Determination of molecular mass and

Determination of molecular mass and amino acid sequence The apparent molecular mass of the native purified protease (SU1) was measured using the calibration of Superdex 75 10/30 column as described by Zhang et al. (41). The apparent molecular mass of the denatured protease was determined by sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) as described by Laemmli and Favre (42) using a 5% (w/v) stacking gel and a 15% (w/v) separating gel. The molecular mass of cordysobin was estimated using a low molecular mass calibration kit as markers consisting of phosphatase b (94 kDa), bovine serum albumin (67 kDa), egg white ovalbumin (43 kDa), bovine carbonic anhydrase (30 kDa), soybean trypsin inhibitor (20 kDa), and bovine α-Lactalbumin (14.4 kDa).
Cordysobin was subjected to SDS-PAGE under reducing conditions and electrophoretically transferred to a polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane (Millipore) by the method of Matsudaira (43). After the membrane was briefly stained by Coomassie Brilliant Blue R-250, the protein band was cut out and applied to an ABI Procise 492 protein sequencer (Applied Biosystems) (44).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การกำหนดลำดับมวลและกรดอะมิโนโมเลกุลมวลโมเลกุลชัดเจนของโปรติเอสบริสุทธิ์ดั้งเดิม (SU1) ซึ่งวัดได้โดยใช้การสอบเทียบของคอลัมน์ Superdex 75 10/30 ตามที่อธิบายไว้โดย Zhang et al. (41) มวลโมเลกุลชัดเจนโปรติเอสลแปลงถูกระบุ โดยโซเดียม dodecyl sulfatepolyacrylamide เจอิ (SDS-หน้า) ตามที่อธิบายไว้ โดย Laemmli และ Favre (42) ใช้เจลซ้อน 5% (w/v) และ 15% (w/v) แยกเจ มวลโมเลกุลของ cordysobin ได้ประมาณใช้ชุดมวลโมเลกุลต่ำเป็นเครื่องหมายที่ประกอบด้วยฟอสฟา b (94 kDa), วัว serum albumin (67 kDa), ไข่ขาว ovalbumin (43 kDa), วัวสึกคาร์บอ anhydrase (30 kDa), ถั่วเหลืองยับยั้ง trypsin (20 kDa), และวัวα-Lactalbumin (14.4 kDa)Cordysobin ต้องทำ SDS-หน้าภายใต้เงื่อนไขลด และโอน electrophoretically ไป polyvinylidene ฟลูออไรด์ (PVDF) เมมเบรน (มิลลิพอร์) โดยวิธีการของมัท (43) หลังจากเมมเบรนถูกย้อมสั้น ๆ โดย R-250 Coomassie สดใสสีฟ้า แถบโปรตีนถูกตัดออก และใช้กับซีเควนเซอร์โปรตีนที่ ABI Procise 492 (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ) (44)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความมุ่งมั่นของมวลโมเลกุลและลำดับกรดอะมิโนที่ชัดเจนมวลโมเลกุลของน้ำย่อยบริสุทธิ์พื้นเมือง (SU1) คือการวัดโดยใช้การสอบเทียบ Superdex 75 10/30 คอลัมน์ตามที่อธิบาย Zhang et al, (41) มวลโมเลกุลของน้ำย่อยเอทิลแอลกอฮอล์ถูกกำหนดโดยโซเดียมโดเดซิ sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ตามที่อธิบาย Laemmli และ Favre (42) โดยใช้ 5% (w / v) ซ้อนเจลและ 15% (w / v) แยกเจล มวลโมเลกุลของ cordysobin เป็นที่คาดกันโดยใช้ชุดการสอบเทียบโมเลกุลต่ำมวลเป็นเครื่องหมายประกอบด้วย phosphatase B (94 กิโลดาลตัน), อัลบูมิวัวซีรั่ม (67 กิโลดาลตัน) ไข่ ovalbumin สีขาว (43 กิโลดาลตัน), วัว anhydrase คาร์บอ (30 กิโลดาลตัน) ถั่วเหลือง trypsin ยับยั้ง (20 กิโลดาลตัน) และวัวα-lactalbumin (14.4 กิโลดาลตัน)
Cordysobin ถูกยัดเยียดให้ระบบ SDS-PAGE ภายใต้เงื่อนไขการลดและ electrophoretically โอนไปยัง Polyvinylidene ลูออไรด์ (PVDF) เมมเบรน (อร์ค) โดยวิธีการของมัตสุ (ที่ 43) หลังจากที่เมมเบรนที่ถูกย้อมสีโดยสังเขป Coomassie สีฟ้าสดใส R-250, วงโปรตีนที่ถูกตัดออกและนำไปใช้กับ ABI Procise 492 ซีเควนโปรตีน (Applied Biosystems) (44)