There are three components that are

There are three components that are critical to the KASP assay: 1) a purified DNA sample, 2) two allele-specific forward primers, and 3) a common reverse primer. A minimum of 5-10 ng of the extracted DNA sample are required for the method to function properly. The DNA sample is purified by adding a mixture of chemicals to the buffer solution.[2] In the first round of PCR, a KASP primer mix that contains the two allele-specific forward primers and the single reverse primer is added to the mixture. The specific nature of the forward primers allows for the primer to bind solely at the SNP of interest, allowing DNA polymerase to lay down the rest of the complementary nucleotides. During this time, the common reverse primer begins to lay down complementary nucleotides on the opposite strand of DNA. This ends the first round of PCR.[2]

In the second round of PCR, a compliment to the allele-specific forward primer is generated when the common reverse primer binds to the amplicon formed in the first round of PCR. Finally, the thermocycling of the PCR reaction continues, starting the third portion of the KASP method. The FAM oligo—a fluorescently labeled primer found in the master mix—complements the tail sequence of the common reverse primer, allowing for elongation to occur. This occurs multiple times throughout the thermocycling settings and the fluorescent signalling becomes stronger as more FAM oligo primers are used in the amplification process

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีสามองค์ประกอบที่สำคัญในการทดสอบ KASP: 1) ตัวอย่างดีเอ็นเอบริสุทธิ์ ไพรเมอร์ไปข้างหน้าเฉพาะของอัลลีล 2) 2 และ 3) ทั่วไปกลับรองพื้น อย่างน้อย 5-10 ฉบับตัวอย่างดีเอ็นเอที่สกัดจำเป็นสำหรับวิธีการไม่ถูกต้อง ตัวอย่างดีเอ็นเอบริสุทธิ์ โดยการเพิ่มส่วนผสมของสารเคมีสารละลายบัฟเฟอร์ [2] ในรอบแรกของ PCR การผสมรองพื้นของ KASP ประกอบด้วยไพรเมอร์ไปข้างหน้าเฉพาะของอัลลีล 2 และสีย้อนหลังเดียวถูกเพิ่มไปส่วนผสม ลักษณะเฉพาะของไพรเมอร์ไปข้างหน้าให้รองพื้นการผูกที่ SNP น่าสนใจ ทำให้ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสลงของนิวคลีโอไทด์ประกอบเท่านั้น ระหว่างเวลานี้ สีย้อนกลับทั่วไปเริ่มลงประกอบนิวคลีโอไทด์ในสาระตรงกันข้ามของดีเอ็นเอ นี้จบรอบแรกของ PCR [2]ในรอบที่สองของ PCR คำชมเชยเพื่อให้รองพื้นไปข้างหน้าของอัลลีลเฉพาะถูกสร้างเมื่อผูกทับกลับทั่วไป amplicon ที่เกิดขึ้นในรอบแรกของ PCR ในที่สุด เทอร์โม゚ของปฏิกิริยา PCR ต่อไป เริ่มต้นส่วนสามของวิธี KASP สารโอลิโก FAM — รองพื้นป้าย fluorescently พบในส่วนผสมหลัก — กับลำดับที่หางของไพรกลับทั่วไป ช่วยยืดตัวให้เกิดขึ้น ปัญหานี้เกิดขึ้นหลายครั้งตลอดการตั้งค่าเทอร์โม゚ และไฟสัญญาณฟลูออเรสเซนต์จะดีเป็นไพรเมอร์สารโอลิโก FAM อื่น ๆ ที่ใช้ในการขยาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1) ตัวอย่างดีเอ็นเอบริสุทธิ์ 2) สองอัลลีลเฉพาะไพรเมอร์ไปข้างหน้า 3) ไพรเมอร์กลับร่วมกันและมีสามองค์ประกอบที่มีความสำคัญต่อการทดสอบ KASP มี อย่างน้อย 5-10 NG ของตัวอย่างดีเอ็นเอที่สกัดที่จำเป็นสำหรับวิธีการที่จะทำงานอย่างถูกต้อง ตัวอย่างดีเอ็นเอบริสุทธิ์โดยการเพิ่มส่วนผสมของสารเคมีเพื่อแก้ปัญหาบัฟเฟอร์. [2] ในรอบแรกของ PCR ผสมรองพื้น KASP ที่มีไพรเมอร์ทั้งสองไปข้างหน้าอัลลีลที่เฉพาะเจาะจงและไพรเมอร์กลับเดียวถูกเพิ่มลงในส่วนผสม ลักษณะเฉพาะของไพรเมอร์ไปข้างหน้าเพื่อช่วยให้ไพรเมอร์ในการผูก แต่เพียงผู้เดียวที่ SNP ที่น่าสนใจที่ช่วยให้ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ที่จะวางลงส่วนที่เหลือของนิวคลีโอเสริม ในช่วงเวลานี้ไพรเมอร์ทั่วไปย้อนกลับเริ่มต้นที่จะล้มตัวลงนอนนิวคลีโอเสริมในสาระตรงข้ามของดีเอ็นเอ นี้จบรอบแรกของ PCR. [2] ในรอบที่สองของ PCR, ชมเชยไปยังอัลลีลเฉพาะไพรเมอร์ไปข้างหน้าถูกสร้างขึ้นเมื่อไพรเมอร์กลับร่วมกันผูกกับ amplicon ที่เกิดขึ้นในรอบแรกของ PCR สุดท้าย thermocycling ของปฏิกิริยา PCR ยังคงเริ่มต้นส่วนที่สามของวิธี KASP FAM Oligo-ไพรเมอร์ที่มีป้ายกำกับ fluorescently พบในต้นแบบผสมเติมเต็มลำดับที่หางของไพรเมอร์กลับร่วมกันเพื่อให้สามารถยืดตัวที่จะเกิดขึ้น นี้เกิดขึ้นหลายครั้งตลอดการตั้งค่า thermocycling และการส่งสัญญาณเรืองแสงจะกลายเป็นดีเป็น FAM เพิ่มเติมไพรเมอร์ Oligo ที่ใช้ในกระบวนการขยาย