2.3. Extracts preparation
The most common way to extract metabolites is to shake the
homogenized plant tissue in organic solvents. Methanol, ethanol,
acetone and water were the solvents tested for extraction. Polyphenols
were extracted by maceration of 2.5 g of peach puree (IKA
Ultra-turrax T18, Wilmington, USA) for 60 s at 24,000 rpm with
25 mL of a mixture of methanol and water at a concentration of
800 mL/L. After 30 min under agitation (300 rpm) samples were
centrifuged at 4000 g for 10 min. Each sample supernatant were
recovered and filtered through a 0.45-mm cellulose acetate filter
(Orange Scientific, Braine-l'Alleud, Belgium). A 15-mL aliquot of the
extract was evaporated to dryness in a RVC 2-18 speed-vacuum
evaporator (Christ.Osterode am Harz. Germany) at 30 C and the
residue dissolved in 4 mL of methanol and analysed by HPLC UV/VIS
DAD.
Carotenoids were extracted as described by (Wright & Kader,
1997). Briefly, 2.5 g of peach puree were suspended in 5 mL of
cold ethanol and homogenized at 24,000 rpm for 3 min using an
ultra-turrax. Hexane (4 mL) was added to the homogenate and the
resulting mixture was homogenized for an additional 2 min and
then centrifuged for 10 min at 4000 g. The hexane layer containing
the carotenoids was transferred to a polypropylene tube. A
solution of saturated sodium chloride (2.5 mL) and an additional
4 mL of hexane were added to the slurry and the resulting mixture
was homogenized for 1 min. The mixture was centrifuged as
described above, and the second hexane layer recovered and mixed
with the first hexane layer for saponification. Saponification was
made as described by Kimura, Rodriguez-Amaya, and Godoy
(1990), where the resultant hexane fractions were mixed with
100 g/L methanolic KOH and left under agitation overnight at
300 rpm. The mixture then was washed with 100 mL/L NaCl and
after three washes with deionized water the sample was collected
and used for spectrophotometric and HPLC UV/VIS DAD. All extracts
were performed in triplicate samples.
2
2.3 การเตรียมสารสกัดจาก
วิธีที่ใช้กันมากที่สุดในการสกัดสารคือการเขย่า
เนื้อเยื่อพืชหดหายในตัวทำละลายอินทรีย์ เมทานอลเอทานอล
อะซีโตนและน้ำเป็นตัวทำละลายในการสกัดการทดสอบ โพลีฟีน
ถูกสกัดโดยยุ่ย 2.5 กรัมน้ำซุปข้นพีช (IKA?
T18 อัลตร้า turrax, วิลมิง, สหรัฐอเมริกา) 60 s ที่ 24,000 รอบต่อนาทีกับ
25 มิลลิลิตรมีส่วนผสมของเมทานอลและน้ำที่มีความเข้มข้นของ
800 มิลลิลิตร / ลิตร หลังจาก 30 นาทีภายใต้การกวน (300 รอบต่อนาที) ตัวอย่างที่ถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 4000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที สารละลายแต่ละตัวอย่างถูก
กู้คืนและกรองผ่าน 0.45 มมกรองเซลลูโลสอะซิเตท
(สีส้มวิทยาศาสตร์ Braine-l'Alleud, เบลเยียม) หาร 15 มิลลิลิตรของ
สารสกัดระเหยแห้งใน RVC 2-18 ความเร็วสูญญากาศ
ระเหย (Christ.Osterode am Harz. เยอรมนี) วันที่ 30 C และ
สารตกค้างที่ละลายใน 4 มลเมทานอลและวิเคราะห์โดยวิธี HPLC UV / VIS
DAD.
Carotenoids ถูกสกัดตามที่อธิบาย (ไรท์ & Kader,
1997) สั้น ๆ , 2.5 กรัมน้ำซุปข้นพีชถูกระงับใน 5 มิลลิลิตร?
เอทานอลที่หนาวเย็นและปั่น 24,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีโดยใช้
อัลตร้า turrax เฮกเซน (4 มิลลิลิตร) ถูกบันทึกอยู่ใน homogenate และ
ส่วนผสมที่เกิดทำให้เป็นเนื้อเดียวกันสำหรับอีก 2 นาทีและ
ปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4000 g แล้ว ชั้นเฮกเซนมี
นอยด์ที่ถูกย้ายไปยังหลอดโพรพิลีน
การแก้ปัญหาของอิ่มตัวโซเดียมคลอไรด์ (2.5 มิลลิลิตร) และอีก
4 มลเฮกเซนถูกเพิ่มเข้าไปในสารละลายและสารผสมที่เกิดขึ้น
ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันเป็นเวลา 1 นาที ส่วนผสมที่ถูกปั่นเป็น
อธิบายไว้ข้างต้นและชั้นที่สองเฮกเซนกู้คืนและผสม
กับชั้นเฮกเซนเป็นครั้งแรกสำหรับสะพอ สะพอถูก
ทำตามที่อธิบายไว้โดยคิมูระ Rodriguez-Amaya และ Godoy
(1990) ที่เศษส่วนเฮกเซนผลลัพธ์ถูกผสมกับ
100 กรัม / ลิตรเมทานอลและ KOH ซ้ายใต้ปั่นป่วนค้างคืนที่
300 รอบต่อนาที ส่วนผสมที่แล้วถูกล้างด้วย 100 มล / L โซเดียมคลอไรด์และ
หลังจากสามล้างด้วยน้ำปราศจากไอออนตัวอย่างที่ถูกเก็บรวบรวม
และใช้สำหรับสเปกและ HPLC UV / VIS DAD สารสกัดจากทั้งหมด
ได้ดำเนินการในตัวอย่างเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2
การแปล กรุณารอสักครู่..