Native Polyacrylamide Gel Electroph

Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis In gel detection of peroxidase was performed using polyacrylamide gel (4.0% for stacking gel and 7.5% for resolving gel). Electrophoresis was carried out using a mini-VE vertical slab-gel unit (Amersham Bioscience, USA) with constant current of 40 mA. The native gel was incubated with 160 mM guaiacol and 160 mM hydrogen peroxide in 10 mM phosphate buffer, pH 6.0 at 25°C until the orange band of tetraguiacol appeared locating protein with peroxidase-like activity (30 min). This protocol was modified from that described by Johri et al. [19]. The gel was rinsed with distilled water for 30 min and photographed, followed by placing the gel in the protein staining solution (0.025% Coomassie Brilliant Blue R-250, 40% methanol and 7% acetic acid) overnight. Destaining protocol was carried out until the background of the gel was clear and ready to be photographed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ท้องถิ่นตรวจสอบวิเคราะห์อิในเจตรวจจับฮอสได้ดำเนินการโดยใช้การตรวจสอบวิเคราะห์เจล (เจซ้อน 4.0% และ 7.5% สำหรับการแก้ไขเจล) อิดำเนินการด้วยหน่วยแนวตั้งพื้นเจมินิ-VE (Amersham วิทยาศาสตร์ชีวภาพ สหรัฐอเมริกา) อย่างต่อเนื่องปัจจุบัน 40 mA เจดั้งเดิม incubated guaiacol 160 มม.และ 160 มม.ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 10 มม. pH 6.0 ที่ 25° C จนกว่าแถบสีส้มของ tetraguiacol ปรากฏ ตำแหน่งโปรตีนกับฮอสเหมือนกิจกรรม (30 นาที) โพรโทคอลนี้ถูกแก้ไขจากที่อธิบายไว้โดย Johri et al. [19] เจถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่น 30 นาที และถ่ายภาพ ตาม ด้วยวางเจโปรตีนย้อมโซลูชัน (0.025% Coomassie Blue สดใส R-250 เมทานอล 40% และ 7% กรดอะซิติก) ค้างคืน Destaining โพรโทคอลดำเนินการจนกว่าพื้นหลังของเจได้ชัดเจน และพร้อมที่จะถ่ายภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชนพื้นเมืองอะคริเลต gel electrophoresis เจลในการตรวจสอบของ peroxidase ได้ดำเนินการใช้เจลอะคริเลต (4.0% สำหรับซ้อนเจลและ 7.5% สำหรับการแก้ปัญหาเจล) electrophoresis ถูกดำเนินการโดยใช้ mini-VE แนวตั้งหน่วยแผ่นเจล (Amersham ชีววิทยาศาสตร์, สหรัฐอเมริกา) กับกระแสคงที่ 40 mA เจลพื้นเมืองถูกบ่มกับ 160 มิลลิเมตรและมี guaiacol 160 มิลลิไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 10 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 6.0 ที่ 25 ° C จนวงส้ม tetraguiacol ปรากฏตำแหน่งโปรตีนที่มีฤทธิ์เหมือน peroxidase (30 นาที) โปรโตคอลนี้ถูกดัดแปลงมาจากที่อธิบายโดย Johri et al, [19] เจลได้รับการล้างด้วยน้ำกลั่นเป็นเวลา 30 นาทีและถ่ายภาพตามด้วยการวางเจลในสารละลายโปรตีนย้อมสี (0.025% Coomassie สีฟ้าสดใส R-250, เมทานอล 40% และ 7% กรดอะซิติก) ในชั่วข้ามคืน โปรโตคอล Destaining ได้ดำเนินการจนพื้นหลังของเจลเป็นที่ชัดเจนและพร้อมที่จะถ่ายภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นเมือง polyacrylamide gel electrophoresis ในการตรวจหาเอนไซม์เจล ได้ดําเนินการโดยใช้ polyacrylamide gel ( 4.0 % วางซ้อนเจลและ 7.5% และเจล ) วิธีดำเนินการใช้มินิได้แนวตั้งพื้นเจล ( หน่วยที่วิทยาศาสตร์ชีวภาพ , USA ) กับกระแสคงที่ของ MA 40 เจลพื้นเมืองที่บ่มด้วย 160 มม. ได 160 มม. 10 มม. ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.0 อุณหภูมิ 25 ° C จนกระทั่งส้มวงดนตรีของ tetraguiacol ปรากฏซึมโปรตีนด้วยเอนไซม์ เช่น กิจกรรม ( 30 นาที ) โปรโตคอลนี้ถูกดัดแปลงจากที่อธิบายโดย johri et al . [ 19 ] เจลคือล้างด้วยน้ำกลั่นประมาณ 30 นาที และถ่ายภาพ ตามด้วยการวางเจลในการแก้ปัญหา ( เมทานอลโปรตีน 40% 0.025% เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส r-250 และ 7% กรด ) ในชั่วข้ามคืน destaining โปรโตคอลได้ดำเนินการจนพื้นหลังของเจลมีความชัดเจน และพร้อมที่จะถ่ายภาพ