3. RESULTS AND DISCUSSION3.1 Sample

3. RESULTS AND DISCUSSION
3.1 Sample Preparation
Several types of extraction solvent; 100%
methanol, 100% acetonitrile, methanol: water
(60:40, (v/v)), acetonitrile: 20 mM sodium
acetate (50:50, (v/v)) and 1.0 N NaOH were
investigated. A blank noodle sample was
spiked with a standard mixture solution
containing 50 μg/mL of benzoic acid
and 10 μg/mL of sorbic acid, mixed and
prepared as previous above. The recovery
and standard deviation were calculated and
compared. The average recovery rate for
benzoic acid ranged from 66-78% using
100% methanol, 100% acetonitrile, acetonitrile:
20 mM sodium acetate (50:50, (v/v)) and
1.0 N NaOH while for sorbic acid ranged
from 89-105%. The mixture of methanol and
water (60:40, v/v) was found to be the most
suitable extracting solvent in this study with
the average recovery between 96% and 103%.
The result achieved indicated that there were
no matrix effects on benzoic acid and sorbic
acid determination.
3.2 Optimization of the HPLC Condition
The chromatographic conditions were
optimized so as to obtain a good separation
between benzoic acid, sorbic acid and matrix
interferences in noodles. Acetate and
phosphate aqueous solutions with different
pH and organic solvent (methanol and
acetonitrile) were investigated and system
suitability test (SST) parameters were
performed during the development and
optimization of method. Firstly, the separation
was attempted and compared on a C18
column (150 mm × 4.6 mm, 5 μm) and a
C18 column (50 mm × 4.6 mm, 5 μm) with a
wavelength at 224 nm (for sorbic acid),
234 nm (for benzoic acid) and 254 nm using
acetonitrile and 5 mM phosphate buffer
(pH 7) in the ratio range from 5:95 - 30:70.
Both acids were eluted quickly and could not
separate from matrix interferences. Methanol
was then replaced in the same ratio range but
the peaks of both acids were co-eluted.
Increasing of phosphate buffer concentration
(5-30 mM) led to increase in analytes’ retention,
decrease in tailing factor and resolution value.
Consequently, ammonium acetate aqueous
solution was employed instead of phosphate
to achieve the best resolution. Poor resolution
and peak tailing was obtained when acetonitrile
was used. Separation of benzoic acid and
sorbic acid was accomplished by varying the
concentration of ammonium acetate (5-30
mM) and the ratio of methanol. An increase
in retention and peak broadening of benzoic
acid and sorbic acid was observed when higher
concentration of ammonium acetate at higher
pH was utilized. Hence, the aqueous
component of the mobile phase was selected
to be ammonium acetate 5 mM, pH 4.4.
Methanol in varying ratio was studied and the
resolution (R) between two acids and
interferences, and the run time of the
chromatogram was taken into consideration.
The optimization condition was performed
using an isocratic elution at the proportion of
60:40 (v/v) 5 mM ammonium acetate aqueous
solution adjusted to pH 4.4: methanol at a
flow rate of 1 mL/min. The C18 column
with 5 cm length was preferred as the
complete separation was occurred within 3
min and the mobile phase operated was also
3 times decreased.
Under this condition, benzoic acid was
374 Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2)
well separated from sorbic acid with good
peak shape (resolution 3.62). Tailing factor was
0.96 and 1.00 and the number of the
theoretical plates (efficiency) was 3029 and
3599 for benzoic acid and sorbic acid,
respectively. The typical retention time of
benzoic acid and sorbic acid was 1.82 and
2.32 min, respectively (Figure 2). Moreover,
peaks of matrix interference in noodles were
observed to separate from the peak of
benzoic acid and sorbic acid (resolution > 2)
(Figure 2 (B) and (D)). The overlaid diodearray
spectrum showed good UV absorbance
at 234 nm for benzoic acid and sorbic acid,
and then this wavelength has been chosen for
detection.
Figure 2. Typical HPLC chromatograms of (A) a standard mixture solution of benzoic acid
100 μg/mL and sorbic acid 20 μg/mL (B) a blank noodle sample (C) a blank noodle sample
spiked with a standard mixture solution of benzoic acid 100 μg/mL and sorbic acid 20 μg/
mL and (D) a noodle sample containing benzoic acid.
Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2) 375
3.4 Specificity
The specificity of the method was
established through the study of resolution
factor of benzoic acid, sorbic acid and peak
from the nearest resolving peak. Benzoic
acid and sorbic acid were completely
separated from all interference matrixes with
the satisfactory resolution greater than 2.
Peaks were identified with retention times
compared with standards and confirmed the
characteristic spectra by photodiode array
detection (range 200-400 nm) in both sample
and standard solutions. DAD spectral analysis
was employed to verify the homogeneity of
the benzoic acid and sorbic acid peaks in all
solutions. The peak purity value was greater
than the threshold value of 995 and thus
establishing the selectivity of the assay method
for noodle samples.
3.5 Linearity and Range
Linearity was established by least squares
linear regression analysis of the calibration
curve and evaluated by a determination
coefficient (r2
) using data analysis MS excel
software (2007) (ANOVA; P < 0.05). Standard
mixture solutions of benzoic acid and sorbic
acid at seven different concentrations (ranging
from 5 to 200 μg/mL and 1 to 50 μg/mL,
respectively) were prepared and analyzed in
triplicate to prove the linearity of system.
Peak area of benzoic acid and sorbic acid
solution was plotted against their respective
concentrations. The calibration curve of
benzoic acid and sorbic acid showed good
linearity over the concentration range with r2
0.9998 and 0.9998, respectively. The statistical
data of the regression equation is presented
in Table 2.
3.6 Determination of Limit of Detection
and Quantitation (LOD and LOQ)
Limit of detection (LOD) and limit of
quantitation (LOQ) of benzoic acid and sorbic
acid were calculated from the residual
standard deviation of the regression line (d)
of the calibration curve of each compound
staged above and its slope (S) in accordance
to the following equation: LOD = 3.3(d/S)
and LOQ = 10(d/S). The results given in
Table 2 suggested that this method could
be used for the determination of very small
concentrations of benzoic acid and sorbic
acid in noodle samples.
Table 1. System suitability test data.
Parameter Benzoic acid Sorbic acid Preferable level
Capacity factor (k′)
Selectivity factor (α)
Resolution (Rs)
Theoretical plate (N)
Tailing factor (T)
1.70
2.42
3029
0.96
2.68
1.58
3.62
3599
1.00
1.0 to 10.0
1.0 to 2.0
> 2
> 2,500
1
3.3 System Suitability
The system suitability test (SST)
parameters were performed during the
development and optimization of the method
as well as through the validation procedure.
SST parameters including capacity factor (k′),
selectivity (a), resolution (Rs), column efficiency
(number of theoretical plates, N) and tailing
factor (T) listed in Table 1 were established
by ten replicates. All parameters were
satisfactory with good specificity for the
quantitation of benzoic acid and sorbic acid
in noodles. The RSD% values for the
calculated SST parameters for 10 replicates
were less than 2%.
376 Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2)
Table 2. Linearity, statistical data of the regression analysis, LOD and LOQ.
Parameter Benzoic acid Sorbic acid
Calibration range (μg/mL)
Limit of detection (μg/mL)
Limit of quantitation (μg/mL)
Regression equation
Slope
Standard error of mean (S.E.) of slope
95% confidence limit of slope
Intercept
Standard error of mean (S.E.) of intercept
95% confidence limit of intercept
Standard error of estimate
Regression coefficient (r2
)
5-200
0.42
1.14
32.2190
0.1982
31.7096-32.7284
37.4699
20.5838
-15.4424-90.3822
36.8800
0.999811
1-50
0.32
0.99
55.2338
0.3275
54.3918-56.0757
5.3878
7.4843
-13.8513-24.6268
14.0147
0.999824
3.7 Accuracy
The accuracy of the method was
performed on blank noodle samples spiked
with known quantities of preservatives.
Five known amount of benzoic acid and
sorbic acid were added in blank samples,
mixed and all samples were treated and
analyzed as described above. Three samples
were prepared at each concentration. The
percentage recovery of added preservatives
was calculated by comparing the peak area
of the test samples with that of the standard
solutions. The results obtained from 15
samples are summarized in Table 3. The
mean recoveries ranged from 98.92-102.04%
for benzoic acid and 97.66-102.47% for
sorbic acid excepting at the lowest spiked level
of each compound that was 85.61 and
83.62%, respectively. The RSD value of each
spiked concentration was < 1% and all RSD
values (n=15) were < 8%.
Table 3. Recovery analysis of benzoic acid and benzoic acid.
Actual
concentration
(μg/mL)
Calculated
concentration
(μg/mL)
Recovery (%)
Mean
recovery
(n=3)
RSD
(%)
Benzoic acid
5.00
10.00
20.00
50.00
100.0
4.30
4.28
4.27
9.90
9.78
10.00
19.76
20.22
20.00
51.05
50.57
50.07
101.79
102.15
102.17
Total
85.93
85.55
85.38
98.92
97.77
100.00
98.78
101.10
100.00
102.09
101.13
100.15
101.79
102.15
102.17
(n = 15)
85.61
98.92
99.96
101.12
102.04
97.53
0.28
0.92
0.95
0.78
0.17
6.25
Chiang Mai J. Sci. 2014; 41(2) 377
Table 3. continue.
Method accuracy was also demonstrated
by plotting the amount of benzoic acid and
sorbic acid found against the amount added.
Method accuracy of benzoic acid (y = 1.026x-
0.615) and sorbic acid (y= 1.032x-0.172)
showed good linearity with r2
0.9990 and
0.9999, respectively. The result is found to be
satisfactory for intended purpose and is
adequate for routine analysis.
3.8 Precision
Precision was evaluated in term of system
precision (repeatability), method precision
(intra-day) and intermediate precision (interday).
3.8.1 System precision
System precision or repeatability was
determined by performing ten consecutive
injections (n=10) of a sample solution and a
standard mixture solution containing 100 μg/
mL of benzoic acid and 20 μg/mL of sorbic
acid. The RSD% of peak

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1 ตัวอย่างหลายชนิดของตัวทำละลายสกัด 100%เมทานอล acetonitrile 100% เมทานอล: น้ำ(60:40 (v/v)), acetonitrile: โซเดียม 20 มม.acetate (คนละครึ่ง (v/v)) และ 1.0 N NaOH ได้ตรวจสอบ ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวว่างเปล่าได้spiked ด้วยโซลูชันส่วนผสมมาตรฐานประกอบด้วย μg 50 มิลลิลิตรของกรด benzoicและ μg 10 mL ของ sorbic กรด ผสม และเตรียมเป็นก่อนหน้านี้ด้านบน การกู้คืนและมีคำนวณส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และเปรียบเทียบ อัตราเฉลี่ยการกู้คืนสำหรับกรด benzoic มาใช้ 66-78%เมทานอล 100%, 100% acetonitrile, acetonitrile:acetate โซเดียม 20 มม. (คนละครึ่ง (v/v)) และ1.0 NaOH N สำหรับ sorbic กรดอยู่ในช่วงจาก 89-105% ส่วนผสมของเมทานอล และน้ำ (60:40, v/v) พบได้มากที่สุดตัวทำละลายขยายเหมาะในการศึกษานี้ด้วยกู้คืนเฉลี่ย 96% และ 103%ระบุผลสำเร็จที่ มีไม่มีเมตริกซ์ผลกรด benzoic และ sorbicกำหนดกรด3.2 การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไข HPLCมีเงื่อนไข chromatographicปรับเพื่อรับแยกดีระหว่างกรด benzoic กรด sorbic และเมตริกซ์interferences ในก๋วยเตี๋ยว Acetate และโซลูชั่นอควีฟอสเฟต ด้วยแตกต่างกันpH และตัวทำละลายอินทรีย์ (เมทานอล และacetonitrile) ได้ตรวจสอบ และระบบพารามิเตอร์การทดสอบ (SST) ความเหมาะสมได้ดำเนินการในระหว่างการพัฒนา และเพิ่มประสิทธิภาพของวิธีการ ประการแรก แยกพยายาม และเปรียบเทียบในการ C18คอลัมน์ (μm 150 mm × 4.6 มม. 5) และคอลัมน์ C18 (μm 50 มม. × 4.6 มม. 5) มีการความยาวคลื่นที่ 224 nm (สำหรับ sorbic กรด),234 nm (สำหรับกรด benzoic) และใช้ 254 nmบัฟเฟอร์ฟอสเฟต acetonitrile และ 5 มม.(pH 7) ในอัตราส่วนตั้งแต่ 5:95 - 30:70กรดทั้งสอง eluted อย่างรวดเร็ว และไม่แยกต่างหากจาก interferences เมตริกซ์ เมทานอลแล้วมีการแทนที่ในช่วงอัตราส่วนเดียวกัน แต่กรดทั้งสองแห่งได้ร่วม elutedฟอสเฟตบัฟเฟอร์ความเข้มข้นมาก(5-30 mM) นำไปสู่การเพิ่มขึ้นในการเก็บข้อมูลของ analytesลดใน tailing ค่าตัวคูณและความละเอียดดังนั้น แอมโมเนีย acetate อควีโซลูชั่นได้รับการว่าจ้างแทนฟอสเฟตเพื่อให้บรรลุการแก้ปัญหาที่ดีที่สุด ความละเอียดต่ำและสูงสุด tailing กล่าวเมื่อ acetonitrileใช้ แยกกรด benzoic และกรด sorbic ได้สำเร็จ โดยแตกต่างกันความเข้มข้นของแอมโมเนีย acetate (5-30มิลลิเมตร) และอัตราส่วนของเมทานอล การเพิ่มขึ้นในการรักษาและค broadening ของ benzoicกรดและกรด sorbic ถูกสังเกตเมื่อสูงขึ้นความเข้มข้นของแอมโมเนีย acetate ที่สูงกว่ามีใช้ pH ดังนั้น อควีเลือกคอมโพเนนต์ของเฟสเคลื่อนที่เป็น acetate แอมโมเนีย 5 มม pH 4.4เมทานอลในอัตราส่วนที่แตกต่างกันมีศึกษาและความละเอียด (R) ระหว่างสองกรด และinterferences และเวลาของการchromatogram ถูกนำมาพิจารณาทำการปรับสภาพใช้การ elution isocratic คิดที่สัดส่วนของ60:40 (v/v) 5 มม.เวย์แอมโมเนีย acetate อควีโซลูชันที่ปรับ pH 4.4: เมทานอลที่เป็นอัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที คอลัมน์ C18กับ 5 ซม. ความยาวถูกต้องเป็นแยกสมบูรณ์เกิดขึ้นภายใน 3นาทีและระยะเคลื่อนที่ดำเนินยัง3 ครั้งลดลงภายใต้เงื่อนไขนี้ มีกรด benzoicSci. เจเชียงใหม่เชียงใหม่ 374 2014 41(2)แยกออกจากกรด sorbic กับดีดีรูปร่างสูง (ความละเอียด 3.62) Tailing ปัจจัย0.96 และ 1.00 และจำนวนแผ่นทฤษฎี (ประสิทธิภาพ) 3029 และ3599 กรด benzoic และ sorbic กรดตามลำดับ เวลาเก็บข้อมูลทั่วไปของกรด benzoic และกรด sorbic เป็น 1.82 และนาทีที่ 2.32 ตามลำดับ (รูปที่ 2) นอกจากนี้ยอดของเมตริกซ์ในก๋วยเตี๋ยวได้สังเกตแยกจากจุดสูงสุดของกรด benzoic และกรด sorbic (ความละเอียด > 2)(รูปที่ 2 (B) และ (D)) Overlaid diodearrayสเปกตรัมที่พบ absorbance UV ดีที่ 234 nm สำหรับกรด benzoic sorbic กรดแล้ว ความยาวคลื่นนี้ได้ถูกเลือกสำหรับตรวจสอบรูปที่ 2 Chromatograms HPLC โดยทั่วไปของ (A) การแก้ปัญหามาตรฐานส่วนผสมของกรด benzoicΜg/mL และกรด sorbic 20 μg/mL (B) ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวที่ว่างเปล่า (C) ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวเปล่า 100spiked ด้วยโซลูชั่นมาตรฐานส่วนผสมของกรด benzoic 100 μg/mL และกรด sorbic 20 μg /มล.และตัวอย่าง (D) เป็นก๋วยเตี๋ยวที่ประกอบด้วยกรด benzoicเชียงใหม่เชียงใหม่เจ Sci. 2014 41(2) 3753.4 specificityมี specificity วิธีผ่านทางการศึกษาของการแก้ปัญหาสัดส่วนของกรด benzoic กรด sorbic และสูงสุดจากการแก้ไขที่สูงสุด Benzoicกรดและกรด sorbic ได้อย่างสมบูรณ์แยกจากทั้งหมด matrixes รบกวนด้วยความพึงพอใจที่มากกว่า 2ระบุยอดรักษาเวลาเปรียบเทียบกับมาตรฐาน และได้รับการยืนยันการแรมสเป็คตราลักษณะ โดย photodiode เรย์ตรวจสอบ (ช่วง 200-400 nm) ในตัวอย่างทั้งสองและโซลูชั่นมาตรฐาน วิเคราะห์สเปกตรัมของพ่อหยุดตรวจสอบ homogeneity ของกรด benzoic และกรด sorbic แห่งในทั้งหมดการแก้ไขปัญหา ค่าความบริสุทธิ์สูงสุดได้มากขึ้นมากกว่าค่าขีดจำกัดของ 995 จึงกำหนดวิธีของวิธีวิเคราะห์สำหรับตัวอย่างก๋วยเตี๋ยว3.5 แบบดอกไม้และช่วงแบบดอกไม้ก่อตั้งขึ้น โดยกำลังสองน้อยสุดวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นของการปรับเทียบเส้นโค้ง และประเมิน โดยการกำหนดสัมประสิทธิ์ (r2) ใช้วิเคราะห์ข้อมูล MS excelซอฟแวร์ (2007) (การวิเคราะห์ความแปรปรวน P < 0.05) มาตรฐานโซลูชั่นส่วนผสม ของกรด benzoic และ sorbicกรดที่ความเข้มข้นแตกต่างกันที่เจ็ดที่ (ตั้งแต่จาก 5 μg 200 มล.และ 1-50 μg/mLตามลำดับ) ได้ถูกจัดทำ และวิเคราะห์ในtriplicate พิสูจน์แบบดอกไม้ของระบบพื้นที่สูงสุดของกรด benzoic และกรด sorbicโซลูชันที่ถูกพล็อตกับผู้เกี่ยวข้องความเข้มข้น เทียบเส้นโค้งของกรด benzoic และกรด sorbic แสดงดีแบบดอกไม้ที่ช่วงความเข้มข้นกับ r20.9998 และ 0.9998 ตามลำดับ ทางสถิติที่การนำเสนอข้อมูลของสมการถดถอยในตารางที่ 23.6 กำหนดขีดจำกัดของการตรวจสอบและการวิเคราะห์หาปริมาณ (ลอดและ LOQ)ขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) และจำนวนการวิเคราะห์หาปริมาณ (LOQ) กรด benzoic และ sorbicกรดคำนวณได้จากส่วนที่เหลือจากการส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของเส้นถดถอย (d)เทียบเส้นโค้งของสารประกอบแต่ละแบ่งระยะข้างต้น และเป็นพื้นที่ลาดเอียง (S) ในการสมการต่อไปนี้: ลอด = 3.3(d/S)และ LOQ = 10(d/S) ผลลัพธ์ที่กำหนดในตารางที่ 2 แนะนำว่า วิธีนี้สามารถใช้สำหรับกำหนดขนาดเล็กมากความเข้มข้น ของกรด benzoic และ sorbicกรดในตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวตารางที่ 1 ข้อมูลทดสอบความเหมาะสมของระบบพารามิเตอร์กรด Benzoic Sorbic กรดระดับกว่าสัดส่วนกำลังการผลิต (k′)วิธีคูณ(ด้วยกองทัพ)ความละเอียด (อาร์เอส)แผ่นทฤษฎี (N)ปัจจัย tailing (T)1.702.4230290.962.681.583.6235991.001.0-10.01.0-2.0> 2> 250013.3 ระบบความเหมาะสมทดสอบความเหมาะสมของระบบ (SST)พารามิเตอร์ในระหว่างดำเนินการพัฒนาและเพิ่มประสิทธิภาพของวิธีการเช่นกันที่ผ่านขั้นตอนตรวจสอบSST พารามิเตอร์รวมทั้งปัจจัยการผลิต (k′),ใว (a), (อาร์เอส), ความละเอียดประสิทธิภาพคอลัมน์(จำนวนแผ่นทฤษฎี N) และ tailingปัจจัย (T) แสดงในตารางที่ 1 ได้ก่อตั้งโดยที่สิบเหมือนกับการ พารามิเตอร์ทั้งหมดได้พอ มี specificity ดีสำหรับการการวิเคราะห์หาปริมาณกรด benzoic และกรด sorbicในก๋วยเตี๋ยว ค่า RSD %สำหรับการเหมือนกับคำนวณพารามิเตอร์ SST 10ไม่น้อยกว่า 2%Sci. เจเชียงใหม่เชียงใหม่ 376 2014 41(2)Table 2. Linearity, statistical data of the regression analysis, LOD and LOQ.Parameter Benzoic acid Sorbic acidCalibration range (μg/mL)Limit of detection (μg/mL)Limit of quantitation (μg/mL)Regression equation Slope Standard error of mean (S.E.) of slope 95% confidence limit of slope Intercept Standard error of mean (S.E.) of intercept 95% confidence limit of intercept Standard error of estimate Regression coefficient (r2)5-2000.421.1432.21900.198231.7096-32.728437.469920.5838-15.4424-90.382236.88000.9998111-500.320.9955.23380.327554.3918-56.07575.38787.4843-13.8513-24.626814.01470.9998243.7 AccuracyThe accuracy of the method wasperformed on blank noodle samples spikedwith known quantities of preservatives.Five known amount of benzoic acid andsorbic acid were added in blank samples,mixed and all samples were treated andanalyzed as described above. Three sampleswere prepared at each concentration. Thepercentage recovery of added preservativeswas calculated by comparing the peak areaof the test samples with that of the standardsolutions. The results obtained from 15samples are summarized in Table 3. Themean recoveries ranged from 98.92-102.04%for benzoic acid and 97.66-102.47% forsorbic acid excepting at the lowest spiked levelof each compound that was 85.61 and83.62%, respectively. The RSD value of eachspiked concentration was < 1% and all RSDvalues (n=15) were < 8%.ตาราง 3 กู้คืนการวิเคราะห์กรด benzoic และกรด benzoicเกิดขึ้นจริงความเข้มข้น(Μg/mL)คำนวณความเข้มข้น(Μg/mL)กู้ (%)หมายความว่าการกู้คืน(n = 3)RSD(%)กรด benzoic5.0010.00 น.20.00 น.50.00100.04.304.284.279.909.7810.00 น.19.7620.2220.00 น.51.0550.5750.07101.79102.15102.17ผลรวม85.9385.5585.3898.9297.77100.0098.78101.10100.00102.09101.13100.15101.79102.15102.17(n = 15)85.6198.9299.96101.12102.0497.530.280.920.950.780.176.25เชียงใหม่เชียงใหม่เจ Sci. 2014 41(2) 377ตาราง 3 ต่อไปยังได้สาธิตวิธีการความถูกต้องโดยพล็อตจำนวนกรด benzoic และพบกับยอดเงินที่เพิ่มกรด sorbicวิธีการความถูกต้องของกรด benzoic (y = x 1.026 -0.615) และกรด sorbic (y = 1.032 x-0.172)พบแบบดอกไม้ดีกับ r2 0.9990 และ0.9999 ตามลำดับ พบผลที่เป็นพอวัตถุประสงค์วัตถุประสงค์ และเป็นเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์เป็นประจำ3.8 ความแม่นยำมีประเมินความแม่นยำของระบบความแม่นยำ (ทำซ้ำใน), ความแม่นยำของวิธีการ(intra-วัน) และความแม่นยำในระดับกลาง (interday)3.8.1 ความแม่นยำระบบความแม่นยำของระบบหรือทำซ้ำในกำหนด โดยทำสิบอย่างฉีด (n = 10) ของตัวอย่างวิธีแก้ไขและโซลูชั่นส่วนผสมมาตรฐานประกอบด้วย 100 μg /มิลลิลิตรของกรด benzoic และ μg 20 mL ของ sorbicกรด % RSD ของพีค

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลการอภิปรายและ
3.1
การเตรียมสารตัวอย่างหลายชนิดของตัวทำละลายสกัด; 100%
เมทานอล acetonitrile 100% เมทานอล: น้ำ
(60:40 (v / v)) acetonitrile: 20
มิลลิโซเดียมอะซิเตท(50:50 (v / v)) และ 1.0 ไม่มี NaOH
ถูกตรวจสอบ ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวว่างเปล่าถูกแทงด้วยโซลูชั่นส่วนผสมมาตรฐานมี50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรของกรดเบนโซอิกและ10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรของกรดซอร์บิผสมและเตรียมเป็นก่อนหน้าดังกล่าวข้างต้น การฟื้นตัวของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานจะถูกคำนวณและเปรียบเทียบ อัตราเฉลี่ยสำหรับการกู้คืนกรดเบนโซอิกอยู่ในช่วง 66-78% โดยใช้เมทานอล100% acetonitrile 100% acetonitrile: 20 มิลลิโซเดียมอะซิเตท (50:50 (v / v)) และ1.0 ไม่มี NaOH ในขณะที่สำหรับกรดซอร์บิตั้งแต่จาก89 -105% ส่วนผสมของเมทานอลและน้ำ (60:40, v / v) พบว่าส่วนใหญ่เหมาะกับการสกัดด้วยตัวทำละลายในการศึกษาครั้งนี้กับการฟื้นตัวของค่าเฉลี่ยระหว่าง96% และ 103%. ผลที่ได้ประสบความสำเร็จแสดงให้เห็นว่ามีผลกระทบเมทริกซ์ไม่มีเบนโซอิกกรดซอร์บิกและความมุ่งมั่นกรด. 3.2 การเพิ่มประสิทธิภาพของ HPLC สภาพเงื่อนไขโครมาถูกที่ดีที่สุดเพื่อที่จะได้รับการแยกที่ดีระหว่างกรดเบนโซอิกกรดซอร์บิกและเมทริกซ์รบกวนในก๋วยเตี๋ยว Acetate และสารละลายฟอสเฟตที่แตกต่างกันมีความเป็นกรดด่างและตัวทำละลายอินทรีย์(เมทานอลและacetonitrile) ได้รับการตรวจสอบและระบบการทดสอบความเหมาะสม(SST) พารามิเตอร์ถูกดำเนินการในระหว่างการพัฒนาและเพิ่มประสิทธิภาพของวิธีการ ประการแรกการแยกความพยายามและเมื่อเทียบกับใน C18 คอลัมน์ (150 มิลลิเมตร× 4.6 มม 5 ไมครอน) และคอลัมน์C18 (50 มม× 4.6 มม 5 ไมครอน) ที่มีความยาวคลื่น224 นาโนเมตร (กรดซอร์บิค) 234 นาโนเมตร (สำหรับเบนโซอิกกรด) และ 254 นาโนเมตรโดยใช้acetonitrile และ 5 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 7) อยู่ในช่วงจากอัตราส่วน 5:95. - 30:70 กรดทั้งสองถูกชะได้อย่างรวดเร็วและไม่สามารถแยกออกจากการรบกวนเมทริกซ์ เมทานอลถูกแทนที่แล้วในช่วงอัตราส่วนเดียวกันแต่ยอดของกรดทั้งสองได้ร่วมชะ. การเพิ่มความเข้มข้นของฟอสเฟตบัฟเฟอร์(5-30 มิลลิ) นำไปสู่การเพิ่มขึ้นในการเก็บข้อมูลวิเคราะห์ 'ลดลงในtailing ปัจจัยและความคุ้มค่าความละเอียด. ดังนั้นแอมโมเนียม น้ำอะซิเตทโซลูชั่นที่ถูกจ้างมาแทนฟอสเฟตเพื่อให้บรรลุละเอียดที่ดีที่สุด ความละเอียดที่น่าสงสารและสูงสุด tailing ที่ได้รับเมื่อ acetonitrile ถูกนำมาใช้ แยกกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกก็ประสบความสำเร็จที่แตกต่างกันโดยความเข้มข้นของแอมโมเนียมอะซิเตท(5-30 มิลลิเมตร) และอัตราส่วนของเมทานอล การเพิ่มขึ้นในการเก็บรักษาและการขยายจุดสูงสุดของเบนโซอิกกรดซอร์บิกและกรดพบว่าสูงขึ้นเมื่อความเข้มข้นของแอมโมเนียมอะซิเตทที่สูงกว่าค่าความเป็นกรดเป็นประโยชน์ ดังนั้นน้ำส่วนประกอบของเฟสเคลื่อนที่ได้รับเลือกให้เป็นอะซิเตตแอมโมเนียม5 มิลลิพีเอช 4.4. เมทานอลในอัตราส่วนที่แตกต่างกันได้รับการศึกษาและความละเอียด (R) ระหว่างสองกรดและรบกวนและเวลาทำงานของchromatogram ถูกนำเข้าสู่การพิจารณา . สภาพการเพิ่มประสิทธิภาพได้ดำเนินการโดยใช้ชะ isocratic ที่สัดส่วนของ 60:40 (v / v) 5 มิลลิแอมโมเนียมอะซิเตทน้ำแก้ปัญหาการปรับค่าpH 4.4: เมทานอลที่อัตราการไหล1 มิลลิลิตร / นาที คอลัมน์ C18 ที่มีความยาว 5 ซม. เป็นที่ต้องการเป็นแยกสมบูรณ์ได้เกิดขึ้นภายใน3 นาทีและขั้นตอนการดำเนินการโทรศัพท์มือถือยังเป็น3 ครั้งลดลง. ภายใต้เงื่อนไขนี้เป็นกรดเบนโซอิก374 เชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) แยกออกจากกันอย่างดีจากกรดซอร์บิดีกับรูปร่างสูงสุด (ความละเอียด 3.62) ปัจจัย Tailing เป็น0.96 และ 1.00 และจำนวนของแผ่นทางทฤษฎี(ประสิทธิภาพ) คือ 3029 และ3599 สำหรับกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิค, ตามลำดับ เวลาการเก็บรักษาโดยทั่วไปของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกเป็น 1.82 และ 2.32 นาทีตามลำดับ (รูปที่ 2) นอกจากนี้ยอดของการรบกวนเมทริกซ์ในก๋วยเตี๋ยวถูกตั้งข้อสังเกตที่จะแยกจากจุดสูงสุดของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิก(ความละเอียด> 2) (รูปที่ 2 (ข) และ (D)) หุ้ม diodearray สเปกตรัมแสดงให้เห็นว่าการดูดกลืนแสงยูวีที่ดีที่ 234 นาโนเมตรสำหรับกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิก, และจากนั้นคลื่นนี้ได้รับเลือกสำหรับการตรวจสอบ. รูปที่ 2 chromatograms HPLC ทั่วไปของ (A) วิธีการแก้ปัญหามาตรฐานส่วนผสมของกรดเบนโซอิก100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ ซอร์บิคกรด 20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (B) ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวว่างเปล่า (C) ตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวว่างเปล่าถูกแทงด้วยโซลูชั่นส่วนผสมมาตรฐานของกรดเบนโซอิก100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและกรดซอร์บิก 20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ (D) ตัวอย่างเส้นก๋วยเตี๋ยวที่มีกรดเบนโซอิก . เชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) 375 3.4 ความจำเพาะความจำเพาะของวิธีการที่ได้รับการจัดตั้งขึ้นผ่านการศึกษามติปัจจัยกรดเบนโซอิกกรดซอร์บิกและสูงสุดจากการแก้ไขที่ใกล้ที่สุดยอด เบนโซอิกกรดซอร์บิกและกรดสมบูรณ์ถูกแยกออกจากmatrixes รบกวนทั้งหมดที่มีความละเอียดที่น่าพอใจมากกว่า2 Peaks ถูกระบุด้วยเวลาการเก็บรักษาเมื่อเทียบกับมาตรฐานและได้รับการยืนยันสเปกตรัมลักษณะโดยอาร์เรย์โฟโตไดโอดตรวจจับ(ช่วง 200-400 นาโนเมตร) ทั้งตัวอย่างและมาตรฐานการแก้ปัญหา DAD วิเคราะห์สเปกตรัมถูกจ้างมาเพื่อตรวจสอบความสม่ำเสมอของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิยอดในการแก้ปัญหา ค่าความบริสุทธิ์สูงสุดสูงกว่าค่าเกณฑ์ของ 995 และทำให้การสร้างการเลือกของวิธีการทดสอบที่สำหรับตัวอย่างก๋วยเตี๋ยว. 3.5 เส้นตรงและช่วงเส้นตรงก่อตั้งขึ้นโดยสองน้อยที่สุดการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นของการสอบเทียบโค้งและประเมินผลโดยการกำหนดค่าสัมประสิทธิ์(r2 ) โดยใช้การวิเคราะห์ข้อมูล MS Excel ซอฟแวร์ (2007) (ANOVA; P <0.05) มาตรฐานการแก้ปัญหาที่มีส่วนผสมของกรดเบนโซอิกและซอร์บิคกรดที่เจ็ดมีความเข้มข้นแตกต่างกัน(ตั้งแต่5-200 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ 1 ถึง 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับ) ได้รับการเตรียมความพร้อมและการวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่าที่จะพิสูจน์ความเป็นเชิงเส้นของระบบ. พื้นที่สูงสุดของกรดเบนโซอิก และกรดซอร์บิวิธีการแก้ปัญหาที่ถูกพล็อตกับตนมีความเข้มข้น เส้นโค้งการสอบเทียบของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกที่ดีที่แสดงให้เห็นเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้นที่มีr2 0.9998 และ 0.9998 ตามลำดับ สถิติข้อมูลของสมการถดถอยจะนำเสนอในตารางที่2 3.6 การกำหนดข้อ จำกัด ของการตรวจสอบและวิเคราะห์เชิงปริมาณ(LOD และ LOQ) จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) และขีด จำกัด ของปริมาณ(LOQ) ของกรดเบนโซอิกและซอร์บิคกรดจะถูกคำนวณจากที่เหลือส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของสายการถดถอย (ง) ของเส้นโค้งการสอบเทียบของแต่ละสารประกอบฉากดังกล่าวข้างต้นและความลาดชันของ (S) ตามสมการต่อไปนี้: LOD = 3.3 (d / S) และ LOQ = 10 (d / S) ผลที่ได้รับในตารางที่ 2 แสดงให้เห็นว่าวิธีการนี้สามารถนำมาใช้สำหรับการกำหนดขนาดเล็กมากระดับความเข้มข้นของกรดเบนโซอิกและซอร์บิคกรดในตัวอย่างก๋วยเตี๋ยว. ตารางที่ 1 ข้อมูลการทดสอบความเหมาะสมของระบบ. พารามิเตอร์กรดเบนโซอิคในระดับที่ดีกว่ากรดซอร์บิปัจจัยความจุ (k ' ) ปัจจัยหัวกะทิ (α) ความละเอียด (อาร์เอส) แผ่นทฤษฎี (N) ปัจจัย Tailing (T) 1.70 2.42 3,029 0.96 2.68 1.58 3.62 3599 1.00 1.0-10.0 1.0-2.0> 2> 2,500 1 3.3 ความเหมาะสมของระบบการทดสอบความเหมาะสมของระบบ(SST) พารามิเตอร์ได้ดำเนินการในระหว่างการพัฒนาและการเพิ่มประสิทธิภาพของวิธีการเช่นเดียวกับการผ่านขั้นตอนการตรวจสอบ. พารามิเตอร์ SST รวมถึงปัจจัยความจุ (k), การเลือก (ก) ความละเอียด (อาร์เอส) ที่มีประสิทธิภาพคอลัมน์(จำนวนแผ่นทฤษฎี N) และ tailing ปัจจัย (T) ที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 ที่ถูกจัดตั้งขึ้นโดยสิบซ้ำ พารามิเตอร์ทั้งหมดเป็นที่น่าพอใจมีความจำเพาะที่ดีสำหรับปริมาณกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิกในก๋วยเตี๋ยว ค่า% RSD สำหรับคำนวณค่าพารามิเตอร์SST 10 ซ้ำน้อยกว่า2%. 376 เชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) ตารางที่ 2 เส้นตรงข้อมูลทางสถิติของการวิเคราะห์การถดถอยที่ LOD และ LOQ. พารามิเตอร์กรดเบนโซอิกกรดซอร์บิช่วงการสอบเทียบ (ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) จำกัด ของการตรวจสอบ (ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ข้อ จำกัด ของปริมาณ (ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) สมการถดถอยลาดข้อผิดพลาดมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SE) ของความลาดชันความเชื่อมั่น95% ของความลาดชันตัดข้อผิดพลาดมาตรฐานของค่าเฉลี่ย(SE) ของการสกัดกั้นความเชื่อมั่น95% ของการสกัดกั้นข้อผิดพลาดมาตรฐานของประมาณการค่าสัมประสิทธิ์การถดถอย ความถูกต้องความถูกต้องของวิธีการที่ได้รับการดำเนินการกับตัวอย่างก๋วยเตี๋ยวว่างเปล่าถูกแทงด้วยปริมาณของสารกันบูดที่รู้จักกัน. ห้าจำนวนเงินที่รู้จักกันดีของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิที่ถูกเพิ่มเข้าในตัวอย่างที่ว่างเปล่าผสมและตัวอย่างทั้งหมดได้รับการรักษาและการวิเคราะห์ที่อธิบายข้างต้น สามตัวอย่างได้จัดทำที่มีความเข้มข้นในแต่ละ กู้คืนร้อยละของสารกันบูดเพิ่มที่คำนวณได้จากการเปรียบเทียบพื้นที่สูงสุดของตัวอย่างทดสอบกับที่ของมาตรฐานการแก้ปัญหา ผลที่ได้รับจาก 15 ตัวอย่างที่มีรายละเอียดในตารางที่ 3 กลับคืนเฉลี่ยอยู่ในช่วง 98.92-102.04% สำหรับกรดเบนโซอิกและ 97.66-102.47% สำหรับกรดซอร์บิยกเว้นในระดับที่ถูกแทงต่ำสุดของแต่ละสารประกอบที่เป็น85.61 และ83.62% ตามลำดับ ค่า RSD ของแต่ละความเข้มข้นถูกแทงเป็น<1% และ RSD ค่า (n = 15) มี <8%. ตารางที่ 3 การวิเคราะห์การกู้คืนของกรดเบนโซอิกและกรดเบนโซอิค. ที่เกิดขึ้นจริงความเข้มข้น(ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) การคำนวณความเข้มข้น(ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ) การกู้คืน (%) หมายถึงการกู้คืน(n = 3) RSD (%) เบนโซอิค = 15) 85.61 98.92 99.96 101.12 102.04 97.53 0.28 0.92 0.95 0.78 0.17 6.25 เชียงใหม่เจวิทย์ 2014; 41 (2) 377 ตารางที่ 3 ยังคง. ความถูกต้องวิธีการแสดงให้เห็นยังโดยวางแผนปริมาณของกรดเบนโซอิกและกรดซอร์บิพบกับจำนวนเงินที่เพิ่ม. ความถูกต้องวิธีการกรดเบนโซอิก (y = 1.026x- 0.615) และกรดซอร์บิ (y = 1.032x-.172) แสดงให้เห็นเป็นเส้นตรงที่ดีกับ r2 0.9990 และ0.9999 ตามลำดับ ผลที่ได้พบว่าเป็นที่น่าพอใจสำหรับวัตถุประสงค์และเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ประจำ. 3.8 แม่นยำแม่นยำถูกประเมินในแง่ของระบบที่มีความแม่นยำ(ทำซ้ำ), ความแม่นยำวิธี(ภายในวัน) และความแม่นยำกลาง (interday). 3.8.1 ความแม่นยำของระบบความแม่นยำของระบบหรือการทำซ้ำถูกกำหนดโดยการดำเนินการติดต่อกันสิบฉีด(n = 10) ของการแก้ปัญหาตัวอย่างและวิธีการแก้ปัญหาที่มีส่วนผสมมาตรฐาน100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรของกรดเบนโซอิกและ 20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรซอร์บิคกรด ของ% RSD ยอด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลและการอภิปราย

3.1 ตัวอย่างการเตรียมการหลายประเภทของการสกัดด้วยตัวทำละลาย ; 100%
เมทานอล 100% ไนเมทานอล : น้ำ
( 60 : 40 ( v / v ) ) , ไน : 20 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตต ( 50
( v / v ) และ 1.0 N NaOH เป็น
สอบสวน ตัวอย่างบะหมี่ที่ว่างเปล่าถูก
C มาตรฐานสารละลายผสมที่ประกอบด้วย 50 μ
g / ml และกรดเบนโซอิก
10 μกรัม / มิลลิลิตรของกรดซอร์บิค , ผสมและ
เตรียมการก่อนข้างต้น การกู้คืน

) คำนวณและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และเปรียบเทียบ อัตราการกู้คืนโดยเฉลี่ยอยู่ระหว่าง 66-78 กรดเบนโซอิก

100% โดยใช้เมทานอล 100% ไนไน :
โซเดียมอะซีเตท 20 มม. ( 50 : 50 ( v / v )
N NaOH และดาวน์โหลดในขณะที่กรดซอร์บิคอยู่
จาก 89-105 % ส่วนผสมของเมทานอลและน้ำ ( 60 : 40 ,
/ v ) พบว่ามีมากที่สุด
การสกัดตัวทำละลายที่เหมาะสมในการศึกษา
กู้เฉลี่ย 96% และ 103 %
" ได้พบว่าไม่มีผลในกรดเบนโซอิก
เมทริกซ์และกรดซอร์บิค

3.2 เพิ่มประสิทธิภาพในการตัดสินใจ และมีเงื่อนไข และเงื่อนไข

เหมาะเพื่อให้ได้ดีแยก
ระหว่างกรดเบนโซอิก , กรดซอร์บิค และการแทรกแซงของเมทริกซ์
ในก๋วยเตี๋ยวอะซิเตท และโซลูชั่นที่มีระดับพีเอชสารละลายฟอสเฟต

และตัวทำละลายอินทรีย์ ( เมทานอล
ไน ) ทำการทดสอบความเหมาะสมของระบบค่า

( SST ) การปฏิบัติในการพัฒนาและเพิ่มประสิทธิภาพของ
วิธี ประการแรก คือ การแยก
พยายามเปรียบเทียบกับ c18
คอลัมน์ ( 150 มิลลิเมตร× 4.6 มม. , 5 μ M ) และ
คอลัมน์ C18 50 มม. × 4.6 มม. , 5 μ m
) กับความยาวคลื่นที่ 224 nm ( กรดซอร์บิค ) ,
234 nm ( benzoic acid ) และ 254 nm ใช้ไนไตรล์และ 5 mm

( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7 ) ในช่วงต่อจาก 5:95 - 30 ต่อ 70 .
ทั้งกรดมีตัวอย่างได้อย่างรวดเร็วและไม่สามารถ
แยกจากการแทรกแซงเมทริกซ์ เมทานอล
ถูกแทนที่ในช่วงอัตราส่วนเดียวกัน แต่ยอดของทั้งกรดถูก

ตัวอย่าง Co . เพิ่มฟอสเฟตบัฟเฟอร์ความเข้มข้น
( 5-30 มม. ) ทำให้เพิ่มสาร ' ความคงทนลดลงตามปัจจัยและค่า

ดังนั้นมติ แอมโมเนียมอะซิเตทในสารละลายฟอสเฟตที่ใช้แทน

เพื่อให้บรรลุการแก้ปัญหาที่ดีที่สุด ความละเอียดสูงสุด และน่าสงสาร
ติดตามได้ไน
เมื่อใช้ การแยกกรดเบนโซอิก และกรดซอร์บิคได้ โดยเปลี่ยน