2. MATERIALS AND METHODSPlant Mater

2. MATERIALS AND METHODS
Plant Materials and Extraction Method
The wood of C. porrectum were collected from Trang province, Thailand. The voucher
specimens were deposited at the BKF (the Forest Herbarium) Office of Department of National
Parks (DNP) , Wildlife and Plant Conservation, Bangkok, Thailand (No. Chuakul908/BK60803)Its wood
was washed, sliced thinly, dried and powdered. It was extracted by maceration , decoction and
distillation methods.
Maceration: Dried plant material was macerated by 50%,95% ethanol for 3 day, all 3 times
on 9 days, filtered and dried using an evaporator. Decoction: Dried plant materials were boiled in
Sci-Health 019
การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่ 1
18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์
distilled water at boiling point for 30 min, filtered and dried by freeze dryer. The essential oil by
water distillation using Clevenger-type apparatus [4] All extracts were kept in freezer (-20°C) until
use.
Determination of Antioxidant Activity by DPPH assay
Antioxidant activity of the extracts was determined using the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl
(DPPH) method[ 5-6] Initially, 500 μl of thetest extracts in absolute ethanol were diluted as
concentrations (2, 20, 100 and 200 μg/ml) . One hundred microlites of each concentration
wasmixed with the same volume of 6 x 10-5 M DPPH in absolute ethanol. After 30 min of
incubation at room temperature in the dark, the reduction of DPPH radical was measured at
absorbance 520 nm. Butylated hyroxytoluene (BHT) were used as positive control. The total
phenolic content(TPC) of extracts from these plants were also determined. The TPC of the
extracts obtained from solvents having different dielectric constant values was measured at 725
nm using Folin-Ciocalteau spectrophotometric method. The experiment were taken in triplicate.
Gallic acid was used as standard compound. The results were expressed as Gallic AcidEquivalents
[(GAE) mg/100 gm].
Determination of Anti-inflammatory activity
Assay for NO inhibitory effect by inhibitory effect nitric oxide production in RAW 264.7[7-8],
in briefly, RAW 264.7 cells were washed with phosphate buffer saline (PBS) free of magnesium and
calcium. The PBS was decanted and cells were harvested with 0.25%ftrypsin-EDTA and fresh
medium was added. The cell pellet, was obtained by centrifugation (1000 rpm, 6 min), and was
resuspended in 10 ml of medium to make a single cell suspension. The viable cells were counted
by trypan blue exclusion in hematocytometer and diluted with medium to give a final
concentration of 1x106 cells/ml for RAW 264.7. One hundred microlitres per well of these cells
suspension were seeded in each 96-well microplates with 1x105 cells/well and allowed to adhere
for 1 h at 37°C in 5% CO2. After that, the medium was replaced with fresh medium containing 5
μg/ml of LPS (Lipopolysaccharide) together with test samples at various concentration levels and
then incubated for 48h. Each extract was initially dissolved in DMSO for ethanolic extracts, or
dissolved in sterile distilled water for water extracts. The extracts were diluted in medium to
produce required concentrations. A hundred microlitres of each concentration was added to each
well of plates to obtain final concentration of 1-100 μg/ml. The final dilution used for treating the
cells contained not more than 1% of the initial solvent; this concentration was used in the solvent
control wells. NO production was determined by measuring the accumulation of nitrite in the
culture supernatant using the Griess reagent. Cytotoxicity was also determined using the 3-(4, 5-
dimethyl-2- thaizoly)-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) solution (10 μl, 5 mg/ml in PBS)
was added to the wells. After 2 h incubation, the medium was removed, and isopropanol
Sci-Health 019
การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่ 1
18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์
containing 0.04 M HCI was then added to dissolve the formazan production in the cells. The
optical density of the formazan solution was measured with a microplate reader at 570 nm. The
test compounds were considered to be cytotoxic when the optical density of the sample-treated
group was less than 70-80% of that in the control (vehicle-treated) group. Indomethacin was used
as positive controls. Inhibition (%) was calculated using the following equation and IC50 values were
calculated from the Prism program.
Determination of Antimicrobial Activity
Five strains of bacteria, Staphylococcus aureus: ATCC 25923, Salmonella Typhi : ATCC
14028,Bacillus subtilis: ATCC 6633, Escherichia coli: ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa : ATCC
27853 were used for the study. The disk diffusion method [9] was used to screen the antimicrobial
activity of the C.porreetum extracts. Sterile 6-mm diameter paper disks were impregnated with 10
μl of concentrated oil and 10 μl of C.porrectum extracts was diluted in DMSO, MQ (100 mg/ml)
and placed on the inoculated MHA.The test plates were incubated at 37°C for 18 h. for bacteria .
The inhibition zone diameter was measured. The tests were performed in duplicate and the results
were averaged.
3. RESULTS AND DISCUSSION
Table 1 Antioxidant, Anti-inflammatory and antibacterial activities of the different extraction from
the wood of C. porrectum
Extracts Antioxidant Total phenolic content Anti-inflammatory Antimicrobial
activity activity activity
(EC50, μg/ml) [(GAE) mg/100 gm] (% inhibition) (mm)
St Sa Bs Ec Pa
water 7.92±0.20 264.09±5.77 23.75 NI, 8, NI, NI, NI
50%ethanolic 19.26±0.47 189.88 ±1.66 90.50 9, 10, 9, 10, NI
95%ethanolic 13.18±3.95 118.18 ±1.26 85.86 9, 9, 8, 10, NI
Essential oils >100 5.61 ±1.89 76.88 9, 10,12, 10, NI
Reference BHT 16.91
compounds
Remarks: St = Salmonella Typhi : ATCC 14028 , Sa = Staphylococcus aureus: ATCC
25923,Bs = Bacillus subtilis: ATCC 6633,Ec = Escherichia coli: ATCC 25922, Pa = Pseudomonas
aeruginosa : ATCC 27853 - NI = no zone of inhibition
Sci-Health 019
การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่ 1
18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์
4. RESULTS
The antioxidant activity of C. porrectum wood extracts was shown in Table 1 . Water
extract and 95% ethanolic extract showed stronger antioxidant than BHT (EC50 values as 7.92±0.20
μg/ml, 13.18±3.95 and 16.91 μg/ml respectively) and the antioxidant activity of these extracts were
related with the total phenolic content values (264.09±5.77 mg GAE/g in water extract and
118.18±1.26 mg GAE/g in 95% ethanol extract). Whereas the essential oils showed no antioxidant
activity and less total phenolic content. To assess anti-inflammatory activity all the extracts found
that 50% , 95% ethanolic extract and essential oil showed good anti-inflammatory activity (%
Inhibition values as 90.498 , 85.861 and 76.875 % respectively) .For the antimicrobial activities ,
oils and both ethanolic extracts from wood of C. porrectum exhibited antibacterial against four
microbe such as S. typhi, S.aureus, B.subtilis and E.coli , but there is no inhibition zone with P.
auruginosa . However, water extract showed less antibacterial , it only against S.aureus. These
results related with the previous report which study in bark , leave and oil from wood [1-3].
However , these results were the first report in wood from this plant which were extracted by
maceration and boiling in water.
This preliminary study could be concluded that the extracts from the wood of C.
porrectum. have pharmaceutical properties as antioxidant, anti-inflammatory and antimicrobial
activities. These results can support using its wood in Thai tradition medicine for wound treatment
and using in postpartum.
ACKNOWLEDGEMENT
This work was supported by the National Research University Project of Thailand Office of
Higher Education Commission and Faculty of medicine, Thammasat University.
REFERENCES

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการโรงงานผลิตและสกัดด้วยวิธีการไม้ของ C. porrectum ได้รวบรวมจากจังหวัดตรัง ไทย ใบสำคัญมีฝากไว้เป็นตัวอย่างที่ BKF (ป่าหอพรรณไม้) สำนักงานของแผนกของชาติสวนสาธารณะ (DNP), สัตว์ป่า และพืช อนุรักษ์ กรุงเทพ ไทย (หมายเลข Chuakul908/BK60803) ของไม้ไม่ล้าง หั่นบาง ๆ ประปราย แห้ง และผง มันถูกสกัด โดย maceration, decoction และวิธีการกลั่นMaceration: โรงงานอบแห้งวัสดุถูก macerated 50%, 95% เอทานอลสำหรับ 3 วัน ทั้งหมด 3 ครั้งในวันที่ 9 กรอง และแห้งใช้ evaporator ที่ Decoction: วัสดุพืชแห้งที่ต้มในวิทยาศาสตร์วิศวกรรมสุขภาพ 019การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่ 1มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ 18 ธันวาคม 2555น้ำกลั่นที่จุดเดือด 30 นาที กรอง และแห้ง โดยการเป่าหยุด น้ำมันหอมระเหยโดยน้ำกลั่นที่ใช้เครื่องชนิด Clevenger [4] สารสกัดจากทั้งหมดที่ถูกเก็บไว้ในตู้แช่แข็ง (-20 ° C) จนถึงใช้กำหนดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระ ด้วย DPPH assayกำหนดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดใช้ 1.1 ฟีนิลได-2-picrylhydrazyl(DPPH) วิธี [5-6] เริ่มต้น μl 500 thetest สารสกัดจากในเอทานอลนอนถูกทำให้เป็นความเข้มข้น (2, 20, 100 และ 200 μg/ml) Microlites ร้อยละความเข้มข้นของwasmixed กับไดรฟ์ข้อมูลเดียวกันของ 6 x 10-5 M DPPH ในเอทานอลที่แน่นอน หลังจาก 30 นาทีของบ่มที่อุณหภูมิห้องในมืด การลดลงของอนุมูล DPPH เป็นวัดที่absorbance 520 นิวตันเมตร Butylated hyroxytoluene (บาท) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก ผลรวมนอกจากนี้ยังได้กำหนด content(TPC) ฟีนอของสารสกัดจากพืชเหล่านี้ สิ่งทอของสารสกัดที่ได้จากหรือสารทำละลายที่มีค่า dielectric แตกต่างคงเป็นวัดที่ 725ใช้วิธี spectrophotometric Folin-Ciocalteau nm การทดลองได้รับ triplicateมีใช้กรด gallic เป็นมาตรฐานผสม ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น Gallic AcidEquivalents[(GAE) มิลลิกรัม/100 กรัม]กำหนดกิจกรรมแก้อักเสบวิเคราะห์ลักษณะพิเศษไม่ลิปกลอสไขด้วยลิปกลอสไขผลผลิตไนตริกออกไซด์ใน RAW 264.7 [7-8],ในเวลาสั้น ๆ RAW 264.7 เซลล์ถูกล้าง ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) ฟรีของแมกนีเซียม และแคลเซียม PBS มี decanted และเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว ด้วย 0.25%ftrypsin-EDTA และสดมีเพิ่มสื่อ เม็ดเซลล์ กล่าว โดย centrifugation (1000 รอบต่อนาที 6 นาที), และเป็นresuspended ใน 10 ml ของกลางให้ระงับเซลล์เดียว นับเซลล์ทำงานได้โดยแยก trypan blue ใน hematocytometer และแตกออก ด้วยสื่อให้คำสุดท้ายเข้มข้น 1 x 106 เซลล์/มล.ใน RAW 264.7 Microlitres ร้อยละดีเซลล์เหล่านี้ระงับ seeded ในแต่ละ microplates 96-ดีด้วย 1 x 105 เซลล์/ดี และสามารถปฏิบัติตามสำหรับ h 1 ที่ 37° C 5% CO2 หลังจากนั้น สื่อถูกแทนที่ ด้วยสื่อสดประกอบด้วย 5Μg/ml ของ LPS (Lipopolysaccharide) พร้อมตัวอย่างทดสอบที่ระดับความเข้มข้นต่าง ๆ และแล้ว incubated สำหรับ 48h เริ่มถูกละลายใน DMSO สารสกัดแต่ละสำหรับสารสกัด ethanolic หรือละลายในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อสำหรับสารสกัดจากน้ำ สารสกัดถูกทำให้เจือจางในการผลิตความเข้มข้นที่ต้องการ เพิ่ม microlitres ร้อยละความเข้มข้นของแต่ละดีของจานเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 1-100 μg/ml เจือจางสุดท้ายที่ใช้สำหรับการรักษาเซลล์ที่ประกอบด้วยราคาไม่เกิน 1% ของตัวทำละลายเริ่มต้น ใช้ในตัวทำละลายความเข้มข้นนี้ควบคุมบ่อ ไม่มีกำหนด โดยการวัดการสะสมของไนไตรต์ในการใช้รีเอเจนต์ Griess supernatant วัฒนธรรม นอกจากนี้ยังกำหนด cytotoxicity ใช้ใน 3- (4, 5-thaizoly-dimethyl-2) -2, 5-ฟีนิลได-2 H-tetrazolium โบรไมด์ (MTT) แก้ปัญหา (10 μl, 5 mg/ml ใน PBS)ถูกเพิ่มลงในบ่อ หลังจากฟักตัว 2 h สื่อถูกลบออก และ isopropanolวิทยาศาสตร์วิศวกรรมสุขภาพ 019การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่ 1มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ 18 ธันวาคม 2555ประกอบด้วย 0.04 M hci ถูกเพิ่มเข้าไปละลายการผลิต formazan ในเซลล์ ที่ความหนาแน่นออปติคอลโซลูชัน formazan ถูกวัด ด้วยเครื่องอ่าน microplate ที่ 570 nm ที่สารทดสอบได้ถือเป็น cytotoxic เมื่อแสงความหนาแน่นของตัวอย่างรับกลุ่มไม่น้อยกว่า 70-80% ซึ่งในกลุ่มควบคุม (รักษารถ) ใช้ indomethacinเป็นบวกการควบคุม มีคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้ยับยั้ง (%) และมีค่า IC50คำนวณจากโปรแกรมปริซึมกำหนดกิจกรรมจุลินทรีย์ห้าสายพันธุ์ของแบคทีเรีย Staphylococcus หมอเทศข้างลาย: ATCC 25923 ซัล Typhi: ATCC14028 คัด subtilis: ATCC 6633, Escherichia coli: ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa: ATCC27853 ถูกใช้สำหรับการศึกษา ใช้กับหน้าจอจุลินทรีย์วิธีแพร่ดิสก์ [9]กิจกรรมของสารสกัดจาก C.porreetum เส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มม.ใส่ดิสก์กระดาษได้ impregnated กับ 10Μl 10 สารสกัดจาก C.porrectum และ μl น้ำมันเข้มข้นถูกทำให้เจือจางใน DMSO, MQ (100 mg/ml)และวางบน inoculated MHA แผ่นทดสอบได้ incubated ที่ 37° C สำหรับ 18 h. สำหรับแบคทีเรียมีวัดเส้นผ่าศูนย์กลางโซนยับยั้ง ดำเนินการทดสอบซ้ำและผลมี averaged3. ผลลัพธ์ และสนทนาตารางที่ 1 สารต้านอนุมูลอิสระ ต้านเชื้อแบคทีเรีย และแก้อักเสบกิจกรรมต่าง ๆ สกัดจากไม้ของ C. porrectumสารสกัดจากจุลินทรีย์แก้อักเสบฟีนอรวมสารต้านอนุมูลอิสระเนื้อหากิจกรรมกิจกรรมกิจกรรม(EC50, μg/ml) [(GAE) มิลลิกรัม/100 กรัม] (%ยับยั้ง) (mm)Pa เซนต์ Sa Bs Ecน้ำ 7.92±0.20 NI 264.09±5.77 23.75, 8, NI, NI, NI50% ±1.66 ethanolic 19.26±0.47 189.88 90.50 9, 10, 9, 10, NI±1.26 95% ethanolic 13.18±3.95 118.18 85.86 9, 9, 8, 10, NIน้ำมัน > 100 5.61 ±1.89 76.88 9, 10,12, 10, NIอ้างอิง 16.91 บาทสารประกอบหมายเหตุ: เซนต์ = Typhi สาย: ATCC 14028, Sa = Staphylococcus หมอเทศข้างลาย: ATCC25923, Bs = subtilis คัด: ATCC 6633, Ec = Escherichia coli: ATCC 25922, Pa = Pseudomonasaeruginosa: ATCC 27853 - NI =ไม่มีโซนยับยั้งวิทยาศาสตร์วิศวกรรมสุขภาพ 019การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่ 1มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ 18 ธันวาคม 25554. ผลลัพธ์กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระสารสกัดจากไม้ซี porrectum ที่แสดงในตารางที่ 1 น้ำสารสกัดและ 95% ethanolic สกัดต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งแสดงกว่าบาท (ค่า EC50 เป็น 7.92±0.20Μg/ml, 13.18±3.95 และ μg 16.91 ml ตามลำดับ) และกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดเหล่านี้ที่เกี่ยวข้องกับค่าฟีนอเนื้อหาทั้งหมด (264.09±5.77 mg GAE/g ในน้ำสกัด และ118.18±1.26 mg GAE/g ในเอทานอล 95% แยก) ในขณะที่น้ำมันแสดงให้เห็นว่าไม่มีสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมและเนื้อหาน้อยฟีนอรวม การประเมินกิจกรรมแก้อักเสบสารสกัดจากทั้งหมดที่พบที่ 50%, 95% ethanolic สารสกัดและน้ำมันหอมระเหยพบกิจกรรมแก้อักเสบดี (%Inhibition values as 90.498 , 85.861 and 76.875 % respectively) .For the antimicrobial activities ,oils and both ethanolic extracts from wood of C. porrectum exhibited antibacterial against fourmicrobe such as S. typhi, S.aureus, B.subtilis and E.coli , but there is no inhibition zone with P.auruginosa . However, water extract showed less antibacterial , it only against S.aureus. Theseresults related with the previous report which study in bark , leave and oil from wood [1-3].However , these results were the first report in wood from this plant which were extracted bymaceration and boiling in water.This preliminary study could be concluded that the extracts from the wood of C.porrectum. have pharmaceutical properties as antioxidant, anti-inflammatory and antimicrobialactivities. These results can support using its wood in Thai tradition medicine for wound treatmentand using in postpartum.ACKNOWLEDGEMENTThis work was supported by the National Research University Project of Thailand Office ofHigher Education Commission and Faculty of medicine, Thammasat University.REFERENCES

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.
วัสดุและวิธีการวัสดุอาคารและวิธีการสกัดไม้ซี
porrectum ถูกเก็บรวบรวมจากจังหวัดตรัง บัตรกำนัลตัวอย่างมีเงินที่ BKF (สมุนไพรป่า) สำนักงานกรมแห่งชาติสวนสาธารณะ(DNP) สัตว์ป่าและพันธุ์พืช, Bangkok, Thailand (ฉบับที่ Chuakul908 / BK60803) ไม้ที่ถูกล้างหั่นบางๆ แห้งและผง มันถูกสกัดโดยยุ่ย, ยาต้มและวิธีการกลั่น. ยุ่ย: วัสดุจากพืชหมักแห้งได้โดย 50% เอทานอล 95% เป็นเวลา 3 วัน 3 ครั้งที่9 วันที่ผ่านการกรองและแห้งโดยใช้ระเหย ยาต้มแห้งวัสดุพืชถูกต้มในวิทย์สุขภาพ 1 18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์น้ำกลั่นที่จุดเดือด30 นาทีกรองและแห้งโดยเครื่องเป่าแช่แข็ง น้ำมันหอมระเหยจากการกลั่นน้ำโดยใช้เครื่อง Clevenger ประเภท [4] สารสกัดทั้งหมดถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็ง (-20 ° C) จนกระทั่งใช้. การกำหนดฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระด้วยวิธี DPPH กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดถูกกำหนดโดยใช้ 1,1-diphenyl -2-picrylhydrazyl (DPPH) วิธีการ [5-6] แรก 500 ไมโครลิตรของสารสกัดเอทานอลใน thetest แน่นอนถูกปรับลดเป็นความเข้มข้น(2, 20, 100 และ 200 ไมโครกรัม / มล.) หนึ่งร้อย microlites ของแต่ละความเข้มข้นwasmixed มีปริมาณเดียวกันของ 6 x 10-5 M DPPH ในเอทานอลที่แน่นอน หลังจาก 30 นาทีของการบ่มที่อุณหภูมิห้องในที่มืด, การลดลงของ DPPH รุนแรงที่วัดการดูดกลืนแสง520 นาโนเมตร butylated hyroxytoluene (บาท) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก รวมเนื้อหาฟีนอล (TPC) ของสารสกัดจากพืชเหล่านี้ยังได้รับการพิจารณา มาตรฐาน TPC ของสารสกัดที่ได้จากตัวทำละลายมีค่าคงที่ที่แตกต่างกันวัดอิเล็กทริกที่725 นาโนเมตรโดยใช้ Folin-Ciocalteau วิธีสเปก การทดลองที่ถูกถ่ายในเพิ่มขึ้นสามเท่า. กรดฝรั่งเศสถูกใช้เป็นสารมาตรฐาน ผลการวิจัยแสดงเป็นฝรั่งเศส AcidEquivalents [(GAE) มก. / 100 กรัม]. การกำหนดกิจกรรมต้านการอักเสบAssay สำหรับไม่มีผลยับยั้งโดยผลยับยั้งการผลิตไนตริกออกไซด์ใน RAW 264.7 [7-8] ในเวลาสั้น ๆ , RAW 264.7 เซลล์ได้ ล้างด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส) ฟรีแมกนีเซียมและแคลเซียม พีบีเอสได้รับการ decanted และเซลล์เก็บเกี่ยวกับ 0.25% ftrypsin-EDTA และสดกลางถูกเพิ่มเข้ามา ตะกอนเซลล์ที่ได้มาจากการหมุนเหวี่ยง (1000 รอบต่อนาที, 6 นาที) และได้รับการresuspended ใน 10 มล. ของกลางที่จะทำให้การระงับเซลล์เดียว เซลล์ทำงานได้นับโดยการยกเว้นสีฟ้า Trypan ใน hematocytometer และเจือจางกับสื่อที่จะให้เป็นครั้งสุดท้ายความเข้มข้นของ1x106 เซลล์ / มล. สำหรับ RAW 264.7 หนึ่งร้อย microlitres ต่อกันของเซลล์เหล่านี้ระงับเมล็ดในแต่ละ96 หลุม microplates กับ 1x105 cells / ดีและได้รับอนุญาตให้เป็นไปตามเวลา1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน CO2 5% หลังจากนั้นสื่อที่ถูกแทนที่ด้วยสื่อที่มีความสดใหม่ 5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร LPS (Lipopolysaccharide) พร้อมตัวอย่างทดสอบที่ระดับความเข้มข้นต่างๆและบ่มแล้ว48h สารสกัดแต่ละคนก็เลือนหายไปครั้งแรกใน DMSO สำหรับสารสกัดเอทานอลหรือละลายในน้ำกลั่นปลอดเชื้อสำหรับสารสกัดจากน้ำ สารสกัดถูกเจือจางในสื่อกลางในการผลิตความเข้มข้นที่จำเป็น ร้อย microlitres ของความเข้มข้นของแต่ละถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีของแผ่นเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ1-100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร เจือจางสุดท้ายใช้สำหรับการรักษาเซลล์ที่มีอยู่ไม่เกิน 1% ของตัวทำละลายเริ่มต้น; ความเข้มข้นนี้ถูกนำมาใช้เป็นตัวทำละลายในหลุมควบคุม การผลิตไม่ได้รับการกำหนดโดยการวัดการสะสมของไนไตรท์ในสารละลายวัฒนธรรมโดยใช้น้ำยา Griess พิษก็ยังมุ่งมั่นที่ใช้ 3 (4, 5 dimethyl-2- thaizoly) -2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium โบรไมด์ (MTT) วิธีการแก้ปัญหา (10 ไมโครลิตร 5 mg / ml ในพีบีเอส) ถูกบันทึกอยู่ในหลุม . หลังจากนั้น 2 ชั่วโมงบ่มกลางจะถูกลบออกและ isopropanol วิทย์สุขภาพ 1 18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ที่มี0.04 M HCI ถูกแล้วที่จะละลายเพิ่มการผลิต formazan ในเซลล์ ความหนาแน่นของแสงของการแก้ปัญหา formazan วัดที่มีผู้อ่าน microplate ที่ 570 นาโนเมตร สารทดสอบที่ได้รับการพิจารณาให้เป็นพิษเมื่อความหนาแน่นของแสงของกลุ่มตัวอย่างรับการรักษากลุ่มน้อยกว่า 70-80% ของที่อยู่ในการควบคุม (รถที่ได้รับ) กลุ่ม indomethacin ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก ยับยั้ง (%) คำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้และค่า IC50 ถูกคำนวณจากโปรแกรมปริซึม. การกำหนดกิจกรรมต้านจุลชีพห้าสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรีย Staphylococcus aureus: ATCC 25923, Salmonella typhi: ATCC 14028, เชื้อ Bacillus subtilis: ATCC 6633, Escherichia coli: ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa: ATCC 27853 ถูกนำมาใช้เพื่อการศึกษา วิธีการแพร่กระจายดิสก์ [9] ถูกใช้ในการต้านจุลชีพหน้าจอการทำงานของสารสกัดจากC.porreetum หมัน 6 มมแผ่นกระดาษขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางถูกชุบด้วย 10 ไมโครลิตรของน้ำมันที่มีความเข้มข้น 10 ไมโครลิตรของสารสกัดจาก C.porrectum ถูกเจือจางใน DMSO, MQ (100 mg / ml) และวางอยู่บนเชื้อ MHA.The แผ่นทดสอบถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง สำหรับแบคทีเรีย. เส้นผ่าศูนย์กลางบริเวณยับยั้งที่ได้รับการวัด การทดสอบได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันและผลที่ได้รับเฉลี่ย. 3 ผลการอภิปรายและตารางที่ 1 สารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมต้านการอักเสบและต้านเชื้อแบคทีเรียของการสกัดที่แตกต่างจากไม้ซีporrectum สารสกัดสารต้านอนุมูลอิสระรวมเนื้อหาฟีนอลต้านการอักเสบต้านจุลชีพกิจกรรมกิจกรรมกิจกรรม(EC50, g / ml) [(GAE) มก. / 100 กรัม] (% ยับยั้ง) (mm) เซนต์ Sa Bs Ec ป่าน้ำ7.92 ± 0.20 264.09 ± 5.77 23.75 NI, 8, NI, NI, NI 50% เอทานอล 19.26 ± 0.47 189.88 ± 1.66 90.50 9, 10, 9, 10, NI เอทานอล 95% 13.18 ± 3.95 118.18 1.26 85.86 ± 9, 9, 8, 10, NI น้ำมันหอมระเหย> 100 5.61 1.89 76.88 ± 9, 10,12, 10, NI อ้างอิง 16.91 บาทสารประกอบหมายเหตุ: เซนต์ = Salmonella typhi: ATCC 14028, Sa = เชื้อ Staphylococcus aureus: ATCC 25923, Bs = เชื้อ Bacillus subtilis: ATCC 6633, Ec = อีโค: ATCC 25922, Pa = Pseudomonas aeruginosa: ATCC 27853 - NI = โซนไม่มีการยับยั้งวิทย์สุขภาพ 1 18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์4 ผลกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจากซี porrectum ไม้ถูกนำมาแสดงในตารางที่ 1 น้ำสารสกัดและ 95% สารสกัดพบว่ามีสารต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งกว่าบาท (EC50 ค่าเป็น 7.92 ± 0.20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร 13.18 ± 3.95 และ 16.91 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับ) และสารต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดเหล่านี้เกี่ยวข้องกับค่านิยมเนื้อหาฟีนอลรวม(264.09 ± 5.77 มิลลิกรัม GAE / g ในสารสกัดจากน้ำและ118.18 ± 1.26 มิลลิกรัม GAE / g ในสารสกัดเอทานอล 95%) ในขณะที่น้ำมันหอมระเหยพบว่าไม่มีสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมและเนื้อหาฟีนอลรวมน้อย เพื่อประเมินกิจกรรมต้านการอักเสบสารสกัดจากทั้งหมดที่พบว่า 50%, 95% เอทานอลและสารสกัดจากน้ำมันหอมระเหยที่มีฤทธิ์ต้านการอักเสบที่ดี (% ค่าการยับยั้งเป็น 90.498, 85.861 และ 76.875% ตามลำดับ) การกีฬากิจกรรมต้านจุลชีพของน้ำมันและเอทานอลทั้งสองสารสกัดจากไม้ซี porrectum แสดงต้านเชื้อแบคทีเรียกับสี่จุลินทรีย์เช่นS. typhi, S.aureus, E.coli และ B.subtilis แต่มีบริเวณยับยั้งใด ๆ กับพีauruginosa แต่แสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากน้ำต้านเชื้อแบคทีเรียน้อยกว่าก็เฉพาะกับ S.aureus เหล่านี้ผลที่เกี่ยวข้องกับรายงานก่อนหน้านี้ซึ่งการศึกษาในเปลือกออกและน้ำมันจากไม้ [1-3]. อย่างไรก็ตามผลเหล่านี้เป็นรายงานครั้งแรกในไม้จากพืชชนิดนี้ที่ถูกสกัดโดยยุ่ยและต้มในน้ำ. นี้การศึกษาเบื้องต้นที่จะทำได้ สรุปได้ว่าสารสกัดจากไม้ของซีporrectum มีคุณสมบัติเป็นสารต้านอนุมูลยาต้านการอักเสบและต้านจุลชีพกิจกรรม ผลลัพธ์เหล่านี้สามารถรองรับการใช้ไม้ในการแพทย์แผนไทยในการรักษาแผลและการใช้ในหลังคลอด. รับทราบผลงานชิ้นนี้ได้รับการสนับสนุนจากมหาวิทยาลัยวิจัยแห่งชาติโครงการแห่งประเทศไทยสำนักงานอุดมศึกษาสำนักงานคณะกรรมการกำกับและคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์. ข้อมูลอ้างอิง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการผลิตวัสดุและวิธีสกัด

ไม้ของ porrectum รวบรวมจากจังหวัดตรัง ประเทศไทย คูปอง
ตัวอย่างฝากเงินใน BKF ( หอพรรณไม้ ) สำนักงานกรมอุทยานแห่งชาติ
( DNP ) , และการอนุรักษ์สัตว์ป่า พืช กรุงเทพฯ ( ไม่ chuakul908 / bk60803 ) ไม้
ล้างหั่นบาง ๆประปราย แห้งและผงมันถูกสกัดโดยวิธีการกลั่นและยุ่ย , ยาต้ม
.
ยุ่ย : วัสดุพืชแห้ง macerated 50% เอทานอล 95% 3 วัน ทั้ง 3 ครั้ง
9 วัน และใช้เป็นกรองแห้งระเหย ที่ : วัสดุพืชแห้งมาต้มใน

1
การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่วิทย์ 019 สุขภาพ18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์
น้ำกลั่นที่จุดเดือดประมาณ 30 นาที กรองและอบแห้งด้วยเครื่องอบแห้งแบบแช่แข็ง น้ำมันที่จำเป็นจาก
การกลั่นน้ำโดยใช้เคลวินเจอร์ประเภทอุปกรณ์ [ 4 ] สารสกัดทั้งหมดถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็ง ( - 20 ° C )

จนใช้ ปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระโดย dpph assay
ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดถูกกำหนดโดยใช้ 11-diphenyl-2-picrylhydrazyl
( dpph ) [ 5-6 ] ตอนแรก , 500 μ l การทดสอบสารสกัดเอทานอลลดความเข้มข้นที่แน่นอน
( 2 , 20 , 100 และ 200 μ g / ml ) หนึ่งร้อย microlites ของแต่ละความเข้มข้น
wasmixed กับปริมาณเดียวกันของ 6 x 10-5 M dpph ในสัมบูรณ์เอทานอล หลังจาก 30 นาทีของ
บ่มที่อุณหภูมิห้องในที่มืด การลดลงของ dpph หัวรุนแรงถูกวัดที่
การดูดกลืนแสง 520 nm . butylated hyroxytoluene ( บาท ) ที่ใช้ควบคุมบวก ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด
( TPC ) สารสกัดจากพืชเหล่านี้ถูกกำหนดไว้ การร่วมของ สารสกัดที่ได้จากตัวทำละลายที่แตกต่างกัน
มีฉนวนคงที่ค่าวัดที่ 725
nm ใช้ folin ciocalteau ) วิธี การทดลองถ่าย
ทั้งสามใบเพิ่มขึ้นมาใช้เป็นสารมาตรฐาน ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นฝรั่งเศส acidequivalents
[ ( เก ) มิลลิกรัม / 100 กรัม ] .
หาวิธีต่อต้านกิจกรรม
อักเสบที่ไม่มีผลยับยั้งการยับยั้งไนตริกออกไซด์ที่ผลิตโดยผลดิบ 264.7 [ 7 ] ,
ใน สั้น ๆ ดิบ 264.7 เซลล์ถูกล้างด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS ) เกลือของแมกนีเซียมและ
ฟรี แคลเซียมโดยพีบีเอสถูกรินและเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวกับ 0.25% ftrypsin EDTA และขนาดกลางสด
ถูกเพิ่มเข้ามา เซลล์เม็ด ได้โดยการเหวี่ยงแยก ( 1000 รอบต่อนาที 6 นาที ) , และ
resuspended 10 มิลลิลิตร กลาง เพื่อให้ระงับเซลล์เดี่ยว เซลล์ได้ถูกนับ
โดยไตรแพนสีฟ้าออกไปใน hematocytometer เจือจางและขนาดกลางเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้าย
เซลล์ 1x106 / ml ดิบ 264.7 .หนึ่งร้อย microlitres ต่อด้วยเซลล์
เหล่านี้ระงับถูก seeded ในแต่ละ 96 ดี microplates กับ 1x105 เซลล์ / ดี และได้รับอนุญาตให้ปฏิบัติตาม
1 H ที่ 37 ° C ในคาร์บอนไดออกไซด์ 5% หลังจากนั้น สื่อถูกแทนที่ด้วยสดอาหารที่มี 5
μ g / ml สเปรย์หล่อลื่น ( สีดำเข้ม ) พร้อมตัวอย่างทดสอบที่ระดับความเข้มข้นต่างๆและ
จากนั้นบ่มเพื่อเลี้ยงแต่ละแยกก็เริ่มละลายใน DMSO สารสกัดเอทานอล หรือเป็นหมัน
ละลายในน้ำกลั่น น้ำ สารสกัด สารสกัดลดในสื่อ
ผลิต ต้องเข้มข้น ร้อย microlitres ของแต่ละความเข้มข้นเพิ่มแต่ละ
ดีของแผ่นเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย 1-100 μ g / ml และสุดท้ายการใช้สำหรับการรักษา
เซลล์มีไม่เกิน 1% ของตัวทำละลายความเข้มข้นเริ่มต้น ; นี้ถูกใช้ในบ่อ
ควบคุมปริมาตร ไม่มีการผลิตถูกกำหนดโดยการวัดการสะสมของไนไตรท์ใน
วัฒนธรรมนำใช้ griess เกิดปฏิกิริยา เซลล์ก็ยังระบุการใช้ 3 - ( 4 , 5 -
dimethyl-2 - thaizoly ) - 2 5-diphenyl-2h-tetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) โซลูชั่น ( 10 μ l , 5 มก. / มล. ใน PBS )
ถูกเพิ่มลงในบ่อน้ำ หลังจาก 2 ชั่วโมง ระยะเวลากลางจะถูกลบออก และไอโซโพรพานอล

การประชุมเครือข่ายวิชาการบัณทิตศึกษาแห่งชาติครั้งที่สุขภาพวิทย์ 019 1

ที่ 18 ธันวาคม 2555 มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ 0.04 M กรดไฮโดรคลอริกแล้วเพิ่มละลายปฏิบัติการการผลิตในเซลล์
ความหนาแน่นของแสงของสารละลายปฏิบัติการวัดด้วยเครื่องอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยที่ 570 นาโนเมตร
เป็นสารที่ทดสอบเป็นพิษ เมื่อความหนาแน่นของแสงของตัวอย่างกลุ่ม
น้อยกว่า 70-80% ของที่ในการควบคุมรถยนต์ถือว่า ) กลุ่ม อินโดใช้
เป็นตัวควบคุมบวก การยับยั้ง ( % ) คำนวณได้โดยใช้สมการต่อไปนี้ และ ic50 ค่า