Culture of BMSCThe bone marrow was

Culture of BMSC
The bone marrow was placed on ice, transported to the laboratory (approximately 1 km), transferred to a 25 mL canonical tube, and centrifuged at 1,000 × g (3 min; room temperature). The supernatant was removed and pellet re-suspended in 10 mL α-minimum essential medium (MEM; Life Technologies, Grand Island, NY, USA) and 40 mL ammonium chloride (Stemcell technologies, Vancouver, BC, Canada) to lyse red blood cells. The sample was vortexed, placed on ice for 10 min, and re-centrifuged at 1,000 × g (3 min; room temperature). The supernatant was removed, cells were resuspended in 10 mL α-MEM, and vortexed. The sample was filtered (70 μm cell strainer), reconstituted in maintenance media (Table 1), and plated in a 100 mm cell culture dish (1 per 2 mL of bone marrow). In preliminary experiments with these cells, we determined that some cells attached quickly (within 1 h) and other cells took 3 to 7 d to adhere to the culture dish. To determine if there was a difference in the ability of these cells to proliferate, cells were separated for initial proliferation experiments. The cells were incubated at 37°C, 5% CO2 for 20 min to establish the early adherence cell population. Six milliliters of maintenance media were added to adherent cells. Non-adherent cells were removed, counted and re-plated at 6 or 12 million cells/plate in maintenance media to establish the late adherent population. All cells were maintained at 37°C, 5% CO2 for 3 d and then 4 mL fresh maintenance media added. After 6 d, media and any remaining non-adherent cells were removed, and cells washed with PBS and media replaced every 3 d until cells reached 70% confluence. All experiments were repeated two to four times using cells from each of the three animals at the fourth passage. Results were consistent across animals and replicates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมของ BMSCThe bone marrow was placed on ice, transported to the laboratory (approximately 1 km), transferred to a 25 mL canonical tube, and centrifuged at 1,000 × g (3 min; room temperature). The supernatant was removed and pellet re-suspended in 10 mL α-minimum essential medium (MEM; Life Technologies, Grand Island, NY, USA) and 40 mL ammonium chloride (Stemcell technologies, Vancouver, BC, Canada) to lyse red blood cells. The sample was vortexed, placed on ice for 10 min, and re-centrifuged at 1,000 × g (3 min; room temperature). The supernatant was removed, cells were resuspended in 10 mL α-MEM, and vortexed. The sample was filtered (70 μm cell strainer), reconstituted in maintenance media (Table 1), and plated in a 100 mm cell culture dish (1 per 2 mL of bone marrow). In preliminary experiments with these cells, we determined that some cells attached quickly (within 1 h) and other cells took 3 to 7 d to adhere to the culture dish. To determine if there was a difference in the ability of these cells to proliferate, cells were separated for initial proliferation experiments. The cells were incubated at 37°C, 5% CO2 for 20 min to establish the early adherence cell population. Six milliliters of maintenance media were added to adherent cells. Non-adherent cells were removed, counted and re-plated at 6 or 12 million cells/plate in maintenance media to establish the late adherent population. All cells were maintained at 37°C, 5% CO2 for 3 d and then 4 mL fresh maintenance media added. After 6 d, media and any remaining non-adherent cells were removed, and cells washed with PBS and media replaced every 3 d until cells reached 70% confluence. All experiments were repeated two to four times using cells from each of the three animals at the fourth passage. Results were consistent across animals and replicates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมของ BMSC
ไขกระดูกถูกวางลงบนน้ำแข็งเคลื่อนย้ายไปยังห้องปฏิบัติการ (ประมาณ 1 กม.), ถ่ายโอนไปยังหลอดบัญญัติ 25 มิลลิลิตรและหมุนเหวี่ยงที่ 1,000 ×กรัม (3 นาที; อุณหภูมิห้อง) สารละลายจะถูกลบออกและเม็ดใหม่ที่ลอยอยู่ใน 10 มลαขั้นต่ำกลางที่สำคัญ (MEM; เทคโนโลยีชีวิต Grand Island, NY, USA) และ 40 มลแอมโมเนียมคลอไรด์ (เทคโนโลยี Stemcell, Vancouver, BC, แคนาดา) ที่จะทําลายเม็ดเลือดแดง . ตัวอย่างที่ได้รับการ vortex วางบนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาทีและอีกครั้งหมุนเหวี่ยงที่ 1,000 ×กรัม (3 นาที; อุณหภูมิห้อง) ใสถูกลบออกเซลล์ถูก resuspended ใน 10 มลα-MEM และการ vortex ตัวอย่างถูกกรอง (70 ไมครอนกรองเซลล์) สร้างขึ้นในสื่อการบำรุงรักษา (ตารางที่ 1) และชุบใน 100 มิลลิเมตรจานเพาะเลี้ยงเซลล์ (1 ต่อ 2 มิลลิลิตรไขกระดูก) ในการทดลองเบื้องต้นกับเซลล์เหล่านี้เราได้พิจารณาแล้วว่าเซลล์บางที่แนบมาได้อย่างรวดเร็ว (ภายใน 1 ชั่วโมง) และเซลล์อื่น ๆ ใช้เวลา 3-7 วันให้เป็นไปตามจานวัฒนธรรม เพื่อตรวจสอบว่ามีความแตกต่างในความสามารถของเซลล์เหล่านี้เพื่อเพิ่มจำนวนเซลล์ถูกแยกออกสำหรับการทดลองการแพร่กระจายเริ่มต้น เซลล์ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C, CO2 5% เป็นเวลา 20 นาทีในการสร้างประชากรที่ยึดมั่นเซลล์ต้น หกมิลลิลิตรของสื่อการบำรุงรักษาถูกเพิ่มเข้าไปในเซลล์สานุศิษย์ เซลล์ปลอดสานุศิษย์ถูกถอดออกมานับอีกครั้งและโครเมียมที่ 6 หรือ 12 ล้านเซลล์ / แผ่นในสื่อการบำรุงรักษาเพื่อสร้างประชากรที่ปลายสานุศิษย์ เซลล์ทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 ° C, CO2 5% เป็นเวลา 3 วันแล้ว 4 มิลลิลิตรสื่อการบำรุงรักษาสดเพิ่ม หลังจาก 6 D สื่อและที่เหลือเซลล์ที่ไม่สานุศิษย์ถูกถอดออกและเซลล์ล้างด้วยพีบีเอสและสื่อเปลี่ยนทุก 3 จนกว่าเซลล์ถึงจุดบรรจบ 70% ทุกการทดลองซ้ำแล้วซ้ำอีก 2-4 ครั้งโดยใช้เซลล์จากแต่ละสามสัตว์ในทางที่สี่ ผลการวิจัยที่สอดคล้องกันระหว่างสัตว์และซ้ำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมของ bmsc
ไขกระดูกถูกวางไว้บนน้ำแข็ง ส่งไปยังห้องปฏิบัติการ ( ประมาณ 1 กม. ) , โอนไปยัง 25 ml แบบหลอด ไฟฟ้าที่× 1000 กรัม ( 3 นาที อุณหภูมิในห้อง ) โดยนำเม็ดออกอีกครั้งและแขวนลอยใน 10 มล. แอลฟาขั้นต่ำที่จำเป็นขนาดกลาง ( แหม่ม เทคโนโลยี ชีวิตในเกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา ) และแอมโมเนียมคลอไรด์ 40 ml ( สเต็มเซลล์เทคโนโลยี , แวนคูเวอร์ก่อนคริสต์ศักราช , แคนาดา ) ทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดง จำนวน vortexed วางไว้บนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาทีและระดับที่× 1000 กรัม ( 3 นาที อุณหภูมิในห้อง ) ที่นำออกเซลล์มี resuspended 10 มล. แอลฟาแหม่ม และ vortexed . ตัวอย่างกรอง ( 70 μเซลล์ M ตะแกรง ) , สร้างบำรุงรักษาสื่อ ( ตารางที่ 1 ) และชุบ 100 มม. จานเพาะเลี้ยงเซลล์ ( 1 ต่อ 2 ml ของไขกระดูก )ในการทดลองเบื้องต้นกับเซลล์เหล่านี้ เราพบว่า เซลล์บางเซลล์ที่แนบมาได้อย่างรวดเร็ว ( ภายใน 1 ชั่วโมง ) และเซลล์อื่น ๆ เอา 3 กับ 7 D จะยึดติดกับวัฒนธรรมอาหาร เพื่อตรวจสอบว่ามีความแตกต่างในความสามารถของเซลล์เหล่านี้จะเพิ่มจำนวนเซลล์แยกสำหรับการทดลองการเริ่มต้น เซลล์ที่อุณหภูมิ 37 องศา Cคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์นาน 20 นาทีเพื่อสร้างเซลล์ต้นในประชากร 6 มิลลิลิตรของการบำรุงรักษาสื่อการสอนเพิ่มติดเซลล์ ไม่ติดเซลล์ออกนับและชุบที่ 6 หรือ 12 ล้านเซลล์ / จานบำรุงรักษาสื่อเพื่อสร้างประชากรติดสาย เซลล์ทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ที่ 37 องศา C คาร์บอนไดออกไซด์ 5% 3 D แล้ว 4 ml รักษาสื่อสดเพิ่ม หลังจาก 6 Dสื่อใด ๆที่เหลือไม่ติดเซลล์ถูกเอาออก และเซลล์ล้างด้วย pbs และสื่อเปลี่ยนทุกๆ 3 D จนกว่าเซลล์ถึง 70% บรรจบกัน การทดลองเป็นเวลาสองถึงสี่ครั้ง โดยใช้เซลล์จากแต่ละสามสัตว์ที่ผ่าน 4 ผลลัพธ์ที่ได้มีความสอดคล้องกันระหว่างสัตว์และ replicates .