At the end of the conditioning peri

At the end of the conditioning period, theDNA ploidy levelwas again
individually verified by flow cytometry for all the diploid and triploid
oysters. Mature Pacific oysters (diploid n = 20, triploid n = 70) were
then transferred to the experimental hatchery in Argenton (Ifremer,
Northern Brittany, France). They were maintained in a conditioning
environment, according to Song et al. (2009). Oyster whole weight
(W) and flesh weight following superficial drying with soft paper
(FW) were measured and condition index was calculated: CI =
(FW / W) ∗ 100, according to Royer et al. (2008). In order to determine
their sex, six samples were pipetted from the gonad of each oyster
(covering the whole gonad volume). Diploid and triploid oysters were
stripped in seawater (33.7 salinity, 19 °C).
Sperm density was assessed using a Thomas cell after gamete dilution
in seawater (ranging from 1:1 to 1:25, depending on individual sperm
concentration). The total number of spermatozoa collected from each
oyster was calculated (gamete density × seawater volume). To estimate
spermmotility, spermwas diluted in an activating solution (AS: seawater,
5 g L−1 bovine serum albumin, Tris 20 mM, pH 8.10, caffeine 10 mM,
dilution rate: 1:9). Sperm movement was observed at 10 min and 2 h
post-activation under a phase contrast microscope (Olympus BX51, ×10
magnification) and recorded (Sony camera, 60 frames s−1, 4 s film
duration, 3 × 30 spermatozoa). Then, sperm motility characteristics
(percentage of motile sperm and velocity of the average path: VAP)
were assessed using a CASA plugin developed for Image J, according
to Suquet et al. (2014). To measure intracellular ATP content, 107 spermin
500 μL seawater were transferred into 2 mL cryotubes. ATP was assessed
in triplicates by bioluminescence (ATP lite kit, Perkin Elmer).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในตอนท้ายของระยะเวลาที่เครื่องที่ theDNA ploidy levelwas
อีกครั้งมีการยืนยันเป็นรายบุคคลโดยการไหลภูมิคุ้มกันสำหรับทุกtriploid
ซ้ำและหอยนางรม หอยนางรมแปซิฟิกผู้ใหญ่ (ซ้ำจำนวน 20 triploid n = 70)
ได้รับการถ่ายโอนไปแล้วในโรงเพาะฟักทดลองArgenton (Ifremer,
ภาคเหนือของบริตตานีฝรั่งเศส) พวกเขาได้รับการดูแลในปรับอากาศสภาพแวดล้อมตามเพลง et al,
(2009) น้ำหนักทั้งหอยนางรม
(W) และน้ำหนักเนื้อต่อไปนี้การอบแห้งตื้นด้วยกระดาษนุ่ม
(FW) ได้รับการวัดและดัชนีที่คำนวณสภาพ: CI =
(FW / W) * 100 ตาม Royer et al, (2008) เพื่อตรวจสอบเพศของพวกเขาหกตัวอย่างปิเปตจากอวัยวะสืบพันธุ์ของแต่ละหอยนางรม(ครอบคลุมปริมาณอวัยวะสืบพันธุ์ทั้งหมด) ซ้ำและหอยนางรม triploid ถูกปล้นในน้ำทะเล(33.7 ความเค็ม 19 ° C). ความหนาแน่นของสเปิร์มได้รับการประเมินโดยใช้เซลล์โทมัสเซลล์สืบพันธุ์หลังจากเจือจางในน้ำทะเล (ตั้งแต่ 1: 1 ถึง 01:25 ขึ้นอยู่กับสเปิร์มของแต่ละบุคคลมีความเข้มข้น) จำนวนรวมของตัวอสุจิที่เก็บรวบรวมจากแต่ละหอยนางรมที่คำนวณได้ (ความหนาแน่นเซลล์สืบพันธุ์×ปริมาณน้ำทะเล) ในการประมาณการspermmotility, spermwas เจือจางในสารละลายเปิดใช้งาน (AS: น้ำทะเล5 กรัม L-1 ในซีรั่มอัลบูมิวัว Tris 20 มิลลิค่า pH 8.10, คาเฟอีน 10 มิลลิ, อัตราการเจือจาง: 1: 9) การเคลื่อนไหวของสเปิร์มเป็นข้อสังเกตที่ 10 นาทีและ 2 ชั่วโมงหลังการเปิดใช้งานภายใต้กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้าม(โอลิมปั BX51, × 10 ขยาย) และบันทึกไว้ (กล้องโซนี่, 60 เฟรม s-1 ฟิล์ม 4 s ระยะเวลา 3 × 30 ตัวอสุจิ) จากนั้นลักษณะการเคลื่อนไหวของอสุจิ(ร้อยละของสเปิร์มเคลื่อนที่และความเร็วของเส้นทางเฉลี่ย: VAP) ได้รับการประเมินโดยใช้ปลั๊กอิน CASA พัฒนาสำหรับภาพ J ตามไปSuquet et al, (2014) การวัดเนื้อหาภายในเซลล์เอทีพี 107 spermin น้ำทะเล 500 ไมโครลิตรถูกย้ายเป็น 2 มิลลิลิตร cryotubes เอทีพีได้รับการประเมินใน triplicates โดยชีวิตเรืองแสง (เอทีพีชุดไลต์เพอร์กินเอลเมอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในช่วงปลายของเครื่องปรับอากาศ thedna รองลงมาคือการตรวจสอบโดยการไหลแบบอีก
( สำหรับ Gold ทริพลอยด์
และหอยนางรม ผู้ใหญ่แปซิฟิกหอยนางรม ( n = 20 Gold ทริพลอยด์ , n = 70 )
แล้วย้ายไปอนุบาล การทดลองใน argenton ( ifremer
ภาคเหนือ , Brittany , ฝรั่งเศส ) พวกเขาถูกเก็บรักษาไว้ในสภาพแวดล้อมที่ปรับ
ตามเพลง et al . ( 2009 )หอยนางรม
น้ำหนักทั้งหมด ( W ) และเนื้อน้ำหนักต่อไปนี้ผิวเผินแห้งกับ
กระดาษนุ่ม ( FW ) จะถูกวัดและคำนวณดัชนีสภาพ : CI =
( FW / W ) ∗ 100 ตามโรเยอร์ et al . ( 2008 ) เพื่อตรวจสอบ
เพศของพวกเขาหกจำนวน pipetted จากต่อมเพศของแต่ละหอยนางรม
( ครอบคลุมเสียงเทศน์มหาชาติทั้งหมด ) และหอยนางรมเป็น Gold ทริพลอยด์
เปลือยในน้ำทะเล ( 33.7 ความเค็ม19 ° C )
ความหนาแน่นของตัวอสุจิและใช้โทมัส เซลล์หลังการผสมเจือจาง
ในน้ำทะเล ( ตั้งแต่ 1 : 1 ถึง 1 : 25 ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของอสุจิ
บุคคล ) จำนวนของอสุจิที่เก็บได้จากหอยนางรม ( เซลล์สืบพันธุ์แต่ละ
คำนวณความหนาแน่น×ปริมาณน้ำทะเล ) ค่า
spermmotility spermwas เจือจางในสารละลาย , การใช้ ( เช่น : น้ำทะเล
5 G L − 1 ) ซีรั่มอัลบูมินบริษัทพีเอช 8.10 , คาเฟอีน 20 มม. 10 มม.
อัตราการเจือจาง : 1 : 9 ) การเคลื่อนไหวของอสุจิ พบว่าเวลา 10 นาทีและ 2 H
โพสต์กระตุ้นใต้ต่างระดับกล้องจุลทรรศน์ ( Olympus bx51 × 10
, การขยาย ) และบันทึก ( กล้อง Sony , 60 เฟรม s − 1 , 4 s ภาพยนตร์
ระยะเวลา 3 × 30 สุจิ ) แล้ว เปอร์เซ็นต์อสุจิเคลื่อนไหวลักษณะ
( ร้อยละของอสุจิ และความเร็วเคลื่อนที่ ของเส้นทาง : เฉลี่ยแว็ป )
ทดลองใช้ปลั๊กอินสำหรับ Casa พัฒนาภาพ J ,
ไปตาม suquet et al . ( 2014 ) การวัด ATP ภายในเซลล์เนื้อหา 107 spermin
500 μผมน้ำทะเลถูกโอนออกเป็น 2 ml cryotubes . เอทีพีและ
3 ซ้ำโดยไบโอลูมิเนสเซน ( ชุด ATP เพอร์กินเอลเมอร์ Lite )