ChemicalsChemicals used for the pre

Chemicals
Chemicals used for the preparation of the media were of high-est purity grade and were obtained from HiMedia, Loba Che-mie, Merck and Qualigens.
2.2. Media
Media usedduring the course of the present investigation, were pre-pared in distilledwater and unless otherwisementioned, were steril-ized by autoclaving at 15 psi for 15min. Starch Casein Agar
(Soluble starch 10 gL
1
, Casein 0.3 gL
1
,K2HPO42gL
1
,CaCO3
0.02 gL
1
,FeSO47H2O0.01gL1
,KNO3 2gL
1
,MgSO4Æ7H2O
0.05 gL
1
,NaCl 2gL
1
,Agar18gL

1) and Nutrient Agar (Pep-tone 5 gL
1
, Beef extract 3 gL
1
, Sodium chloride 5 gL
1
,Agar
15 gL
1
)(Dubey and Maheshwari, 2002) were used for isolation
and preservation of the actinomycete strains, respectively. CMC
Agar (carboxymethylcellulose 0.5 gL
1
,NaNO3 0.1 gL
1
,
K2HPO40.1 gL
1
,MgSO40.05 gL
1
, yeast extract 0.05 gL
1
,Agar
15 gL
1
)(Kasana et al., 2008) was used for cellulose degrading effi-ciency test; andCitrate buffer (pH6), 0.55%CMC in citrate buffer
and Dinitrosalicylic acid reagent for cellulase assay.
2.3. Microorganisms
Cellulose degrading actinomycete strain designated as St-1,
isolated from municipal wastes from Patna, India, on Starch
Casein Agar by direct plating of six fold serial dilutions of
the soil samples in sterilized normal saline (0.85%), was se-lected for the present study. The selection was based on the ex-tent of production of clear zones on CMC Agar when treated
with 1% Congo red dye (w/v) followed by 1 N HCl for
15–20 min. The isolate was maintained on slants of Nutrient
Agar at 4C with periodic sub culturing. For the characteriza-tion of the selected isolate, the basic routine laboratory works
like morphological, cultural and different biochemical charac-teristics which included Indole, methyl red, Voges–Proskauer,
citrate utilization, catalase, urease, starch hydrolysis, gelatin
hydrolysis, sugar fermentation, caseinase, hydrogen sulfide
production and nitrate reduction tests were performed (Cap-puccino and Sherman, 2005) and compared with Bergey’s
Manual of Systematic Bacteriology (Williams et al., 1989).
48 h old cultures were used for all the tests.
2.4. Effect of pH, temperature and NaCl concentration on
growth of the isolate
An investigation was carried out to determine the optimum pH
and temperature for the isolate for its maximum growth. Five
plates of CMC Agar medium each with pH adjusted to 3, 5, 7,
9 and 11, respectively, using 1 NHCl and 1 NNaOH were inoc-ulated with the isolate and incubated at 26C for 4 days. Like-wise, eight sets of CMC Agar medium each with pHadjusted to
7 were inoculated and incubated at different temperatures that
included 4, 15, 26, 37, 45, 50, 55 and 60C for 4 days. The effect
of NaCl concentrations ranging between 1 and 10% (w/v) on
growth of the isolate was investigated by plating the isolate on
Nutrient Agar with specified NaCl concentrations and incubat-ing the plates at 26C for 4 days. The tests were performed in
triplicates and the observations were recorded.
2.5. Enzyme assay
CMC-ase activity and FP-ase activity were assayed using the
method described byWood and Bhat (1998)with slight modifi-cations. For CMC-ase activity, 0.5 mL of enzyme solution was
added to 0.5 mL of 0.55%(w/v) of carboxymethylcellulose pre-pared in sodiumcitrate buffer (pH6) and incubated at 50C for
60 min. For FP-ase activity, 0.5 mL of enzyme solution was
added to 0.5 mL of sodium citrate buffer (pH 6) along with
50 mg Whatman No. 1 filter paper strip (1·6 cm) and incu-bated at 50C for 60 min. In both the above mentioned proce-dures, the reactions were stopped by adding 1.0 mL of 3, 5-dinitro salicylic acid reagent to the mixtures followed by boiling
for 10 min and adding 8.0 mL of distilled water. The Optical
Density of the mixtures was recorded at 540 nm using a UV/
Vis spectrophotometer (Thermo Scientific) and compared with
the standard glucose curve to determine the amount of reducing
sugar (mg mL
1
) produced during cellulose hydrolysis.
2.6. Optimization of temperature for the cellulolytic activity of
the isolate
Three 150 mL conical flasks each containing 50 mL of CMC
broth were inoculated with the isolate and incubated at 26,
37 and 45C for 8 days. After incubation, 10 mL of each cul-ture broth was withdrawn at 2 days interval, centrifuged at
5000 rpm for 20 min at 4C and supernatant, serving as the
source of crude enzyme, was utilized for the determination of
enzyme activities (Immanual et al., 2006).
2.7. Optimization of pH for the cellulolytic activity of the isolate
Four 150 mL conical flasks each containing 50 mL of CMC
broth with the pH adjusted to 5, 7, 9 and 11 respectively using
1 N HCl and 1 N NaOH were inoculated with the isolate and
246 P. Prasad et al.
incubated for 8 days at the optimum temperature determined
at the previous step. After incubation the methods are similar
as described above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เคมี
เคมีภัณฑ์ที่ใช้สำหรับการจัดทำสื่อได้เกรดสูง-est บริสุทธิ์ และได้รับจาก HiMedia, Loba Che-มิเอะ เมอร์ค และ Qualigens.
2.2 สื่อ
usedduring สื่อของการสอบสวนปัจจุบัน ได้ถึงก่อนใน distilledwater และนอกจาก otherwisementioned ถูก ized steril โดย autoclaving ที่ 15 psi สำหรับ 15 นาทีแป้งเคซีน Agar
(gL ละลายแป้ง 10
1
, เคซีน 03 gL
1
, K2HPO42gL
1
, CaCO3
0.02 gL
1
, FeSO47H2O0.01gL 1
, KNO3 2gL
1
, MgSO4Æ7H2O
0.05 gL
1
, NaCl 2gL
1
, Agar18gL

1) Agar อาหารและ (Pep โทน 5 gL
1
, เนื้อแยก 3 gL
1
, โซเดียมคลอไรด์ 5 gL
1
, Agar
15 gL
1
) (Dubey และ Maheshwari, 2002) ใช้สำหรับแยก
และอนุรักษ์สายพันธุ์ actinomycete ตามลำดับ CMC
Agar (gL carboxymethylcellulose 0.5
1
, NaNO3 0.1 gL
1
,
K2HPO40.1 gL
1
, MgSO40.05 gL
1
, ยีสต์สกัด 0.05 gL
1
, Agar
15 gL
1
) ใช้สำหรับลด effi ciency ทดสอบ เซลลูโลส (Kasana et al., 2008) andCitrate บัฟเฟอร์ (pH6), 0.55%CMC ในซิเตรตบัฟเฟอร์
และรีเอเจนต์กรด Dinitrosalicylic สำหรับทดสอบ cellulase.
2.3 จุลินทรีย์
เซลลูโลสลดต้องใช้ actinomycete กำหนดเป็นเซนต์-1,
แยกต่างหากจากขยะเทศบาลจากแพทน่า ประเทศอินเดีย บนแป้ง
เคซีน Agar โดยชุบโดยตรงของหกพับ dilutions ประจำของ
ตัวอย่างดินใน sterilized ปกติน้ำเกลือ (0.85%), มี se-lected การศึกษาปัจจุบัน การเลือกขึ้นอยู่กับในอดีตเต็นท์ผลิตโซนชัดเจนใน Agar CMC เมื่อถือว่า
1% สีคองโกเรด (w/v) ตาม ด้วย 1 N HCl สำหรับ
15–20 min แยกมีอยู่ใน slants ของสาร
Agar ที่ 4 C กับ culturing ย่อยเป็นครั้งคราว สำหรับการ characteriza-สเตรชันของแยกเลือก ห้องปฏิบัติการตามปกติพื้นฐานทำงาน
ชอบสัณฐาน วัฒนธรรม และต่างชีวเคมี charac-teristics ซึ่งรวมอินโดล methyl แดง Voges–Proskauer,
ใช้ซิเตรต catalase ยู แป้งไฮโต รไลซ์ ตุ๋น
ไฮโตรไลซ์ น้ำตาลหมัก caseinase ไฮโดรเจนซัลไฟด์
ทดสอบลดผลิตและไนเตรตถูกดำเนินการ (Cap puccino และเชอร์แมน 2005) และเปรียบเทียบกับของ Bergey
คู่มือของระบบ Bacteriology (วิลเลียมส์ et al., 1989) .
48 h วัฒนธรรมเก่าใช้สำหรับทั้งหมดทดสอบ
2.4 ผลของ pH อุณหภูมิ และความเข้มข้นของ NaCl ใน
เจริญเติบโตของการแยก
การสอบสวนที่ดำเนินการเพื่อตรวจสอบ pH เหมาะสม
และอุณหภูมิสำหรับแยกสำหรับการเจริญเติบโตสูงสุด 5
แผ่นของกลาง CMC Agar ที่มีค่า pH ปรับปรุง 3, 5, 7,
9 11 ตามลำดับ 1 NHCl และ 1 NNaOH inoc-ulated มีแยกได้ และ incubated 4 วันที่ 26 C Like-wise, 8 ชุดของ CMC Agar ตัวกลางแต่ละกับ pHadjusted การ
7 inoculated และ incubated ที่อุณหภูมิแตกต่างกันที่
รวม 4, 15, 26, 37, 45, 50 55 และ 60 C วันที่ 4 ผล
ของตั้งแต่ระหว่าง 1 และ 10% (w/v) ในความเข้มข้นของ NaCl
เติบโตแยกถูกสอบสวน โดยชุบแยกบน
Agar อาหารกับระบุความเข้มข้นของ NaCl และ incubat ing แผ่นที่ 26 C 4 วัน ดำเนินการทดสอบใน
triplicates และที่สังเกตได้บันทึก
2.5 ทดสอบเอนไซม์
CMC ase กิจกรรมและกิจกรรม FP-ase ได้ assayed ใช้การ
วิธีอธิบาย byWood และบัท (1998) ด้วยเล็กน้อย modifi เป็นของหายาก สำหรับกิจกรรม CMC ase, 0.5 mL ของเอนไซม์ถูก
เพิ่ม 0.5 mL ของ 0.55%(w/v) ก่อนถึงในบัฟเฟอร์ sodiumcitrate (pH6) carboxymethylcellulose และ incubated ที่ C 50 สำหรับ
60 นาที สำหรับกิจกรรม FP-ase, 0.5 mL ของเอนไซม์ถูก
เพิ่มเป็น 05 mL ของโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 6) พร้อม
แถบกระดาษกรอง Whatman No. 1 50 มิลลิกรัม (1·6 เซนติเมตร) และ incu bated ที่ 50 C สำหรับ 60 นาที ในทั้ง proce dures กล่าวข้างต้น ปฏิกิริยาที่ถูกหยุด โดยการเพิ่ม 1.0 mL ของรีเอเจนต์กรดซาลิไซลิ 5 dinitro 3 น้ำยาผสมตาม ด้วยต้ม
10 นาทีและเพิ่ม 8.0 mL ของน้ำกลั่น แบบออปติคอล
ความหนาแน่นของส่วนผสมเป็นบันทึกที่ 540 nm ใช้ UV เป็น /
เครื่องทดสอบกรดด่าง Vis (เทอร์โมวิทยาศาสตร์) และเมื่อเทียบกับ
โค้งกลูโคสมาตรฐานค่าลด
น้ำตาล (mg mL
1
) ผลิตระหว่างไฮโตรไลซ์เซลลูโลส
2.6 ปรับอุณหภูมิสำหรับกิจกรรมของ cellulolytic
แยก
สาม 150 mL ทรงกรวยน้ำ 50 มลละมีของ CMC
ซุป inoculated กับการแยก และ incubated ที่ 26,
37 และ 45 C 8 วัน หลังจากบ่ม 10 mL ของแต่ละซุป cul-ture ถูกถอนในช่วงเวลา 2 วัน centrifuged ที่
5000 rpm สำหรับ 20 นาทีที่ 4 C และ supernatant บริการเป็นการ
แหล่งของดิบเอนไซม์ ถูกใช้ในการกำหนดการ
กิจกรรมของเอนไซม์ (Immanual et al., 2006) .
2.7 เพิ่มประสิทธิภาพของกิจกรรมของการแยก cellulolytic
สี่ 150 mL ทรงกรวยน้ำ 50 มลละมีของ CMC
ซุปกับ pH ปรับปรุง 5, 7, 9 และ 11 ตามลำดับโดยใช้
1 N HCl และ 1 N NaOH ได้ inoculated กับการแยก และ
246 P. โกอี et al.
incubated 8 วันที่อุณหภูมิสูงสุดที่กำหนด
ในขั้นตอนก่อนหน้านี้ หลังจากบ่ม วิธีการจะคล้ายกัน
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารเคมี
สารเคมีที่ใช้สำหรับการเตรียมสื่อการสอนและความบริสุทธิ์สูง EST เกรดที่ได้จาก himedia โลบะ , เจ๊มายด์ เมอร์ค และ qualigens .
2.2 . สื่อ
สื่อ usedduring แผนปัจจุบันเป็น pre pared ในน้ำกลั่นและถ้า otherwisementioned , ปลอดเชื้อ ized โดยอัตราส่วนโฟกัส 15 psi สำหรับ 15 นาทีที่ . แป้งโปรตีนวุ้น
( ละลายแป้ง 10 GL
 1
, , 03  GL
1
, k2hpo42gl
 1
, CaCO3
0.02  GL
1
, feso47h2o0.01gl  1
, kno3  2gl
1
,
+ 7h2o MgSO4 ใกู้  GL
1
, เกลือ 2gl
 1
, agar18gl

1 ) และ NUMB3RS ( เปปโทน 5  GL
1
, สารสกัดจากเนื้อ 3  GL
1
, โซเดียมคลอไรด์ 5 GL 
1
, วุ้น

 15 GL 1
) ( ดอบี้ และแม่มเ วรี , 2002 ) ใช้สำหรับแยก
และรักษาของแอคติโนมัยซีทสายพันธุ์ ตามลำดับ CMC
( กรณีศึกษา : 0.5 GL
 1
, NaNO3 0.1 GL
 1

,k2hpo40.1 GL
 1
1

 mgso40.05 GL , สารสกัดจากยีสต์ พบ  GL
1
, วุ้น

 15 GL 1
) ( คาซานะ et al . , 2008 ) ใช้ย่อยสลายเซลลูโลส effi ประสิทธิภาพการทดสอบ ; andcitrate บัฟเฟอร์ ( ph6 ) , CMC 0.55 %
บัฟเฟอร์ซิเตรตและรีเอเจนต์กรด dinitrosalicylic สำหรับเอนไซม์ ( . . .
2.3 จุลินทรีย์ย่อยสลายเซลลูโลสแอคติโนมัยซีทสายพันธุ์เขต

ST-1 ที่แยกจากขยะเทศบาล , ปัฏนา , อินเดีย , แป้ง
เคซีน วุ้น โดยชุบโดยตรงของหกพับต่อเนื่องวิธีการ
ตัวอย่างดินในน้ำเกลือฆ่าเชื้อ ( 0.85 % ) คือ เซ lected การศึกษาปัจจุบัน การเลือกใช้เต็นท์เก่าของการผลิตของโซนล้าง CMC วุ้นเมื่อปฏิบัติ
1 % คองโกสีแดงย้อม ( w / v ) ตามด้วย 1 N HCl สำหรับ
15 – 20 นาที ที่แยกไว้ใน slants ของ NUMB3RS
ที่ 4  C กับการเลี้ยงแบบซับสำหรับ characteriza tion ของเลือกแยกทางห้องปฏิบัติการ รูทีนพื้นฐานงาน
ชอบลักษณะทางวัฒนธรรมและทางชีวเคมีที่แตกต่างกันซึ่งรวมถึง charac teristics อินโดล เมธิลสีแดง Voges – proskauer
ซิเตรต , การใช้ , Catalase , ที่มีการย่อยแป้ง , เจลาติน , การย่อยน้ำตาลหมัก
, ,
caseinase ไฮโดรเจน ซัลไฟด์การผลิตและการทดสอบการลดไนเตรทได้ ( หมวกและ puccino เชอร์แมน , 2005 ) และเปรียบเทียบกับวิธีของ
คู่มือของแบคทีเรียอย่างเป็นระบบ ( วิลเลียม et al . , 1989 ) .
วัฒนธรรมเก่า 48 ชั่วโมงเพื่อใช้ทดสอบทั้งหมด .
2.4 . ผลของพีเอช อุณหภูมิ และความเข้มข้นของเกลือต่อการเจริญเติบโตของเชื้อ

การสอบสวนได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบ
pH ที่เหมาะสมและอุณหภูมิสำหรับแยกสำหรับการเจริญเติบโตสูงสุดของ 5
จานอาหารวุ้นแต่ละบริษัทปรับ pH 3 , 5 , 7
9 และ 11 ตามลำดับ โดยใช้ 1 nhcl 1 nnaoh เป็น inoc ulated กับแยกและบ่มที่อุณหภูมิ 26  C เป็นเวลา 4 วัน อย่างชาญฉลาด , แปดชุดของ CMC อาหารวุ้นแต่ละ phadjusted

7 เป็นเชื้อบ่มที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันและที่
รวม 4 , 15 , 26 , 37 , 45 , 50 ,55 และ 60  C เป็นเวลา 4 วัน ผลของเกลือโซเดียมคลอไรด์ความเข้มข้น
ช่วงระหว่าง 1 และ 10 % ( w / v )
การเจริญเติบโตของเชื้อที่แยกได้ถูกสืบสวนโดยชุบบน
อาหารเลี้ยงเชื้อสารอาหารที่มีความเข้มข้นเกลือน คิวเบทไอเอ็นจีและจานที่ 26  C เป็นเวลา 4 วัน ระบุ ทำการทดสอบใน 3 ซ้ำ และสังเกตบันทึก
.
2.5 โดย
เอนไซม์CMC ASE กิจกรรมและ FP กิจกรรม ASE มี assayed โดยใช้วิธีการอธิบายและ
bywood ภัต ( 1998 ) กับไอออนโมดิฟายเล็กน้อย . สำหรับ บริษัท เกี่ยวกับกิจกรรม ของเอนไซม์ในสารละลาย 0.5 มล.
เพิ่ม 0.5 ml 0.55 % ( w / v ) ของผู้ป่วยในก่อน pared ในโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ ( ph6 ) และบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที 
FP เกี่ยวกับกิจกรรมของเอนไซม์ในสารละลาย 0.5 มล. เพิ่ม
05 กรัมของโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 6 ) พร้อมกับ
50 มก. whatman 1 กรองกระดาษแถบ ( 1 ด้วย 6 ซม. ) และ incu ลด 50  C เป็นเวลา 60 นาที ทั้งสองดังกล่าวข้างต้น dures proce ปฏิกิริยาได้ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 1.0 มล. 3 , 370 5-dinitro salicylic กรดที่ผสมตาม โดยการต้ม
10 นาที และเพิ่มปริมาณน้ำน้ำกลั่น แสง
ความหนาแน่นของส่วนผสมที่ถูกบันทึกไว้ 540 nm ใช้ UV / VIS Spectrophotometer ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์

) และเมื่อเทียบกับกราฟมาตรฐานกลูโคสตรวจสอบยอดเงินของการลดน้ำตาล ( มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 

1
) ผลิตในระหว่างการย่อยสลายเซลลูโลส .
2.6 การเพิ่มประสิทธิภาพของอุณหภูมิสำหรับกิจกรรมทดลองของ

สาม 150 ml ขวดกรวยแยกแต่ละที่มี 50 ml ของ CMC
ซุปถูก inoculated กับแยกและบ่มที่อุณหภูมิ 26
37 และ 45  C เป็นเวลา 8 วัน หลังจากบ่ม , 10 ml ของแต่ละ CUL ture ซุปถูกถอนใน 2 วัน ช่วงที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีระดับ
20 นาทีที่ 4  C และนำให้
แหล่งของเอนไซม์ที่ถูกใช้สำหรับการหา
กิจกรรมเอนไซม์ ( immanual et al . , 2006 ) .
2.7 .การเพิ่มประสิทธิภาพของ pH สำหรับกิจกรรมทดลองจาก
4 150 มิลลิลิตรขวดรูปกรวยแต่ละที่มีปริมาตร 50 มิลลิลิตร CMC
ซุปกับปรับ pH 5 , 7 , 9 และ 11 ตามลำดับโดยใช้
1 N 1 N NaOH HCl และปลูกเชื้อด้วยแยกและ
246 หน้า Prasad et al .
บ่มเป็นเวลา 8 วัน ที่อุณหภูมิสูงสุดมุ่งมั่น
ที่ขั้นตอนก่อนหน้า หลังจากบ่มวิธีการคล้ายกัน
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น