- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2. Materials and methods2.1. Eggs a
2. Materials and methods
2.1. Eggs and spawner fish’ sampling
On the mid December 2011, we have received an official report
indicating the emergence of mass mortalities among spawner
angelfish and their eggs with consequent low hatchability at
a private ornamental fish farm located at south of Giza province,
Egypt. To investigate the problem, 400 eggs and 10 spawner
angelfish were obtained from aforementioned ornamental
fish farm. During sampling time, average water temperature
was 16 ±0.5 C.
Eggs were washed several times with sterile distilled water,
and then placed in sterile 7.5 · 18.5 cm Whirl-Pak bags (Nasco,
Fort Atkinson, WI, USA) (10 eggs per bag). Washed eggs
were flooded with double distilled water containing chloramphenicol/
gentamycin at a concentration of 100 mg mL1 for
12 h at 18 C to prevent bacterial contamination. Fish with
cotton wool like fungal mats were washed up with double distilled
water to get rid of superficial bacterial contaminants and
kept on crushed ice during entire process of examination.
2.2. Isolation and purification of Saprolegnia species
Washed eggs (10 eggs/sample) were placed in 7.5 · 18.5 cm
Whirl-Pak bags (Nasco, Fort Atkinson, WI, USA) then diluted
with Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS, Sigma
Chemical Co., St. Louis, MO, USA) in a ratio of 1 whole
egg mixture:2 HBSS (v/v). Eggs–HBSS mixture was stomached
for 2 min at high-speed stomacher till mixture got completely
homogenized. Aliquots from the homogenate were inoculated
into sterile plates of Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol
and sterile hemp seeds (Cannabis sativa) to investigate
sexual structure of isolates (SDA, Difco Lab., USA).
Fish with cotton wool like fungal mats were washed up with
double distilled water to get rid of superficial bacterial contaminants
then loopfuls from the deep cotton wool like mats as
well as deep skin lesions were spread onto sterile plates of Sabouraud
dextrose agar with chloramphenicol and sterile hemp
seeds (SDA, Difco Lab., USA).
Culture plates were incubated at 20C for 3–5 days with
regular daily inspection for any expected fungal growths. Harvested
fungal colonies were purified then slide culture technique
was adopted on retrieved colonies for initial
morphological identification. Fungal spores were fixed with
one drop of methyl alcohol and stained with lactophenol cotton
blue as described by Willoughby [16]. S. parasitica
ATCC90213 was used as a reference strain for cultural morphology
confirmation as well as positive control during molecular
study.
2.3. Morphological studies
Infested hemp seeds for each isolate were placed into six-well
culture plate confining sterile freshwater and incubated at
20C for 21 days. Identification of sexual structure and pattern
of germination were made under inverted microscope. Finally,
the isolated strains were identified according to the criteria of
Coker [34], Seymour [35], Willoughby [36] and Pickering et al.
[37].
2.4. DNA extraction
The protocol of DNA extraction was adopted from Moller
et al. [38]. Briefly, 10 mg (net weight) of freshly harvested fungal
mats were transferred to a 1.5 mL centrifuge tube containing
20 lL Tris–EDTA (TE) buffer (10 mM Tris–HCl, pH 8.0;
10 mM EDTA, pH 8.0) and frozen at 70 C for 30 min, then
grinded into a slurry using Kontes micro-homogenizer with
sterilized tips (Fisher Scientific, Hanover Park, IL, USA), then
incubated for 60 min. This process was repeated once. The
2.1. Eggs and spawner fish’ sampling
On the mid December 2011, we have received an official report
indicating the emergence of mass mortalities among spawner
angelfish and their eggs with consequent low hatchability at
a private ornamental fish farm located at south of Giza province,
Egypt. To investigate the problem, 400 eggs and 10 spawner
angelfish were obtained from aforementioned ornamental
fish farm. During sampling time, average water temperature
was 16 ±0.5 C.
Eggs were washed several times with sterile distilled water,
and then placed in sterile 7.5 · 18.5 cm Whirl-Pak bags (Nasco,
Fort Atkinson, WI, USA) (10 eggs per bag). Washed eggs
were flooded with double distilled water containing chloramphenicol/
gentamycin at a concentration of 100 mg mL1 for
12 h at 18 C to prevent bacterial contamination. Fish with
cotton wool like fungal mats were washed up with double distilled
water to get rid of superficial bacterial contaminants and
kept on crushed ice during entire process of examination.
2.2. Isolation and purification of Saprolegnia species
Washed eggs (10 eggs/sample) were placed in 7.5 · 18.5 cm
Whirl-Pak bags (Nasco, Fort Atkinson, WI, USA) then diluted
with Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS, Sigma
Chemical Co., St. Louis, MO, USA) in a ratio of 1 whole
egg mixture:2 HBSS (v/v). Eggs–HBSS mixture was stomached
for 2 min at high-speed stomacher till mixture got completely
homogenized. Aliquots from the homogenate were inoculated
into sterile plates of Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol
and sterile hemp seeds (Cannabis sativa) to investigate
sexual structure of isolates (SDA, Difco Lab., USA).
Fish with cotton wool like fungal mats were washed up with
double distilled water to get rid of superficial bacterial contaminants
then loopfuls from the deep cotton wool like mats as
well as deep skin lesions were spread onto sterile plates of Sabouraud
dextrose agar with chloramphenicol and sterile hemp
seeds (SDA, Difco Lab., USA).
Culture plates were incubated at 20C for 3–5 days with
regular daily inspection for any expected fungal growths. Harvested
fungal colonies were purified then slide culture technique
was adopted on retrieved colonies for initial
morphological identification. Fungal spores were fixed with
one drop of methyl alcohol and stained with lactophenol cotton
blue as described by Willoughby [16]. S. parasitica
ATCC90213 was used as a reference strain for cultural morphology
confirmation as well as positive control during molecular
study.
2.3. Morphological studies
Infested hemp seeds for each isolate were placed into six-well
culture plate confining sterile freshwater and incubated at
20C for 21 days. Identification of sexual structure and pattern
of germination were made under inverted microscope. Finally,
the isolated strains were identified according to the criteria of
Coker [34], Seymour [35], Willoughby [36] and Pickering et al.
[37].
2.4. DNA extraction
The protocol of DNA extraction was adopted from Moller
et al. [38]. Briefly, 10 mg (net weight) of freshly harvested fungal
mats were transferred to a 1.5 mL centrifuge tube containing
20 lL Tris–EDTA (TE) buffer (10 mM Tris–HCl, pH 8.0;
10 mM EDTA, pH 8.0) and frozen at 70 C for 30 min, then
grinded into a slurry using Kontes micro-homogenizer with
sterilized tips (Fisher Scientific, Hanover Park, IL, USA), then
incubated for 60 min. This process was repeated once. The
0/5000
2. วัสดุและวิธีการ2.1. ไข่ปลา spawner' สุ่มตัวอย่างธันวาคม 2554 กลาง เราได้รับรายงานอย่างเป็นทางการแสดงการเกิดขึ้นของ mortalities โดยรวมระหว่าง spawnerปลาสินสมุทรและไข่ของพวกเขา ด้วย hatchability ทอดต่ำที่ส่วนตัวประดับปลาฟาร์มตั้งอยู่ที่ทางใต้ของจังหวัดกิซ่าอียิปต์ การตรวจสอบปัญหา ไข่ 400 และ 10 spawnerปลาสินสมุทรได้รับจากไม้ประดับดังกล่าวฟาร์มปลา ในอุณหภูมิน้ำเฉลี่ย เวลาในการสุ่มตัวอย่างถูก 16 ± 0.5 C.ไข่ถูกล้างหลาย ๆ ครั้ง ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อและอยู่ในลอกใส่ 7.5 กระเป๋า 18.5 ซม.ปากวน (Nascoอันดับป้อม WI สหรัฐอเมริกา) (10 ฟองต่อถุง) ไข่หินถูกน้ำท่วมกับน้ำกลั่นคู่ประกอบด้วย chloramphenicol /gentamycin ที่ความเข้มข้นของ 100 mg mL 1 สำหรับh 12 ที่ 18 C เพื่อป้องกันการปนเปื้อนของแบคทีเรีย ปลาที่มีผ้าขนสัตว์ฝ้ายเช่นเสื่อเชื้อราถูกล้างค่า ด้วยคู่กลั่นน้ำจะกำจัดแบคทีเรียสารปนเปื้อนผิวเผิน และเก็บไว้ในน้ำแข็งบดในระหว่างกระบวนการตรวจสอบทั้งหมด2.2 การแยกและทำให้บริสุทธิ์ของสายพันธุ์ Saprolegniaไข่หิน (10 ไข่/ตัวอย่าง) ถูกวางใน 7.5 · 18.5 ซม.วนปากถุง (Nasco ป้อมอันดับ WI สหรัฐอเมริกา) แล้ว ทำให้เจือจางด้วยของแฮงก์สมดุลเกลือโซลูชั่น (HBSS ซิกบริษัทเคมี St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) ในอัตราส่วน 1 ทั้งหมดไข่ผสม: 2 HBSS (v/v) ส่วนผสมไข่-HBSS ถูก stomachedสำหรับ 2 นาทีที่แผงประดับหน้าอกความเร็วสูงจนส่วนผสมได้อย่างสมบูรณ์homogenized เป็นกลุ่ม Aliquots จาก homogenate ถูก inoculatedใน Sabouraud agar ขึ้นกับ chloramphenicol ใส่จานเมล็ดป่านกอซ (กัญชง) การตรวจสอบและโครงสร้างทางเพศของแยก (SDA, Difco ห้องปฏิบัติ สหรัฐอเมริกา)ปลา มีขนสัตว์ฝ้ายเช่นเสื่อเชื้อราถูกล้างค่าด้วยน้ำกลั่นสองครั้งเพื่อกำจัดสารปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียผิวเผินแล้ว loopfuls จากขนสัตว์ฝ้ายลึกชอบเสื่อเป็นรวมทั้งผิวลึก ได้ถูกแพร่กระจายไปใส่จาน Sabouraudagar ขึ้น chloramphenicol และป่านกอซเมล็ด (SDA, Difco ห้องปฏิบัติ สหรัฐอเมริกา)วัฒนธรรมแผ่นถูก incubated ที่ 20 C วัน 3-5 ด้วยการตรวจสอบประจำวันที่ปกติใด ๆ คาดว่าเชื้อราเจริญเติบโต เก็บเกี่ยวผลผลิตเชื้อราอาณานิคมที่บริสุทธิ์แล้วภาพนิ่งเทคนิคการเพาะถูกนำมาใช้ในอาณานิคมดึงข้อมูลสำหรับเริ่มต้นรหัสของ เชื้อราเพาะเฟิร์นได้ถาวรด้วยปล่อยของแอลกอฮอล์ methyl และสีกับฝ้าย lactophenolสีฟ้าตามที่อธิบายไว้ โดยวิ [16] S. parasiticaATCC90213 ใช้เป็นต้องใช้อ้างอิงสำหรับสัณฐานวิทยาวัฒนธรรมยืนยันรวมทั้งควบคุมค่าบวกระหว่างโมเลกุลศึกษา2.3 การของศึกษาเมล็ดป่านรบกวนสำหรับแต่ละแยกมีอยู่ในทั้งหกวัฒนธรรมจาน confining ใส่ปลา และ incubated ที่20 C 21 วัน รหัสของโครงสร้างทางเพศและรูปแบบของการงอกได้ทำภายใต้กล้องจุลทรรศน์หัวกลับ สุดท้ายระบุสายพันธุ์แยกตามเกณฑ์โคเกอร์ [34], [35], ซีมัวร์วิ [36] และ Pickering et al[37]2.4. DNA สกัดโพรโทคอลการสกัดดีเอ็นเอถูกนำมาใช้จากมอลเลอร์ร้อยเอ็ด al. [38] สั้น ๆ 10 มิลลิกรัม (น้ำหนักสุทธิ) ของสดเก็บเกี่ยวเชื้อราเสื่อถูกโอนย้ายไปเป็น 1.5 mL เครื่องหมุนเหวี่ยงท่อที่ประกอบด้วย20 จะตรี – EDTA (TE) บัฟเฟอร์ (10 mM ตรี – HCl ค่า pH 8.010 mM EDTA ค่า pH 8.0) และแช่แข็งที่ C 70 ใน 30 นาที แล้วgrinded เป็นสารละลายที่ใช้ homogenizer ไมโคร Kontes ด้วยsterilized เคล็ดลับ (Fisher วิทยาศาสตร์ ปาร์คฮาโนเวอร์ IL สหรัฐอเมริกา), จากนั้นincubated ใน 60 นาที กระบวนการนี้ถูกซ้ำอีกครั้ง ที่
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. Materials and methods
2.1. Eggs and spawner fish’ sampling
On the mid December 2011, we have received an official report
indicating the emergence of mass mortalities among spawner
angelfish and their eggs with consequent low hatchability at
a private ornamental fish farm located at south of Giza province,
Egypt. To investigate the problem, 400 eggs and 10 spawner
angelfish were obtained from aforementioned ornamental
fish farm. During sampling time, average water temperature
was 16 ±0.5 C.
Eggs were washed several times with sterile distilled water,
and then placed in sterile 7.5 · 18.5 cm Whirl-Pak bags (Nasco,
Fort Atkinson, WI, USA) (10 eggs per bag). Washed eggs
were flooded with double distilled water containing chloramphenicol/
gentamycin at a concentration of 100 mg mL1 for
12 h at 18 C to prevent bacterial contamination. Fish with
cotton wool like fungal mats were washed up with double distilled
water to get rid of superficial bacterial contaminants and
kept on crushed ice during entire process of examination.
2.2. Isolation and purification of Saprolegnia species
Washed eggs (10 eggs/sample) were placed in 7.5 · 18.5 cm
Whirl-Pak bags (Nasco, Fort Atkinson, WI, USA) then diluted
with Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS, Sigma
Chemical Co., St. Louis, MO, USA) in a ratio of 1 whole
egg mixture:2 HBSS (v/v). Eggs–HBSS mixture was stomached
for 2 min at high-speed stomacher till mixture got completely
homogenized. Aliquots from the homogenate were inoculated
into sterile plates of Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol
and sterile hemp seeds (Cannabis sativa) to investigate
sexual structure of isolates (SDA, Difco Lab., USA).
Fish with cotton wool like fungal mats were washed up with
double distilled water to get rid of superficial bacterial contaminants
then loopfuls from the deep cotton wool like mats as
well as deep skin lesions were spread onto sterile plates of Sabouraud
dextrose agar with chloramphenicol and sterile hemp
seeds (SDA, Difco Lab., USA).
Culture plates were incubated at 20C for 3–5 days with
regular daily inspection for any expected fungal growths. Harvested
fungal colonies were purified then slide culture technique
was adopted on retrieved colonies for initial
morphological identification. Fungal spores were fixed with
one drop of methyl alcohol and stained with lactophenol cotton
blue as described by Willoughby [16]. S. parasitica
ATCC90213 was used as a reference strain for cultural morphology
confirmation as well as positive control during molecular
study.
2.3. Morphological studies
Infested hemp seeds for each isolate were placed into six-well
culture plate confining sterile freshwater and incubated at
20C for 21 days. Identification of sexual structure and pattern
of germination were made under inverted microscope. Finally,
the isolated strains were identified according to the criteria of
Coker [34], Seymour [35], Willoughby [36] and Pickering et al.
[37].
2.4. DNA extraction
The protocol of DNA extraction was adopted from Moller
et al. [38]. Briefly, 10 mg (net weight) of freshly harvested fungal
mats were transferred to a 1.5 mL centrifuge tube containing
20 lL Tris–EDTA (TE) buffer (10 mM Tris–HCl, pH 8.0;
10 mM EDTA, pH 8.0) and frozen at 70 C for 30 min, then
grinded into a slurry using Kontes micro-homogenizer with
sterilized tips (Fisher Scientific, Hanover Park, IL, USA), then
incubated for 60 min. This process was repeated once. The
2.1. Eggs and spawner fish’ sampling
On the mid December 2011, we have received an official report
indicating the emergence of mass mortalities among spawner
angelfish and their eggs with consequent low hatchability at
a private ornamental fish farm located at south of Giza province,
Egypt. To investigate the problem, 400 eggs and 10 spawner
angelfish were obtained from aforementioned ornamental
fish farm. During sampling time, average water temperature
was 16 ±0.5 C.
Eggs were washed several times with sterile distilled water,
and then placed in sterile 7.5 · 18.5 cm Whirl-Pak bags (Nasco,
Fort Atkinson, WI, USA) (10 eggs per bag). Washed eggs
were flooded with double distilled water containing chloramphenicol/
gentamycin at a concentration of 100 mg mL1 for
12 h at 18 C to prevent bacterial contamination. Fish with
cotton wool like fungal mats were washed up with double distilled
water to get rid of superficial bacterial contaminants and
kept on crushed ice during entire process of examination.
2.2. Isolation and purification of Saprolegnia species
Washed eggs (10 eggs/sample) were placed in 7.5 · 18.5 cm
Whirl-Pak bags (Nasco, Fort Atkinson, WI, USA) then diluted
with Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS, Sigma
Chemical Co., St. Louis, MO, USA) in a ratio of 1 whole
egg mixture:2 HBSS (v/v). Eggs–HBSS mixture was stomached
for 2 min at high-speed stomacher till mixture got completely
homogenized. Aliquots from the homogenate were inoculated
into sterile plates of Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol
and sterile hemp seeds (Cannabis sativa) to investigate
sexual structure of isolates (SDA, Difco Lab., USA).
Fish with cotton wool like fungal mats were washed up with
double distilled water to get rid of superficial bacterial contaminants
then loopfuls from the deep cotton wool like mats as
well as deep skin lesions were spread onto sterile plates of Sabouraud
dextrose agar with chloramphenicol and sterile hemp
seeds (SDA, Difco Lab., USA).
Culture plates were incubated at 20C for 3–5 days with
regular daily inspection for any expected fungal growths. Harvested
fungal colonies were purified then slide culture technique
was adopted on retrieved colonies for initial
morphological identification. Fungal spores were fixed with
one drop of methyl alcohol and stained with lactophenol cotton
blue as described by Willoughby [16]. S. parasitica
ATCC90213 was used as a reference strain for cultural morphology
confirmation as well as positive control during molecular
study.
2.3. Morphological studies
Infested hemp seeds for each isolate were placed into six-well
culture plate confining sterile freshwater and incubated at
20C for 21 days. Identification of sexual structure and pattern
of germination were made under inverted microscope. Finally,
the isolated strains were identified according to the criteria of
Coker [34], Seymour [35], Willoughby [36] and Pickering et al.
[37].
2.4. DNA extraction
The protocol of DNA extraction was adopted from Moller
et al. [38]. Briefly, 10 mg (net weight) of freshly harvested fungal
mats were transferred to a 1.5 mL centrifuge tube containing
20 lL Tris–EDTA (TE) buffer (10 mM Tris–HCl, pH 8.0;
10 mM EDTA, pH 8.0) and frozen at 70 C for 30 min, then
grinded into a slurry using Kontes micro-homogenizer with
sterilized tips (Fisher Scientific, Hanover Park, IL, USA), then
incubated for 60 min. This process was repeated once. The
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ไข่แม่ปลาและปลา ' )
เมื่อกลางเดือนธันวาคม 2554 เราได้รับรายงานอย่างเป็นทางการระบุว่า การเกิดขึ้นของมวล mortalities
ของปลาแม่ปลาและไข่ส่งผลน้อยจากฟาร์มปลาสวยงามที่
ส่วนตัวที่ตั้งอยู่ทางตอนใต้ของสฟิงซ์จังหวัด
อียิปต์ เพื่อศึกษาปัญหา และแม่ปลา
10 400 ฟองปลาที่ได้จากฟาร์มไม้ประดับ
ปลาดังกล่าว ช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่าง
อุณหภูมิน้ำเฉลี่ย 16 ± 0.5 C .
ไข่ล้างหลายครั้งด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ , ฆ่าเชื้อ
แล้ววางใน 7.5 ด้วย 18.5 ซม. วนปากถุง ( NASCO
Fort Atkinson , วี , USA ) ( 10 ฟอง ต่อ 1 ถุง ) ล้างไข่
เต็มไปด้วยคู่น้ำกลั่นที่มี chloramphenicol /
เจนตาไมซินที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม 100 ml
12 H ที่ 18 C เพื่อป้องกันการปนเปื้อนแบคทีเรีย ปลาสำลี เหมือนเชื้อรา คือ เสื่อ
อาบน้ำกับคู่กลั่นน้ำกำจัดสารปนเปื้อนและแบคทีเรียตื้น
เก็บไว้ในน้ำแข็งในระหว่างกระบวนการทั้งหมดของการตรวจสอบ .
2.2 . การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของซาโปรเลกเนียชนิด
ล้างไข่ ( ไข่ / 10 ตัวอย่าง ) อยู่ใน 75 ด้วย 18.5 ซม.
วนปากถุง ( NASCO , Fort Atkinson , WI , USA ) จากนั้นเจือจาง
กับแฮงค์ สมดุลสารละลายเกลือ ( hbss , Sigma
Chemical Co . , St . Louis , MO , USA ) ในอัตราส่วนผสม 1 : 2 hbss ทั้ง
( v / v ) ไข่ และส่วนผสม hbss stomached
2 นาทีจนส่วนผสมมีอย่างสมบูรณ์
แผงประดับหน้าอกความเร็วสูงบด . เฉยๆ จากแยกปลูกเชื้อ
เป็นแผ่นของหมัน sabouraud dextrose agar ที่มี chloramphenicol
และเมล็ดกัญชาที่เป็นหมัน ( ชะอม ) เพื่อศึกษาโครงสร้างของสายพันธุ์
ทางเพศ ( SDA difco , แล็บ , USA ) .
ปลาสำลี เหมือนเสื่อเชื้อราเป็นล้างด้วยน้ำกลั่น
สองครั้งเพื่อกำจัดแบคทีเรียปนเปื้อนผิวเผิน
แล้ว loopfuls จากลึกผ้าฝ้าย ขนสัตว์เช่นเสื่อที่
เป็นแผลผิวหนังลึกถูกกระจายลงบนจานของ sabouraud เป็นหมัน
dextrose agar ที่มี chloramphenicol และเมล็ดกัญชา
เป็นหมัน ( SDA difco , แล็บ , USA ) .
เทพีปักษีอุณหภูมิ 20 C 3 – 5 วัน
ตรวจสอบประจำวันสำหรับใด ๆคาดว่าเชื้อราเจริญ . เก็บเกี่ยว
ราอาณานิคมมีความบริสุทธิ์แล้วเลื่อน
เทคนิคการเพาะเลี้ยงเป็นลูกบุญธรรมในคืนแรก
อาณานิคมการจำแนกลักษณะทางสัณฐานวิทยา . สปอร์ของเชื้อราเป็นถาวร
หนึ่งหยดเมทิลแอลกอฮอล์และเปื้อนด้วยแลคโตฟีนอลฝ้าย
สีฟ้าตามที่อธิบายไว้โดยวิลเลอห์บี [ 16 ] s เชื้อรา
atcc90213 ถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงสำหรับการยืนยันของสายพันธุ์
วัฒนธรรม รวมทั้งควบคุมบวกในการศึกษาโมเลกุล
.
2.3 การศึกษาลักษณะโครงสร้าง
รบกวนกัญชาเมล็ดแต่ละแยกถูกวางไว้เป็นอย่างดี
6จานวัฒนธรรม confining เป็นหมันน้ำจืดและบ่มที่
20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 21 วัน การกำหนดโครงสร้างและรูปแบบของพฤติกรรมทางเพศ
งอกภายใต้กล้องจุลทรรศน์ไทย . ในที่สุด
แยกสายพันธุ์ที่ระบุตามเงื่อนไขของ
Coker [ 34 ] , ซีม [ 3 ] [ 36 ] และตลาดหุ้น Pickering et al .
[ 37 ] .
2.4 . การสกัดดีเอ็นเอ
ขั้นตอนการสกัดดีเอ็นเอจากมอลเลอร์
บุญธรรมet al . [ 38 ] สั้น ๆ , 10 มิลลิกรัม ( น้ำหนักสุทธิของเก็บเกี่ยวสดเชื้อรา
เสื่อที่ถูกโอนไปยัง 1.5 ml centrifuge หลอดบรรจุ
20 จะทริส– EDTA ( TE ) บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ – HCl , pH 8.0 ;
10 mM EDTA pH 8.0 ) และแช่แข็งที่ 70 C 30 นาทีจากนั้น
บดลงในสารละลายโดยใช้ไมโคร kontes เครื่องปั่นกับ
ฆ่าเชื้อเคล็ดลับ ( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Hanover Park , IL , USA ) ,
) สำหรับ 60 นาทีกระบวนการนี้จะทำซ้ำอีกครั้ง ที่
2.1 . ไข่แม่ปลาและปลา ' )
เมื่อกลางเดือนธันวาคม 2554 เราได้รับรายงานอย่างเป็นทางการระบุว่า การเกิดขึ้นของมวล mortalities
ของปลาแม่ปลาและไข่ส่งผลน้อยจากฟาร์มปลาสวยงามที่
ส่วนตัวที่ตั้งอยู่ทางตอนใต้ของสฟิงซ์จังหวัด
อียิปต์ เพื่อศึกษาปัญหา และแม่ปลา
10 400 ฟองปลาที่ได้จากฟาร์มไม้ประดับ
ปลาดังกล่าว ช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่าง
อุณหภูมิน้ำเฉลี่ย 16 ± 0.5 C .
ไข่ล้างหลายครั้งด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ , ฆ่าเชื้อ
แล้ววางใน 7.5 ด้วย 18.5 ซม. วนปากถุง ( NASCO
Fort Atkinson , วี , USA ) ( 10 ฟอง ต่อ 1 ถุง ) ล้างไข่
เต็มไปด้วยคู่น้ำกลั่นที่มี chloramphenicol /
เจนตาไมซินที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม 100 ml
12 H ที่ 18 C เพื่อป้องกันการปนเปื้อนแบคทีเรีย ปลาสำลี เหมือนเชื้อรา คือ เสื่อ
อาบน้ำกับคู่กลั่นน้ำกำจัดสารปนเปื้อนและแบคทีเรียตื้น
เก็บไว้ในน้ำแข็งในระหว่างกระบวนการทั้งหมดของการตรวจสอบ .
2.2 . การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของซาโปรเลกเนียชนิด
ล้างไข่ ( ไข่ / 10 ตัวอย่าง ) อยู่ใน 75 ด้วย 18.5 ซม.
วนปากถุง ( NASCO , Fort Atkinson , WI , USA ) จากนั้นเจือจาง
กับแฮงค์ สมดุลสารละลายเกลือ ( hbss , Sigma
Chemical Co . , St . Louis , MO , USA ) ในอัตราส่วนผสม 1 : 2 hbss ทั้ง
( v / v ) ไข่ และส่วนผสม hbss stomached
2 นาทีจนส่วนผสมมีอย่างสมบูรณ์
แผงประดับหน้าอกความเร็วสูงบด . เฉยๆ จากแยกปลูกเชื้อ
เป็นแผ่นของหมัน sabouraud dextrose agar ที่มี chloramphenicol
และเมล็ดกัญชาที่เป็นหมัน ( ชะอม ) เพื่อศึกษาโครงสร้างของสายพันธุ์
ทางเพศ ( SDA difco , แล็บ , USA ) .
ปลาสำลี เหมือนเสื่อเชื้อราเป็นล้างด้วยน้ำกลั่น
สองครั้งเพื่อกำจัดแบคทีเรียปนเปื้อนผิวเผิน
แล้ว loopfuls จากลึกผ้าฝ้าย ขนสัตว์เช่นเสื่อที่
เป็นแผลผิวหนังลึกถูกกระจายลงบนจานของ sabouraud เป็นหมัน
dextrose agar ที่มี chloramphenicol และเมล็ดกัญชา
เป็นหมัน ( SDA difco , แล็บ , USA ) .
เทพีปักษีอุณหภูมิ 20 C 3 – 5 วัน
ตรวจสอบประจำวันสำหรับใด ๆคาดว่าเชื้อราเจริญ . เก็บเกี่ยว
ราอาณานิคมมีความบริสุทธิ์แล้วเลื่อน
เทคนิคการเพาะเลี้ยงเป็นลูกบุญธรรมในคืนแรก
อาณานิคมการจำแนกลักษณะทางสัณฐานวิทยา . สปอร์ของเชื้อราเป็นถาวร
หนึ่งหยดเมทิลแอลกอฮอล์และเปื้อนด้วยแลคโตฟีนอลฝ้าย
สีฟ้าตามที่อธิบายไว้โดยวิลเลอห์บี [ 16 ] s เชื้อรา
atcc90213 ถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงสำหรับการยืนยันของสายพันธุ์
วัฒนธรรม รวมทั้งควบคุมบวกในการศึกษาโมเลกุล
.
2.3 การศึกษาลักษณะโครงสร้าง
รบกวนกัญชาเมล็ดแต่ละแยกถูกวางไว้เป็นอย่างดี
6จานวัฒนธรรม confining เป็นหมันน้ำจืดและบ่มที่
20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 21 วัน การกำหนดโครงสร้างและรูปแบบของพฤติกรรมทางเพศ
งอกภายใต้กล้องจุลทรรศน์ไทย . ในที่สุด
แยกสายพันธุ์ที่ระบุตามเงื่อนไขของ
Coker [ 34 ] , ซีม [ 3 ] [ 36 ] และตลาดหุ้น Pickering et al .
[ 37 ] .
2.4 . การสกัดดีเอ็นเอ
ขั้นตอนการสกัดดีเอ็นเอจากมอลเลอร์
บุญธรรมet al . [ 38 ] สั้น ๆ , 10 มิลลิกรัม ( น้ำหนักสุทธิของเก็บเกี่ยวสดเชื้อรา
เสื่อที่ถูกโอนไปยัง 1.5 ml centrifuge หลอดบรรจุ
20 จะทริส– EDTA ( TE ) บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ – HCl , pH 8.0 ;
10 mM EDTA pH 8.0 ) และแช่แข็งที่ 70 C 30 นาทีจากนั้น
บดลงในสารละลายโดยใช้ไมโคร kontes เครื่องปั่นกับ
ฆ่าเชื้อเคล็ดลับ ( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Hanover Park , IL , USA ) ,
) สำหรับ 60 นาทีกระบวนการนี้จะทำซ้ำอีกครั้ง ที่
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- , so the lack of opportunity in educatio
- Leveraging CRM to increase sales effect
- ฉันทำงานเข้าเดย์
- ชมวิว
- What kind of consult
- เยี่ยมชม
- blog
- Crust
- Write name customers in rooming list hot
- ฉันไม่ทันระวัง
- • We would appreciate it if you would ..
- AS AT
- look me to day
- ค่าน้ำมัน
- esulting in an extraordinary cultural of
- เตา
- ฉันทำงานเข้าเดย์
- ควรมีความยุติธรรม
- we played palything joyfully
- เยี่ยมชม
- i sort them by size so the big ones are
- companies must decide where to locate th
- Study Progress on Tissue Culture of Maiz
- เวลาวันพระหรืองานวันสำคัญต่างๆฉันจะเข้าว
