5. Determine the live weight of eac

5. กำหนดน้ำหนักสดของเมาส์แต่ละก่อนฉีดและบันทึกแต่ละ ทำเครื่องหมายแต่ละสัตว์เพื่อแยกความแตกต่างในวันต่อมา6. คำนวณหาปริมาตรของ ENU สำหรับฉีดขึ้นอยู่กับปริมาณที่ต้องการ สำหรับ 100 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักตัวเมาส์ ENU กิโลกรัม การคำนวณเป็นดังนี้:สูตรที่ 0.72 เป็น OD398nm 1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร และ 5 เป็นตัวเจือจาง (ดูขั้นตอน 3-4)ปริมาตรของ ENU ฉีด (mL) =เมาส์×น้ำหนัก (กรัม) Xความเข้มข้นของโซลูชัน ENU ควรให้ < 1 mL จะฉีดเข้าไปในสัตว์แต่ละสายพันธุ์ inbred ต่าง ๆ ของหนูตอบสนองแตกต่างกันเพื่อกำหนดปริมาณของ ENU ในทำนองเดียวกัน ต่างกันปริมาณของ ENU ให้อัตราการกลายพันธุ์แตกต่างกัน ในการผลิตอัตราการกลายพันธุ์สูงสุด ยอดเงินที่เหมาะสมสำหรับหนู C57BL/6J เป็นปริมาณรายสัปดาห์ที่สามของ 100 มิลลิกรัม/กิโลกรัมน้ำหนักตัว ยาเดี่ยวมีประสิทธิภาพคือ 250 มิลลิกรัม/กิโลกรัม โปรโตคอลสำหรับปริมาณประสิทธิภาพสำหรับสายพันธุ์ inbred ต่าง ๆ อ้างอิงในการอภิปราย7. ในสารเคมีมีประสิทธิภาพดูดไอสาร จัดการที่เหมาะสมจำนวน ENU intraperitoneally กับเมาส์แต่ละสัตว์อาจปรากฏสั่น และง่วงสำหรับ ~ 30 นาทีหลังฉีดเนื่องจากแอลกอฮอล์ ควรใช้เวลา ~ 1 h ฉีดหนู 30ยกเลิกการเรียกและกำจัด ENU8. การหกรั่วไหลทั้งหมดทำความสะอาด และแช่อุปกรณ์ (beakers, vials ฯลฯ) และถุงมือมาไปยังฝั่ง ENU ด้วยโซลูชันยกทั้งหมด ดึงยกโซลูชันเป็นเข็มทั้งหมดที่ได้รับกับ ENU ย้ายสินค้าบำบัดในถุงพลาสติก และยกเลิกเสีย ยกวิธี ENU เหลือ และละทิ้งอย่างเหมาะสม9. ฉีดน้อย 50 mL ของยกลง ENU เหลือในภาชนะ ISOPAC ปล่อยในฮูดโตนดเคมี สัมผัสกับไฟ น้อย 24 h10. เอาตราประทับจากคอนเทนเนอร์ ISOPAC และละทิ้ง inactivated ENU เป็นคอนเทนเนอร์เสียอันตรายสารเคมี บันทึกอย่างเหมาะสม ล้างภาชนะ ISOPAC กับ H2O และยกเลิกเนื้อหาในคอนเทนเนอร์เสียอันตรายสารเคมี ละทิ้งคอนเทนเนอร์ ISOPAC ว่างเปล่าในแก้วเสีย11. ให้หนูในสารเคมีมีประสิทธิภาพดูดสำหรับอย่างน้อย 24 ชมหลังฉีด หรือเปลี่ยนเตียงน้อย 24 ชมหลังจากฉีดลงในถุงพลาสติกที่ประกอบด้วยกระดาษที่อิ่มตัวไป ด้วยยกโซลูชั่น (นี้มักจะต้องทำเครื่องหมายปากกาที่ประกอบด้วยสัตว์เลี้ยงบำบัด)เพศชายการกลายพันธุ์การผสมพันธุ์12. หลังจากฉีด ชายผ่านรอบระยะเวลาของภาวะมีบุตรยากที่ยากลืม ~ 10-12 wk. ตั้งชายในกรงกับหญิง 8-10 wk หลังจากการฉีดครั้งสุดท้ายเพื่อประเมินการฟื้นตัวของความอุดมสมบูรณ์ดูการแก้ไขปัญหา13. เลือกแผนการผสมพันธุ์ที่เหมาะสม ตามการกลายพันธุ์ที่น่าสนใจแผนงานการปรับปรุงพันธุ์จะขึ้นอยู่กับชนิดของการกลายพันธุ์การศึกษา เช่น หลัก recessive หรือปรับเปลี่ยน (ดูคำอธิบาย) วางแผนการกู้คืน gametes ประมาณ 50 ต่อเพศชายหลักหรือปรับเปลี่ยนกลายพันธุ์ และ gametes ประมาณ 30 ต่อเพศชายสำหรับแบบ recessive14. Use rotation matings (see Fig. 1) to mate the males according to the breeding scheme chosen in Step 13. Mate the males to a new female (or two new females, depending upon animal protocol) each week for 6-7 wk, until the appropriate number of gametes has been obtained. Set up each new cage as it is needed each week.

For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.For yourself.