Combining features of previously re

Combining features of previously reported protocols (3,13, 22) and our own modifications, we have developed a simple and reliable myocyte isolation method that greatly improves the yield, cell quality, and reproducibility of cardiomyocytes isolated from adult mice (see methods for details). With this method, we routinely obtained a high yield (5.3 ± 0.5 × 106 cells/left ventricle, n = 15) and high percentage (83.8 ± 2.5%, n = 12) of rod-shaped myocytes that were suitable not only for acute functional studies but, more importantly, for short-term culture and gene transfer (see Highly efficient adenovirus-directed gene transfer). Figure 2 shows a transillumination image of freshly isolated cardiomyocytes from the left ventricle of a wild-type C57B16/J mouse. Most of these myocytes were quiescent at physiological concentrations of extracellular Ca2+ (1–2 mM) and, when electrically stimulated at 0.5 Hz at room temperature, generated a characteristic negative staircase of contraction (data not shown), followed by a stable steady-state contraction (3.23 ± 0.21% of diastolic cell length,n = 31). Similar results were obtained for myocytes from adult mice (2–4 mo old) of other strains, including 129SvJ, DBA/2, and FVB/N.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวมคุณสมบัติของก่อนหน้านี้รายงานโพรโทคอล (3,13, 22) และการปรับเปลี่ยนของเราเอง เราได้พัฒนาวิธีการแยก myocyte ง่าย และเชื่อถือได้ที่ช่วยเพิ่มผลผลิต คุณภาพของเซลล์ และทำ cardiomyocytes แยกจากผู้ใหญ่หนู (ดูวิธีสำหรับรายละเอียด) ด้วยวิธีนี้ เราเป็นประจำได้ผลผลิตสูง (5.3 ± 0.5 × 106 เซลล์/ซ้ายอวัยวะกลวง n = 15) และเปอร์เซ็นต์สูง (83.8 ± 2.5%, n = 12) ของ myocytes รูปก้านที่เหมาะสำหรับการศึกษาทำงานเฉียบพลันไม่เพียงแต่ สำคัญ ระยะสั้นวัฒนธรรมและยีนโอน (ดูการถ่ายทอดยีนกำกับ adenovirus มีประสิทธิภาพสูง) รูปที่ 2 แสดงรูป transillumination ของ cardiomyocytes สดแยกจากอวัยวะกลวงซ้ายของเมาส์ C57B16/J ป่าชนิด ส่วนใหญ่ของ myocytes เหล่านี้ได้นิ่งที่ทางสรีรวิทยาความเข้มข้นของสาร Ca2 + (1 – 2 มม.) และ เมื่อกระตุ้นด้วยไฟฟ้าที่ 0.5 Hz อุณหภูมิห้อง สร้างบันไดลักษณะเชิงลบของการหด (ไม่แสดงข้อมูล) ตาม ด้วยการหดตัวเสถียรเสถียร (3.23 ± 0.21% ของความยาวเซลล์ diastolic, n = 31) ได้รับผลที่คล้ายกันสำหรับ myocytes จากผู้ใหญ่หนู (อายุ 2 – 4 mo) ของสายพันธุ์อื่น ๆ รวม ทั้ง 129SvJ, DBA/2, FVB/N.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมคุณลักษณะของโปรโตคอลรายงานก่อนหน้านี้ (3,13, 22) และการปรับเปลี่ยนของเราเองเราได้มีการพัฒนาวิธีการแยก myocyte ง่ายและน่าเชื่อถือที่ช่วยเพิ่มผลผลิตที่มีคุณภาพมือถือและการทำสำเนาของ cardiomyocytes แยกจากหนูผู้ใหญ่ (ดูรายละเอียดวิธีการ ) ด้วยวิธีนี้เราเป็นประจำได้รับผลตอบแทนสูง (5.3 ± 0.5 × 106 เซลล์ / ช่องซ้าย, N = 15) และร้อยละที่สูง (83.8 ± 2.5%, N = 12) ของ myocytes รูปแท่งที่มีความเหมาะสมไม่เพียง แต่สำหรับเฉียบพลัน การศึกษาการทำงาน แต่ที่สำคัญกว่าวัฒนธรรมระยะสั้นและการถ่ายโอนยีน (ดูการถ่ายโอนยีน adenovirus กำกับที่มีประสิทธิภาพสูง) รูปที่ 2 แสดงให้เห็นภาพของ transillumination cardiomyocytes แยกสดใหม่จากช่องทางด้านซ้ายของป่าชนิด C57B16 / J เมาส์ ส่วนใหญ่เหล่านี้เป็น myocytes นิ่งที่ระดับความเข้มข้นทางสรีรวิทยาของ extracellular Ca2 + (1-2 มิลลิเมตร) และเมื่อถูกกระตุ้นด้วยไฟฟ้าที่ 0.5 เฮิร์ตซ์ที่อุณหภูมิห้องที่สร้างบันไดเชิงลบลักษณะของการหดตัว (ไม่ได้แสดงข้อมูล) ตามด้วยมีเสถียรภาพมั่นคงของรัฐ การหดตัว (3.23 ± 0.21% ของความยาวของเซลล์ diastolic, n = 31) ผลที่คล้ายกันที่ได้รับสำหรับ myocytes จากหนูผู้ใหญ่ (MO 2-4 ปี) ของสายพันธุ์อื่น ๆ รวมทั้ง 129SvJ, DBA / 2 และ FVB / N

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รวมคุณสมบัติของรายงานก่อนหน้านี้โปรโตคอล ( 3,13 , 22 ) และการแก้ไขของเราเอง เราได้พัฒนาวิธีที่ง่ายและน่าเชื่อถือ myocyte แยกช่วยเพิ่มผลผลิต คุณภาพ เซลล์ และ กระชับ cardiomyocytes แยกจากหนูผู้ใหญ่ ( ดูวิธีการในรายละเอียด ) ด้วยวิธีนี้เราตรวจได้ผลตอบแทนสูง ( 5.3 ± 0.5 × 106 เซลล์ / หัวใจซีกซ้าย , n = 15 ) และเปอร์เซ็นต์สูง ( มากที่สุด± 2.5 เปอร์เซ็นต์ , n = 12 ) rod-shaped myocytes ที่เหมาะสมไม่เพียง แต่สำหรับการทำงานการศึกษาชนิดแต่ที่สำคัญวัฒนธรรมระยะสั้นและการถ่ายโอนยีน ( ดูสูง อะดีโนไวรัสที่มีประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน ) รูปที่ 2 แสดงภาพสดจากแยก transillumination cardiomyocytes หัวใจห้องล่างซ้ายของของ c57b16 / J เมาส์ ที่สุดของ myocytes เหล่านี้ที่มีความเข้มข้นของร่างกายที่มีแคลเซียม + ( 1 – 2 มม. ) และเมื่อไฟฟ้ากระตุ้นที่ 0.5 Hz ที่อุณหภูมิห้อง , สร้างบันไดเป็นลักษณะของการหดตัว ( ข้อมูลไม่แสดง ) , ตามด้วยการหดตัวคงที่คงที่ ( 3.23 ± 0.21 % ของความยาวของเซลล์ล่าง , n = 31 ) . ผลที่คล้ายกันได้รับสำหรับ myocytes จากหนูผู้ใหญ่ ( 2 – 4 โมเก่า ) ของสายพันธุ์อื่น ๆรวมถึง 129svj 5 / 2 , และ fvb / N