Viral RNA was extracted and PCR ana

Viral RNA was extracted and PCR analysis was done as previously
described [17]. Briefly, viral RNA was extracted from oral samples by
using the QIAamp viral RNA kit (QIAGEN, Valencia, Calif.) [19,20]. RNA
was eluted from the QIAgen columns in a final volume of 100 μL of elution
buffer and was stored at −80 °C until used. The PCR primers of the
NS5 gene were used to detect WNV [21]. The NS5 gene is shared among
the Japanese encephalitis virus complex, and thus we cannot say with
100% certainty that our positive detections of flavivirus RNA was indicative
of WNV as opposed to a related virus. WNV is generally more common
in PA and thus more likely to be detected using this methodology.
Viral RNA was converted to cDNA by utilizing the PowRSybr One-Step
RNA to CT Kit from Life Technologies. Five microliters of RNA and
50 pmol of each primer were used in a 50-μL total reaction volume by
following the manufacturer's protocol with cycling times as indicated
by Lanciotti et al. [21]. After the RT-PCR was performed, a 5-μL portion
was analyzed by agarose gel electrophoresis and the DNA was visualized
by ethidium bromide staining. WNV RNA, strain NY99, obtained
from the reference collection maintained at the Division of VectorBorne
Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention
(CDC) was used as a positive control in the RT-PCR assay

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอไวรัสถูกแยก และวิเคราะห์ PCR ทำเป็นก่อนหน้านี้อธิบาย [17] สั้น ๆ ไวรัส RNA ถูกแยกจากตัวอย่างที่ช่องปากโดยใช้ QIAamp ไวรัส RNA ชุด (QIAGEN วาเลนเซีย แคลิฟอร์เนีย) [19,20] อาร์เอ็นเอถูก eluted จากคอลัมน์ QIAgen ในไดรฟ์ข้อมูลสุดท้ายของ 100 μL ของชะบัฟเฟอร์ และถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้ ไพรเมอร์ PCR ของการNS5 ยีนถูกใช้เพื่อตรวจหา WNV [21] เป็นการใช้ร่วมกันระหว่างยีน NS5ไวรัสไข้สมองอักเสบที่ซับซ้อน และดังนั้นเราไม่สามารถพูดได้ด้วยความเชื่อมั่น 100% ว่าเราจับบวกของ flavivirus RNA บ่งบอกถึงของ WNV เมื่อเทียบกับไวรัสที่เกี่ยวข้อง WNV จะโดยทั่วไปทั่วไปในป่า และดังมากมักจะตรวจพบโดยใช้วิธีนี้อาร์เอ็นเอไวรัสถูกแปลงเป็น cDNA โดยใช้ขั้นตอนเดียว PowRSybrRNA ชุด CT จากเทคโนโลยีชีวิต Microliters ห้าของ RNA และใช้ในปฏิกิริยาทั้งหมด 50 μL ระดับเสียงโดย 50 pmol พื้นแต่ละระบุตามโพรโทคอลผู้ผลิตเวลาขี่จักรยานเป็นโดย Lanciotti et al. [21] หลังจากทำการ RT-PCR ส่วน 5-μL โดย agarose เจอิดู และดีเอ็นเอได้เปรอะเปื้อนโบรไมด์ ethidium WNV RNA สายพันธุ์ NY99 ได้รับจากการเก็บการอ้างอิงที่กอง VectorBorneโรคติดเชื้อ ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรคใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกในการ RT-PCR assay (CDC)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอ็นเอไวรัสถูกสกัดและการวิเคราะห์ PCR ได้ทำไว้ก่อนหน้านี้
อธิบาย [17] สั้น ๆ , อาร์เอ็นเอไวรัสถูกสกัดจากตัวอย่างในช่องปากโดย
ใช้ชุดอาร์เอ็นเอไวรัส QIAamp (QIAGEN, วาเลนเซีย, Calif.) [19,20] อาร์เอ็นเอ
ที่ถูกชะจากคอลัมน์ QIAGEN ในปริมาณสุดท้ายของ 100 ไมโครลิตรของชะ
บัฟเฟอร์และถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนใช้ ไพรเมอร์ PCR ของ
ยีน NS5 ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบ WNV [21] ยีน NS5 ใช้ร่วมกันระหว่าง
ซับซ้อนไวรัสไข้สมองอักเสบญี่ปุ่นและทำให้เราไม่สามารถพูดด้วย
ความมั่นใจ 100% ว่าการตรวจพบในเชิงบวกของเรา flavivirus RNA เป็นตัวบ่งชี้
ของ WNV เมื่อเทียบกับไวรัสที่เกี่ยวข้อง WNV โดยทั่วไปจะพบมาก
ในป่าและจึงมีแนวโน้มที่จะถูกตรวจพบโดยใช้วิธีการนี้.
อาร์เอ็นเอไวรัสที่ถูกดัดแปลงยีนโดยใช้ PowRSybr ขั้นตอนเดียว
RNA เพื่อ CT Kit จากชีวิตเทคโนโลยี ห้าไมโครลิตรของอาร์เอ็นเอและ
50 pmol ของแต่ละไพรเมอร์ถูกนำมาใช้ในปริมาณปฏิกิริยารวม 50 ไมโครลิตรโดย
ต่อไปนี้โปรโตคอลของผู้ผลิตที่มีเวลาขี่จักรยานตามที่ระบุ
โดย Lanciotti et al, [21] หลังจากที่ได้ดำเนินการ RT-PCR เป็นส่วน 5 ไมโครลิตร
ถูกวิเคราะห์โดยข่าวคราว agarose และ DNA ถูกมองเห็น
โดย ethidium bromide การย้อมสี WNV อาร์เอ็นเอสายพันธุ์ NY99 ที่ได้รับ
จากการเก็บอ้างอิงไว้ที่กอง vectorborne
โรคติดเชื้อ, ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค
(CDC) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวกในการทดสอบ RT-PCR