PCRs for dCAPS analyses of the G/T

PCRs for dCAPS analyses of the G/T polymorphism in
intron 1 were carried out in 20 μl using GoTaq DNA
Polymerase (Promega) supplemented with 5% DMSO
and with 20 ng of genomic DNA, 1 μM of GBSS-W2F,
1 μM of GBSS-W2R (Ayres et al. 1997; Chen et al.
2008). Amplification conditions were: 94°C per 4 min
followed by 40 cycles of 94°C per 40 sec, 60°C per 50 sec
and 72°C per 1 min per kb and a final extension of 72°C
per 10 min. After amplification 5 μl of PCR products
were digested with 1 U of AccI restriction enzyme (New
England BioLabs) in a total volume of 10 μl at 37°C over
night. The samples were run on 2% agarose gel. Each
digested sample was compared alongside with its notdigested
cognate control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCRs สำหรับ dCAPS วิเคราะห์ G / T ความแตกต่างใน
intron 1 ได้ดำเนินการใน 20 ไมโครลิตรโดยใช้ดีเอ็นเอ GoTaq
โพลิเมอร์ (Promega) เสริมด้วย 5% DMSO
และ 20 นาโนกรัมของดีเอ็นเอ 1 ไมครอนของเอ็นไซม์-W2F,
1 ไมครอนของเอ็นไซม์ -W2R (ยส์ et al, 1997;.. เฉิน et al,
2008) เงื่อนไขขยายได้: 94 ° C ละ 4
นาทีตามด้วย40 รอบของ 94 ° C ละ 40 วินาที 60 องศาเซลเซียสละ 50
วินาทีและ72 ° C ต่อ 1 นาทีต่อกิโลและขยายสุดท้ายของ 72 ° C
ต่อ 10 นาที หลังจากที่ขยาย 5 ไมโครลิตรของผลิตภัณฑ์ PCR
ถูกย่อยด้วย 1 U ของเอนไซม์ จำกัด AccI (นิวอิงแลนด์ BioLabs) ในปริมาณ 10 ไมโครลิตรที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในช่วงกลางคืน กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการทำงานใน 2% agarose เจล แต่ละตัวอย่างย่อยเมื่อเทียบข้างด้วย notdigested ควบคุมสายเลือด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

pcrs สำหรับ dcaps การวิเคราะห์ G / T polymorphism ใน
iNtRON 1 ได้ดำเนินการใน 20 μผมใช้ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส
gotaq ( promega ) เสริมด้วย 5% DMSO
และ 20 นาโนดีเอ็นเอ 1 μ gbss-w2f M , M (
1 μ gbss-w2r Ayres et al . 1997 ; Chen et al .
2008 ) เงื่อนไข : 94 ° C ( ต่อ 4 นาที
ตามด้วย 40 รอบ 94 ° C ต่อ 40 วินาที , 60 ° C ต่อ 50 วินาที
และ 72 ° C ต่อ 1 นาทีต่อกิโล และส่วนขยายสุดท้าย 72 ° C
ต่อ 10 นาทีหลังจากขยาย 5 μ L สามารถผลิตภัณฑ์
ถูกย่อยด้วยเอนไซม์ ( 1 U ของอุบัติใหม่
อังกฤษ biolabs ) ในปริมาตรรวม 10 μ l ที่ 37 °องศาเซลเซียสมากกว่า
ตอนกลางคืน ตัวอย่างที่ใช้ 2% เจล . แต่ละตัวอย่างเปรียบเทียบกับ
ย่อยควบคู่ไปกับการควบคุมเชื้อสายของ notdigested