DNA Preparation and PCR Performance

DNA Preparation and PCR Performance
Development of a DNA extraction method feasible for
field application.
We modified a variety of publicly and commercially available DNA extraction methodologies and kits to be usable in the absence of liquid nitrogen. Our test results show that a commercial Plant/Fungi DNA Isolation Kit when used with our unique modifications explained in the materials and methods (section 2.2) provided high quality and sufficient yield of genomic DNA from fungi and bacteria. With these modifications, we were able to improve the DNA yield close to the levels with either liquid nitrogen or chemical usage, obtaining 13 mg and 65 mg of DNA per 50 mg of fungal and bacterial biomass, respectively (Table 3). While the quantity of microbial genomic DNA extracted by the improved method is not as effective as conventional in-lab protocols, the yield obtained was sufficient for PCR based diagnostics.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอการเตรียมและ PCR
ผลการดำเนินงานการพัฒนาวิธีการสกัดดีเอ็นเอเป็นไปได้สำหรับการประยุกต์ใช้สนาม. เรามีการปรับเปลี่ยนความหลากหลายของสาธารณชนและใช้ได้ในเชิงพาณิชย์วิธีการสกัดดีเอ็นเอและชุดที่จะใช้งานในกรณีที่ไม่มีไนโตรเจนเหลว ผลการทดสอบของเราแสดงให้เห็นว่าพืชในเชิงพาณิชย์ / เชื้อราดีเอ็นเอแยกชุดเมื่อนำมาใช้กับการปรับเปลี่ยนเป็นเอกลักษณ์ของเราที่อธิบายไว้ในวัสดุและวิธีการ (มาตรา 2.2) ให้มีคุณภาพสูงและผลผลิตที่เพียงพอของดีเอ็นเอจากเชื้อราและแบคทีเรีย มีการปรับเปลี่ยนเหล่านี้เราสามารถที่จะเพิ่มผลผลิตดีเอ็นเอใกล้เคียงกับระดับที่มีทั้งไนโตรเจนเหลวหรือการใช้สารเคมีที่ได้รับ 13 มิลลิกรัมและ 65 มิลลิกรัมของดีเอ็นเอละ 50 มิลลิกรัมของเชื้อราและแบคทีเรียชีวมวลตามลำดับ (ตารางที่ 3) ในขณะที่ปริมาณของดีเอ็นเอของจุลินทรีย์สกัดโดยวิธีการที่ดีขึ้นไม่ได้เป็นผลเป็นโปรโตคอลในห้องปฏิบัติการทั่วไปอัตราผลตอบแทนที่ได้รับก็เพียงพอสำหรับการวินิจฉัยตามวิธี PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอเตรียมความพร้อมและพัฒนาประสิทธิภาพของการสกัดดีเอ็นเอด้วยวิธี PCR

เป็นไปได้สำหรับเขตข้อมูลโปรแกรมประยุกต์
เราแก้ไขความหลากหลายของสาธารณชนและวิธีการสกัดดีเอ็นเอที่สามารถใช้ได้ในเชิงพาณิชย์และชุดเพื่อให้สามารถใช้งานได้ในการขาดงานของไนโตรเจนเหลวผลการทดสอบของเราแสดงให้เห็นว่าการค้าพืช / เชื้อราการสกัดดีเอ็นเอชุดเมื่อใช้กับการปรับเปลี่ยนเฉพาะของเรา อธิบายในวัสดุและวิธีการ ( มาตรา 2.2 ) ให้คุณภาพและผลผลิตที่เพียงพอของ genomic DNA จากเชื้อราและแบคทีเรีย กับการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ เราก็สามารถที่จะเพิ่มผลผลิตดีเอ็นเอใกล้เคียงกับระดับด้วยไนโตรเจนเหลวหรือสารเคมีที่ใช้ได้รับ 13 65 มิลลิกรัมต่อมิลลิกรัมและดีเอ็นเอของเชื้อรา แบคทีเรีย ปริมาณ 50 มิลลิกรัม ตามลำดับ ( ตารางที่ 3 ) ในขณะที่ปริมาณของจุลินทรีย์ดีเอ็นเอที่สกัดโดยการปรับปรุงวิธีการไม่เป็นผลเป็นปกติในแล็บโปรโตคอล ผลตอบแทนที่ได้รับก็เพียงพอสำหรับ PCR โดยใช้การวิเคราะห์ข้อมูล