identification and confirmed by melanin synthesisใน esculin agar (Oxoid), ผลิตยูใน urea agar (Oxoid), และความสามารถในการเติบโตที่ 37 ° C [9,11] พันธุ์เชื้อราอื่น ๆ ที่เติบโตในSDA ได้ระบุ microscopically2.3. อาการภูมิไวรับทดสอบมีวิธีแพร่ดิสก์ agar อธิบายโดย Elbanna et al.ส่วนใหญ่ใช้ และซื้อห้าสารต้านเชื้อราจากร้านต่าง ๆ ในเมืองมักกะห์เพื่อตรวจสอบการต้านเชื้อรารูปแบบภูมิไวรับของ C. neoformans และอื่น ๆ ทางการแพทย์สำคัญเชื้อราสายพันธ์ที่ถูกกู้คืนมาจากอุจจาระของนกพิราบ [12]ยาต้านเชื้อราเหล่านี้ได้: Batrafen (ciclopirox – olamine),Canasten (clotrimazole), Flucoral (fluconazole), Fungican(fluconazole) และ Mycosat (nystatin) สายพันธุ์ทดสอบได้Aspergillus flavus (A. flavus), Candida albicans (C. albicans),C. neoformans, Rhizopus stolonifer (R. stolonifer), Rhodotorulamucilaginosa (R. mucilaginosa), Syncephalastrum racemosum (S.racemosum), Trichoderma harzianum (ต. harzianum), Trichosporonasahii (ต. asahii) และ Trichosporon mucoides (ต. mucoides) มันฝรั่งแผ่น agar ขึ้นได้ inoculated กับแต่ละชนิดผ่านการทดสอบโดย swabbing วัฒนธรรมสดลงบนผิวของ agar แผ่นกระดาษกรอง sterilized ดิสก์ (6 mm) อิ่มตัวไป ด้วย 100 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง /mL ของแต่ละทดสอบยาต้านเชื้อรา และแห้งในเวลาต่อมาที่ 40 องศาเซลเซียสมีการถ่ายโอนดิสก์แห้งเพื่อผิวที่ inoculatedแผ่นใน triplicates แผ่นถูก incubated สำหรับ h 36 ที่มีประสิทธิภาพสูงสุดอุณหภูมิในแต่ละสายพันธุ์เชื้อราและความไวของการสารต้านเชื้อราถูกกำหนด โดยการวัดเส้นผ่าศูนย์กลางของยับยั้งการเปลี่ยนโซน (mm) Sterilized น้ำโดยไม่ต้องผ่านการทดสอบสารใช้เป็นตัวควบคุม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 คอลเลกชันของกลุ่มตัวอย่างทั้งหมด 112 ตัวอย่างนกพิราบเหี่ยวมูลที่ถูกเก็บรวบรวมจาก12 เว็บไซต์ที่แตกต่างกันในเมือง(รูปที่ 1 ข) ในช่วงหกเดือน (กรกฎาคมถึงธันวาคม 2014). กลุ่มตัวอย่างที่ถูกวางไว้ในขวดสากลผ่านการฆ่าเชื้อ และประมวลผลในวันเดียวกันของการสุ่มตัวอย่าง. 2.2 การแยกและบัตรประจำตัวของ neoformans ซีและอื่น ๆ ที่เชื้อราวิธีการอธิบายโดยซาเวียร์และอัล ถูกนำมาดัดแปลงเป็นดังนี้: ประมาณ 10 กรัมของมูลนกพิราบเหี่ยวจากแต่ละเว็บไซต์ได้รับการถ่ายโอนไปยังErlenmeyer ขวดที่มีน้ำเกลือ (0.9%) มี chloramphenicol (200 มก. / ลิตร) บรรลุ 01:10 เจือจาง (w / v) [9] . ส่วนผสมที่ถูกเขย่าเป็นเวลา 20 นาทีและได้รับอนุญาตที่จะชำระเป็นเวลา 30 นาที aliquots 0.5 มิลลิลิตรใสถูกลายบน esculin วุ้น(Oxoid เบซิงสหราชอาณาจักร) สำหรับการแยก neoformans ซีและSabouraud agar เดกซ์โทรส (SDA) (Oxoid) สำหรับการแยกเชื้อราอื่น ๆสายพันธุ์ [10] แผ่นแล้วถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วัน. แต่ละแผ่นเชื้อถูกตรวจสอบทุกวันสำหรับการเจริญเติบโตของยีสต์ อาณานิคมกับ appetence เมือกและผู้ที่มีผิวคล้ำสีน้ำตาลบนesculin วุ้น (Oxoid) ได้รับการคัดเลือกและการเลี้ยงใน SDA slants ที่จะได้รับเชื้อบริสุทธิ์ สำหรับบัตรประจำตัวของ neoformans ซี, การทดสอบทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีถูกนำมาใช้ การปรากฏตัวของแคปซูลอินเดียเตรียมหมึกได้รับการยอมรับว่าเป็นหนึ่งในฐานของประชาชนC. neoformans และรับการยืนยันจากการสังเคราะห์เมลานินในesculin วุ้น (Oxoid), การผลิต urease ในอาหารเลี้ยงเชื้อยูเรีย (Oxoid) และความสามารถในการเติบโตที่37 ° C [ 9,11] เชื้อราชนิดอื่น ๆ ที่เจริญเติบโตบนSDA ถูกระบุกล้องจุลทรรศน์. 2.3 การทดสอบความไวต่อยาต้านเชื้อราวุ้นวิธีการแพร่กระจายดิสก์อธิบายโดย Elbanna et al, ถูกใช้เป็นหลักห้าและสารต้านเชื้อราที่ซื้อมาจากร้านขายยาที่แตกต่างกันในเมืองเมกกะเพื่อตรวจสอบเชื้อรารูปแบบความไวของneoformans ซีและอื่น ๆ ที่ทางการแพทย์ชนิดของเชื้อราที่สำคัญที่ได้รับการกู้คืนจากอุจจาระนกพิราบ[12]. เหล่านี้เป็นยาเสพติดเชื้อรา: Batrafen (ciclopirox -olamine) Canasten (clotrimazole) Flucoral (fluconazole) Fungican (fluconazole) และ Mycosat (nystatin) สายพันธุ์ที่ได้รับการทดสอบเป็นเชื้อรา Aspergillus flavus (A. flavus), Candida albicans (C. albicans) ซี neoformans, Rhizopus stolonifer (ร stolonifer) Rhodotorula mucilaginosa (ร mucilaginosa) Syncephalastrum racemosum (เอสracemosum) เชื้อรา Trichoderma harzianum (เชื้อราไตรโคเด) Trichosporon asahii (ที asahii) และ mucoides Trichosporon (ที mucoides) มันฝรั่งแผ่นวุ้นเดกซ์โทรสถูกเชื้อกับแต่ละการทดสอบสายพันธุ์โดยswabbing วัฒนธรรมสดลงบนพื้นผิวของแผ่นวุ้น. ฆ่าเชื้อแผ่นกระดาษกรอง (6 มม) ได้รับการอิ่มตัวกับ 100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรของแต่ละการทดสอบยาเสพติดเชื้อราและแห้งในเวลาต่อมา 40 ° C ดิสก์แห้งถูกโอนไปยังพื้นผิวของเชื้อแผ่นใน triplicates แผ่นถูกบ่มเป็นเวลา 36 ชั่วโมงที่เหมาะสมอุณหภูมิสำหรับสายพันธุ์เชื้อราแต่ละคนและความไวของพวกเขาเพื่อสารต้านเชื้อราที่ถูกกำหนดโดยการวัดขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนยับยั้ง(mm) น้ำฆ่าเชื้อโดยไม่ต้องผ่านการทดสอบสารที่ใช้เป็นตัวควบคุม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การเก็บตัวอย่าง
รวมหนึ่งร้อยสิบสองตัวอย่างหนึ่งของนกพิราบ
มูลรวบรวมจาก 12 เว็บไซต์ที่แตกต่างกันภายในเมือง
( รูปที่ 1A ) เป็นเวลา 6 เดือน ( กรกฎาคม - ธันวาคม 2557 ) .
ตัวอย่างถูกวางไว้ในขวดสากลเป็นหมัน และประมวลผล
วันเดียวของคน
2.2 . การแยกและจำแนก Cneoformans และเชื้อราอื่นๆ

วิธีอธิบายโดยซาเวียร์ et al . ถูกดัดแปลงเป็นดังนี้ :
ประมาณ 10 กรัม จากแต่ละเว็บไซต์มีมูลนกพิราบเหี่ยว
โอนเออร์เลนเมเยอร์ flasks ประกอบด้วยสารละลาย น้ำเกลือ ( 0.9% )
กับ chloramphenicol ( 200 mg / L ) หรือเจือจาง 1 : 10 ( w / v )
[ 9 ] ส่วนผสมที่ถูกเขย่าเป็นเวลา 20 นาทีและอนุญาตให้ตั้งถิ่นฐาน 30
มินเฉยๆของ 05 มิลลิลิตร นำลายใน esculin วุ้น
( oxoid Basingstoke , สหราชอาณาจักร , ) ในการแยกจากสายและ
sabouraud dextrose agar ( SDA ) ( oxoid ) เพื่อแยกชนิดของเชื้อรา
อื่น [ 10 ] จาน แล้วบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 10 วัน แต่ละจานถูกตรวจสอบทุกวัน
ปลูกสำหรับการเจริญเติบโตของยีสต์ อาณานิคม
ด้วยเมือก และผู้ที่มีความต้องการ
สีสีน้ำตาลใน esculin ( oxoid ) การคัดเลือกและ subcultured ใน sda
slants ได้รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ สำหรับประชาชนจากสาย
, ลักษณะทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีแบบใช้ การปรากฏตัวของ
แคปซูลการเตรียมหมึกอินเดียถือว่าเป็นหนึ่งของฐาน
จากสายรหัสและยืนยันโดยการสังเคราะห์เมลานินบน esculin
( oxoid ) ที่มีการผลิตยูเรีย (
oxoid )ความสามารถในการเติบโตที่ 37 ° C [ 9,11 ] เชื้อราชนิดอื่น ๆที่เติบโตในการก่อสร้างระบุผล
.
2.3 ในกลุ่มทดสอบ
วุ้นดิสก์วิธีอธิบายโดยการแพร่ elbanna et al . คือ
ส่วนใหญ่ใช้และห้าในสารประกอบที่ถูกซื้อจากร้านต่างๆ ในเมืองมักกะฮฺ

ศึกษาในรูปแบบความไวจากสายสมใน
และอื่น ๆที่สำคัญเชื้อราชนิดที่พบจากนกพิราบขี้ [ 12 ] .
ยาเชื้อราเหล่านี้ : batrafen ( ciclopirox – olamine )
canasten ( แพศยา ) flucoral ( ยา ) , fungican
( ยา ) และ mycosat ( นัยสะแตติน ) การทดสอบชนิด Aspergillus flavus
( A . flavus ) ( C . albicans Candida albicans ) ,
c neoformans เชื้อรา , stolonifer ( R . stolonifer ) mucilaginosa Rhodotorula
( Rmucilaginosa ) syncephalastrum racemosum ( S .
racemosum ) , Trichoderma harzianum ( T . harzianum ) ได้
asahii ( T . asahii ) และได้ mucoides ( T . mucoides ) มันฝรั่ง
dextrose agar แผ่นปลูกเชื้อแต่ละสายพันธุ์ โดยทดสอบกับ
ซับมือวัฒนธรรมสดลงบนพื้นผิวของแผ่นวุ้น .
ฆ่าเชื้อแผ่นกระดาษกรอง ( 6 มม. ) กับ 100 g /
µอิ่มตัวมิลลิลิตรของแต่ละการทดสอบยาต้านเชื้อราและต่อมาอบที่อุณหภูมิ 40 องศา อบแห้ง
ดิสก์ที่ถูกโอนไปยังพื้นผิวของแผ่นปลูก
3 ซ้ำ . จานถูกบ่มสำหรับ 36 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับแต่ละชนิดของเชื้อรา

และความไวต่อสารป้องกันเชื้อราถูกกำหนดโดยการวัดเส้นผ่านศูนย์กลางของ
ยับยั้งโซน ( มิลลิเมตร ) ฆ่าเชื้อน้ำโดยไม่ต้องทดสอบสารประกอบ
ถูกใช้เป็นตัวควบคุม