Clones were hybridized to total DNA

Clones were hybridized to total DNA samples (7 pg) from seven unrelated individuals that had been digested with various restriction endonucleases according to the manufacturer (Boehringer), separated on 0.8% agarose gels in 1X TBE buffer, pH 8.3, for 18-20 hr and transferred to nylon mem- branes (AmershamH ybondN ) by aP harmaciaV acuGene apparatus. DNA was fixed to the filters by baking for 2 hr at 80”. Membranes were prehybridized for 2 hr at 42“ in 55% formamide, 5X SSPE, 5X Denhardt’s solution, 0.5% SDS, and 200 pg/ml RNA (from Torula yeast) in a Robbins hybridiza- tion incubator. Hybridizations were carried out overnight in 55% formamide, 5X SSPE, 0.2% SDS and 200 pg/ml RNA at 42”. Filters were washed twice for 20 min in 2X SSC, 0.2% SDS at room temperature. Restriction fragments were detected by the chemiluminescent assay of TIZARD et al. (1990) by applica- tion of 0.125 mM AMPPD (Tropix) to the filters and subse- quent exposure to Kodak XK-1 X-ray film for 4-5 hr. The criteria set for identifying a polymorphism was the observation of at least one heterozygote amongt he seven individuals scored for at least one of the four restriction enzymes repre- sented on a screening blot. See POGSON (1994) and POGSON and ZOUROS (1994) for more details

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โคลนได้ไฮบริดเพื่อรวมตัวอย่างดีเอ็นเอ (7 pg) จากเจ็ดไม่เกี่ยวบุคคลที่ได้รับการย่อยสลายด้วยต่าง ๆ ข้อจำกัด endonucleases ตามที่ผู้ผลิต (Boehringer), แยกบนเจ agarose 0.8% ใน 1 X TBE บัฟเฟอร์ pH 8.3, 18-20 ชั่วโมง และโอนไปไนล่อน mem-branes (AmershamH ybondN) โดย aP harmaciaV acuGene เครื่อง ดีเอ็นเอถูกแก้ไขตัวกรองการเอ่ยชม 2 ที่ 80" เยื่อหุ้มถูก prehybridized สำหรับ 2 ชั่วโมงที่ 42 นิ้วใน formamide 55%, 5 X SSPE, 5 X Denhardt ของโซลูชัน 0.5% SDS และ 200 pg/ml RNA (จากยีสต์ Torula) ในตู้อบ hybridiza-ทางการค้าที่ร็อบบินส์ Hybridizations ดำเนินการใน 55% formamide, 5 X SSPE, 0.2% SDS และ 200 pg/ml RNA ที่ 42 นิ้ว ตัวกรองถูกล้างสองครั้งสำหรับ 20 นาทีใน 2 X SSC, 0.2% SDS ที่อุณหภูมิห้อง บางส่วนของข้อจำกัดถูกตรวจพบ โดย assay chemiluminescent ของ TIZARD et al. (1990) โดยทางการกอนหนาค้า 0.125 มม. AMPPD (Tropix) ฟิลเตอร์และแสงเข่น quent ฟิล์มเอ็กซเรย์ Kodak XK-1 4-5 ชั่วโมง ตั้งค่าเงื่อนไขสำหรับการระบุความแตกต่างถูกสังเกตน้อยหนึ่ง heterozygote amongt เขาเจ็ดคนของเอนไซม์จำกัดสี่ยิ่ง sented ในบล็อทคัดกรองอย่างน้อยหนึ่งทำประตู ดู POGSON (1994) และ POGSON และ ZOUROS (1994) รายละเอียดเพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคลนถูกไฮบริดรวมตัวอย่างดีเอ็นเอ (7 PG) จากเจ็ดบุคคลที่ไม่เกี่ยวข้องที่ได้รับการย่อยด้วย endonucleases ข้อ จำกัด ต่าง ๆ ตามที่ผู้ผลิต (Boehringer) แยกจากกันบน 0.8% agarose เจลในบัฟเฟอร์ 1X TBE พีเอช 8.3, 18-20 HR และย้ายไป Branes ไนลอนจา (AmershamH ybondN) โดยอุปกรณ์ AP harmaciaV acuGene DNA ถูกจับจ้องไปที่ฟิลเตอร์โดยการอบเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 80 " เยื่อถูก prehybridized เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 42 "ใน 55% formamide, 5X SSPE วิธีการแก้ปัญหาของ 5X Denhardt, 0.5% SDS 200 และ PG / ml อาร์เอ็นเอ (จาก Torula ยีสต์) ในร็อบบินส์ hybridiza- ศูนย์บ่มเพาะการ Hybridizations ได้ดำเนินการค้างคืนใน formamide 55% 5X SSPE, SDS 0.2% และ 200 PG / ml RNA ที่ 42 " ฟิลเตอร์ถูกล้างสองครั้งเป็นเวลา 20 นาทีใน 2X SSC 0.2% SDS ที่อุณหภูมิห้อง ชิ้นส่วนข้อ จำกัด ถูกตรวจพบโดยการทดสอบ chemiluminescent ของเซอร์ด et al, (1990) โดยการประยุกต์ใช้ของ 0.125 มิลลิ AMPPD (Tropix) การกรองและการสัมผัส Quent subse- เพื่อ Kodak ฟิล์ม XK-1 X-ray สำหรับ 4-5 HR เกณฑ์ที่กำหนดสำหรับการระบุความแตกต่างคือการสังเกตอย่างน้อยหนึ่ง heterozygote amongt เขาเจ็ดบุคคลที่ได้คะแนนอย่างน้อยหนึ่งในสี่ของเอนไซม์ข้อ จำกัด repre- sented บน blot การตรวจคัดกรอง ดู Pogson (1994) และ Pogson และ ZOUROS (1994) สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม