Sample preparationTwo g of crude RJ

Sample preparation
Two g of crude RJ was placed in a 10 mL volu- metric flask, and a water/methanol solution (3:1) was added to make a final volume in the flask of no more than 9 mL, Flask contents were mixed. To weigh the RJ sample directly in the small 10 mL flask, a 5 mL plastic pipette tip was used: part of the bottom end of the pipette tip was cut away and the top end inserted in a rubber pipette filler. Then the RJ sample, already homogenized with a metal spat- ula, was drawn into the pipette tip and easily deliv- ered into the volumetric flask. Alternatively, a 3 mL polyethylene disposable Pasteur pipette can be used, after cutting away part of the tip.
Optionally, to include a surrogate standard, 0.2 mL of a solution composed of 5 g of xylose and 25 mL of a 3:1 solution of water/methanol was added. This gave a final xylose concentration of 4 mg/mL.
A 0.2 mL volume of Carrez I reagent (distilled water solution of potassium hexacyanoferrate(II), K4Fe(CN)6·3H2O, 15 g/100 mL) was added and mixed. Subsequently, a 0.2 mL volume of Carrez II reagent (distilled water solution of zinc acetate, Zn(CH3COO)2·2H2O, 30 g/100 mL) was added and mixed. The flask was then filled to 10 mL volume with the water/methanol solution and mixed. The solution was transferred to a 10 mL glass centrifuge vial and centrifuged at 4000 rpm for 15 minutes to remove the protein fraction.
An aliquot of 5 mL of the supernatant was trans- ferred to a 10 mL glass vial (provided with cap) that had been pre-washed with dichloromethane. Four to 5 mL of dichloromethane was added, the vial was capped and shaken and then vortexed vigorously for at least two minutes. The two layers were allowed to separate and the upper layer (containing the sugar fraction) was collected with a Pasteur pipette. Two additional extractions were performed on this sugar fraction as described above. Following the third extraction, the sugar fraction was filtered through a 0.45 μm disposable syringe filter (e.g. Whatman Puradisc 25AS, polysulfone filter media). The sam- ple was refrigerated and used for HPLC injection within 3 days.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเตรียมตัวอย่างRJ ดิบ 2 กรัมอยู่ในขวดระเหย volu เมตริก 10 mL เพิ่มโซลูชันเมทานอล/น้ำ (3:1) จะทำให้ไดรฟ์ข้อมูลสุดท้ายในขวดของไม่เกิน 9 มิลลิลิตร ขวดเนื้อหาถูกผสม ใช้ 5 มล.พลาสติกปิเปตทิปการชั่งน้ำหนักตัวอย่าง RJ โดยตรงในขวดขนาดเล็ก 10 มล. : เป็นส่วนหนึ่งของปลายด้านล่างของปลายปิเปตถูกตัดออกไปและปลายด้านบนใส่ในยางปิเปตสารตัวเติม แล้ว อย่าง RJ, homogenized แล้ว ด้วยการทะเลาะวิวาทกันโลหะ-ula ถูกดึงเข้าไปในปลายปิเปตและง่ายดาย ered deliv ลงในขวดแก้ววัดปริมาตร อีกวิธีหนึ่งคือ 3 mL พลาสติกทิ้งเปตปาสเตอร์ใช้ หลังจากตัดออกไปเป็นส่วนหนึ่งของคำแนะนำเลือก การรวมตัวแทนมาตรฐาน 0.2 mL ของโซลูชันที่ประกอบด้วย 5 กรัมของสารละลาย 3:1 น้ำ/เมทานอล 25 mL ถูก นี้ทำให้ความเข้มข้นสารสุดท้ายของ 4 mg/mLCarrez ระดับ 0.2 mL ผมเพิ่ม และผสมน้ำยา (น้ำกลั่นละลายโพแทสเซียม hexacyanoferrate(II), K4Fe (CN) 6·3H2O, 15 g/100 mL) ต่อมา เอเจนต์ Carrez II (น้ำกลั่นละลายสังกะสี acetate, Zn (CH3COO) 2·2H2O, 30 g/100 mL) ระดับ 0.2 mL ถูกเพิ่ม และผสม นั้นแตกแล้วกับปริมาณ 10 มล.ที่เต็มไป ด้วยการแก้ปัญหาน้ำ/เมทานอล และผสม การแก้ปัญหาถูกโอนไปขวดเหวี่ยงแก้ว 10 มล. และจากที่ 4000 rpm สำหรับ 15 นาทีเมื่อต้องการเอาเศษส่วนโปรตีนส่วนลงตัวของ 5 มล.ของ supernatant เป็นทรานส์-ferred ไปเป็น 10 mL ขวดแก้ว (มีฝา) ที่ได้รับการล้างก่อน ด้วย dichloromethane เพิ่ม 4-5 mL ของ dichloromethane ต่อยอด และเขย่าขวด และ vortexed แล้วอย่างจริงจังอย่างน้อย 2 นาที สองชั้นได้รับอนุญาตให้แยก และเก็บชั้นบน (ประกอบด้วยเศษส่วนน้ำตาล) กับปิเปตปาสเตอร์ สกัดเพิ่มเติมสองได้ดำเนินการในส่วนน้ำตาลนี้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้สามแยก เศษส่วนน้ำตาลถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.45 ไมครอนทิ้งเข็มฉีดยา (เช่น 25AS Whatman Puradisc พอลิซัลโฟนสื่อ) Sam-ple ถูกแช่เย็น และใช้สำหรับฉีด HPLC ภายใน 3 วัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมสารตัวอย่าง
สองกรัมของ RJ น้ำมันดิบถูกวางไว้ใน 10 มล volu- ขวดตัวชี้วัดและวิธีการแก้ปัญหาน้ำ / เมทานอล (3: 1) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้เป็นเล่มสุดท้ายในขวดไม่เกิน 9 มลเนื้อหาขวดถูกผสม . การชั่งน้ำหนักตัวอย่าง RJ ได้โดยตรงในขนาดเล็ก 10 มิลลิลิตรขวดพลาสติก 5 มลปลายปิเปตถูกใช้เป็นส่วนหนึ่งของปลายด้านล่างของปลายปิเปตถูกตัดออกไปและปลายด้านบนแทรกอยู่ในฟิลเลอร์ยางปิเปต จากนั้นกลุ่มตัวอย่าง RJ, ปั่นแล้วกับโลหะ spat- Ula ถูกดึงเข้าสู่ปลายปิเปตได้อย่างง่ายดายและจับอย่าง ered เข้าไปในขวดปริมาตร ผลัดกัน 3 มลเอทิลินทิ้งปาสเตอร์ปิเปตสามารถนำมาใช้หลังจากตัดออกไปเป็นส่วนหนึ่งของปลาย.
เลือกที่จะรวมถึงมาตรฐานตัวแทน 0.2 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาประกอบด้วย 5 กรัมไซโลสและ 25 มล 3: วิธีการแก้ปัญหาที่ 1 น้ำ / เมทานอลถูกเพิ่มเข้ามา เรื่องนี้ทำให้ความเข้มข้นไซโลสุดท้ายของ 4 mg / ml.
0.2 ปริมาณมลสาร Carrez ฉัน (สารละลายน้ำกลั่นของโพแทสเซียม hexacyanoferrate (II), K4Fe (CN) 6 · 3H2O 15 กรัม / 100 มิลลิลิตร) ถูกบันทึกและผสม ต่อจากนั้นปริมาณมล 0.2 ของ Carrez II น้ำยา (สารละลายน้ำกลั่นของอะซิเตทสังกะสี Zn (CH3COO) 2 · 2H2O, 30 กรัม / 100 มิลลิลิตร) ถูกบันทึกและผสม กระติกน้ำก็เต็มไปแล้วปริมาณมล 10 พร้อมด้วยน้ำแก้ปัญหา / เมทานอลผสม วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกย้ายไปแก้วมล 10 centrifuge ขวดและหมุนเหวี่ยงที่ 4000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีเพื่อลบส่วนโปรตีน.
หาร 5 มิลลิลิตรใสเป็นทรานส์ ferred ไปมิลลิลิตรขวดแก้ว 10 (ให้มีฝาปิด) ที่มี รับ pre-ล้างด้วยไดคลอโรมีเทน สี่ถึง 5 มลไดคลอโรมีเทนเสริมขวดเป็นหมวกและเขย่าแล้วหมุนวนอย่างจริงจังเป็นเวลาอย่างน้อยสองนาที สองชั้นได้รับอนุญาตให้แยกและชั้นบน (ที่มีส่วนน้ำตาล) ที่ถูกเก็บรวบรวมด้วยปิเปตปาสเตอร์ สองสกัดเพิ่มเติมได้ดำเนินการในส่วนนี้น้ำตาลตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้การสกัดที่สามส่วนน้ำตาลถูกกรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยาที่ใช้แล้วทิ้ง 0.45 ไมครอน (เช่น Whatman Puradisc 25AS สื่อกรอง Polysulfone) PLE ตัวอย่างทดสอบไว้ในตู้เย็นได้รับและใช้สำหรับการฉีด HPLC ภายใน 3 วัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างการเตรียม2 G ของดิบ RJ อยู่ใน 10 ml โวลู - วัดขวดและแก้ปัญหาน้ำเมทานอล ( 3 : 1 ) คือการเพิ่มให้ปริมาณสุดท้ายในขวดไม่เกิน 9 ml ขวดเนื้อหาผสม ชั่ง RJ ตัวอย่างโดยตรงในขนาดเล็ก 10 ml ขวดพลาสติก 5 ml ใช้ไปเปตทิพ : ส่วนหนึ่งของปลายล่างของไปเปตทิพถูกตัดออกไปและถูกแทรกลงในด้านบนสุดบรรจุปิเปต ยาง แล้ว RJ ตัวอย่าง แล้วบดด้วยโลหะถ่มน้ำลาย - อูล ถูกดึงเข้าไปในเปต ทิปง่ายๆ deliv - รด ลงในขวดปริมาตร . หรือ 3 ml polyethylene ทิ้งปาสเตอร์เปตสามารถใช้หลังจากตัดไปบางส่วนของเคล็ดลับเลือก รวมมาตรฐานตัวแทน , 0.2 มิลลิลิตรของสารละลายที่ประกอบด้วย 5 กรัมของน้ำตาลไซโลสและ 25 มิลลิลิตรของสารละลายของน้ำ 3 / เมทานอลที่ถูกเพิ่มเข้ามา ให้ความเข้มข้นน้ำตาลไซโลสสุดท้ายของ 4 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร0.2 มิลลิลิตร ปริมาณ carrez ผม Reagent ( กลั่นสารละลายโปแตสเซียม hexacyanoferrate ( II ) , k4fe ( CN ) 6 ด้วย 3h2o 15 กรัม / 100 มล. ) คือการเพิ่มและผสม ต่อมาเป็น 0.2 มิลลิลิตร ปริมาณของสารเคมี carrez II ( กลั่นสารละลายซิงค์อะซิเตต , Zn ( ch3coo ) 2 ด้วย 2H2O-dx , 30 g / 100 ml ) คือการเพิ่มและผสม ขวด แล้วเติม 10 ml ปริมาณเมทานอลกับน้ำ / โซลูชั่นและการผสม โซลูชั่นที่ถูกส่งไป 10 ml ขวดแก้วซึ่งไฟฟ้าที่ 4000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 15 นาที เพื่อเอาโปรตีนเศษส่วนเป็นส่วนลงตัวของ 5 ml ของน่านคือทรานส์ - ferred ไป 10 ml ขวดแก้ว ( มีฝาครอบ ) ที่ได้รับก่อนการล้างด้วยไดคลอโรมีเทน . 4 กับ 5 มิลลิลิตร ไดคลอโรมีเทนถูกเพิ่ม ขวดถูกปกคลุมและเขย่าแล้ว vortexed อย่างจริงจังอย่างน้อย 2 นาที 2 ชั้น สามารถแยก ชั้นบน ( ที่ประกอบด้วยน้ำตาลเศษส่วน ) รวบรวมกับปาสเตอร์หลอด มาเพิ่มอีก 2 ทีม ส่วนน้ำตาลจำนวนนี้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้การแยกสาม น้ำตาลส่วนถูกกรองผ่าน 0.45 μ M ผ้าอ้อมเข็มตัวกรอง ( เช่น whatman puradisc 25as , สื่อกรองโพลีซัลโฟน ) แซม - เปิ้ลเป็นตู้เย็นและใช้สำหรับฉีด HPLC ภายใน 3 วัน