Three additional promoters were eva

Three additional promoters were evaluated: mas2 and rolD
from Agrobacterium and ubiquitin Ubi1 from maize. From previous
reports, the mas2 and rolD promoters would be expected to be
most active in dicots whereas the Ubi1 promoter would be expected
to be most efficient in monocots (Christensen et al., 1992;
Cornejo et al., 1993; Leach and Aoyagi, 1991; Velten et al., 1984).
GUS expression in Gladiolus was highest from the three dicotpreferred
promoters: mas2, rolD, and 35S. We observed that GUS
expression from the most efficient promoter, mas2, was 7-fold and
9-fold higher than the Ubi1 and Act1 promoters, respectively.
Next we looked at the effect that the presence of monocot
introns might have on GUS expression levels since the Ubi1 and
Act1 promoter-containing fragments used here also contain an
intron in their untranslated leader region (Fig. 1). It is well
established that addition of an intron such as the first introns from
the maize Adh1 and rice Act1 genes to the primary transcript can
dramatically increase gene expression levels in transformed monocots
(McElroy et al., 1991). For example, GUS expression in
transformed maize cells increased 6- and 60-fold when the Act1
and Adh1 first introns, respectively, were added to a 35S- gusA
chimeric gene. In contrast to maize, GUS expression was reduced
1.25- and 3-fold in Gladiolus when the Adh1 and Act1 first introns,
respectively, were added to a 35S- gusA chimeric gene (data not
shown). Results similar to those with Gladiolus were found when
petunia was bombarded with the exact same intron-containing
plasmids (data not shown). These results clearly indicated that
GUS expression was not stimulated in Gladiolus cells with the
addition of monocot introns to the gusA transcript. This observation
suggested that splicing of monocot introns may be relatively
inefficient in Gladiolus, a nongraminaceous monocot, as it is in
dicots such as petunia. Alternatively, stimulation in gene expression
by introns may be a feature that is generally limited to
graminaceous monocots like maize and rice

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ถูกประเมินก่อเพิ่มเติมสาม: mas2 และโรลด์อโกรแบคทีเรียมและ ubiquitin Ubi1 จากข้าวโพด จากก่อนหน้านี้รายงาน ก่อ mas2 และโรลด์จะคาดว่าจะใช้งานมากที่สุดใน dicots ขณะโปรโมเตอร์ Ubi1 คาดว่าจะให้มีประสิทธิภาพมากที่สุดใน monocots (คริส et al. 1992Cornejo et al. 1993 กรองและโอยากิ 1991 Velten et al. 1984)GUS นิพจน์ในแกลดิโอลัสได้สูงสุดจาก dicotpreferred สามก่อ: mas2 โรลด์ 35S และ เราสังเกตที่ GUSจากผู้จัดงานฯ มีประสิทธิภาพสูงสุด mas2 นิพจน์ถูก 7-fold และ9-fold สูงกว่าก่อการ Ubi1 และ Act1 ตามลำดับถัดไป เรามองที่ผลที่มีอยู่ของ monocotintrons อาจมีกัสนิพจน์ระดับตั้งแต่ Ubi1 การ และAct1 โปรโมเตอร์ที่ประกอบด้วยเศษที่ใช้ที่นี่ยังประกอบด้วยการintron ในภูมิภาคผู้นำยังไม่ได้แปล (รูปที่ 1) มันเป็นอย่างดีมี intron เช่น introns แรกจากที่เพิ่มขึ้นการ Adh1 และข้าวข้าวโพดสามารถ Act1 ยีนหลักหลักฐานการศึกษาเพิ่มระดับการแสดงออกยีนใน monocots รับการเปลี่ยนแปลง(McElroy et al. 1991) ตัวอย่างเช่น กัสนิพจน์ในแปรรูปข้าวโพดเซลล์เพิ่มขึ้นเมื่อ fold 6 และ 60 Act1และ Adh1 แรก introns ตามลำดับ เพิ่ม 35S-gusAchimeric ยีน ลดลงตรงกันข้ามกับข้าวโพด นิพจน์ GUS1.25 - และ 3 - fold ในแกลดิโอลัสเมื่อ introns แรกทั้ง Adh1 และ Act1ตามลำดับ เพิ่มยีน chimeric 35S gusA (ข้อมูลไม่แสดง) พบผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกับแกลดิโอลัสกับเมื่อpetunia ถูกระดมแน่นอนเดียว intron ที่ประกอบด้วยplasmids (ไม่แสดงข้อมูล) ผลลัพธ์เหล่านี้ชัดเจนที่นิพจน์กัสถูกกระตุ้นขึ้นในเซลล์แกลดิโอลัสกับการนอกจากนี้ของ monocot introns gusA หลักฐานการศึกษา ข้อสังเกตนี้แนะนำว่า ประกบของ monocot introns อาจค่อนข้างต่ำในแกลดิโอลัส monocot nongraminaceous เป็น เป็นอยู่ในdicots เช่น petunia อีกวิธีหนึ่งคือ กระตุ้นในยีนโดย introns อาจมีคุณลักษณะที่เป็นข้อจำกัดโดยทั่วไปgraminaceous monocots เช่นข้าวโพดและข้าว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สามโปรโมเตอร์เพิ่มเติม ได้แก่ : mas2 และ โรลด์และจาก Agrobacterium ข้างนอก ubi1 จากข้าวโพด จากเดิมรายงาน mas2 และโปรโมเตอร์โรลจะคาดว่าเป็นส่วนใหญ่อยู่ในส่วน ubi1 เป็นโปรโมเตอร์จะคาดที่จะมีประสิทธิภาพมากที่สุดในพืชใบเลี้ยงเดี่ยว ( Christensen et al . , 1992 ;cornejo et al . , 1993 ; กรอง กับ อาโอยางิ , 1991 ; velten et al . , 1984 )กัส การแสดงออกในแกลดิโอลัสมากที่สุด คือ จาก สาม dicotpreferredผู้สนับสนุน : mas2 โรลด์ และ 35s เราสังเกตว่า กัสการแสดงออกจากโปรโมเตอร์ มีประสิทธิภาพมากที่สุด mas2 , 7-fold และ9-fold สูงกว่า ubi1 และโปรโมเตอร์ , act1 ตามลำดับต่อไปเราจะดูที่ผลว่า การปรากฏตัวของพืชใบเลี้ยงเดี่ยวintrons อาจมีในระดับการแสดงออกกัสตั้งแต่ ubi1 และact1 เศษที่มีการใช้ที่นี่ก็มีในเขตของหัวหน้า iNtRON นี่ ( รูปที่ 1 ) มันเป็นอย่างดีก่อตั้งขึ้นที่ 1 ของ iNtRON เช่นแรก introns จากข้าวโพดและข้าว act1 adh1 ยีนที่จะสำเนาหลักสามารถเพิ่มระดับการแสดงออกของยีนในพืชใบเลี้ยงเดี่ยว แปลง( McElroy et al . , 1991 ) ตัวอย่างเช่น กัส การแสดงออกในแปลงข้าวโพดเซลล์เพิ่มขึ้น 6 - 60 เท่าเมื่อ act1และ adh1 แรก introns ตามลำดับเพิ่มเพื่อ 35s - gusaที่จีน ในทางตรงกันข้ามกับการแสดงออกกัสทำให้ข้าวโพด1.25 - 3-fold ในแกลดิโอลัสเมื่อ adh1 act1 introns และครั้งแรก ,ตามลำดับ มีเพิ่มเป็น 35s - gusa ยีนที่ไม่เป็นจริง ( ข้อมูลไม่แสดง ) ผลที่คล้ายกันที่มีดอกแกลดิโอลัส พบเมื่อพิทูเนีย ถูกระดม iNtRON ที่มีเดียวกันแน่นอนพลาสมิด ( ข้อมูลไม่แสดง ) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการแสดงออกของกัสไม่กระตุ้นในแกลดิโอลัสเซลล์กับเพิ่มของพืชใบเลี้ยงเดี่ยว introns กับ gusa ใบรับรองผลการศึกษา การสำรวจครั้งนี้แนะนำว่า splicing ของพืชใบเลี้ยงเดี่ยว introns อาจจะค่อนข้างไม่มีประสิทธิภาพใน แกลดิโอลัส เป็นพืชใบเลี้ยงเดี่ยว nongraminaceous ตามที่มันเป็นในเป็น เช่น เพ็ตทูเนีย อีกวิธีหนึ่งคือ การกระตุ้นการแสดงออกของยีนในโดย introns อาจจะเป็นคุณลักษณะที่มักจะ จำกัดgraminaceous พืชใบเลี้ยงเดี่ยวเช่น ข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ และข้าว