This cassette was excised and added

This cassette was excised and added upstream of the mutated pds using the KpnI and XhoI restriction sites, or downstream of the selection marker using the BamHI and XbaI sites (Fig. 2). Both versions were produced using the pBS–pds short (S) or long (L) versions (Figs. 1 and 2). Resulting plasmids were transformed successfully into H. pluvialis, yielding norflurazon- resistant colonies, though yielding lower transformation frequency (Table 2). Successful incorporation of the PsaD–ble cassette was verified by PCR amplification using primers specific to the ble inserted at the end of the PsaD 5′ and at the end of the ble CDS as drawn in Fig. 2. All colonies derived from transformation with pBS–pds S–ble BamHI, XbaI; pBS–pds L–ble BamHI, XbaI; pBS–pds S–ble KpnI, XhoI; pBS–pds L–ble KpnI, XhoI; or with linear DNA fragments extracted from those plasmids, featured a PCR product corresponding to the size expected from the inserted ble with the possible exception of lane 7 (Fig. 3), while no signal was obtained with control H. pluvialis DNA. The 100% yield of co-insertion of ble observed indicates that additional genes linked to pds in pBS–pds can be transformed into H. pluvialis with very high efficiency. Also, insertion appears to occur very near to the end of the linear DNA fragments, since all resistant clones tested also featured the full size PsaD-ble cassette PCR product (conducted on extracted gDNA, not shown). WT (wild type) DNA yielded no PCR product for this gene while a positive control PCR yielded the expected product (Fig. 3). The ble gene was weakly transcribed into RNA transcripts, as confirmed by PCR amplification of cDNA template synthesized from extracted RNA of transformed colonies (Fig. 4). The PCR product includes 986bp corresponding to a partial 5' PsaD UTR, the full ble CDS (intronless), and PsaD 3' UTR PCR transcript.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เทปนี้ถูกตัดและเพิ่มต้นน้ำของ PDS กลายพันธุ์โดยใช้ KpnI และ XhoI เว็บไซต์ข้อ จำกัด หรือปลายน้ำของเครื่องหมายการเลือกใช้ BamHI และเว็บไซต์ XbaI (รูปที่. 2) ทั้งสองรุ่นมีการผลิตโดยใช้พีบีเอส-PDS สั้น (S) หรือระยะยาว (L) รุ่น (มะเดื่อ. 1 และ 2) พลาสมิดส่งผลให้ถูกเปลี่ยนประสบความสำเร็จในเอช pluvialis ยอมหรือชั้น urazon- อาณานิคมทน แต่ยอมเปลี่ยนแปลงความถี่ที่ต่ำกว่า (ตารางที่ 2) การรวมตัวกันที่ประสบความสำเร็จของเทป psad-เบิ้เป็นเอ็ดสาย Veri โดยวิธี PCR ampli สายไอออนโดยใช้ไพรเมอร์ค speci สายไปเบิ้ลใส่ในตอนท้ายของ psad 5 'และในตอนท้ายของ CDS เบิ้ลในขณะที่วาดในรูป 2. อาณานิคมทั้งหมดที่ได้มาจากการเปลี่ยนแปลงกับพีบีเอส PDS-S-เบิ้ BamHI, XbaI; พีบีเอส PDS-L-เบิ้ BamHI, XbaI; พีบีเอส PDS-S-เบิ้ KpnI, XhoI; พีบีเอส PDS-L-เบิ้ KpnI, XhoI; หรือเชิงเส้นดีเอ็นเอที่สกัดจากพลาสมิดเหล่านั้นให้ความสำคัญเป็นผลิตภัณฑ์ PCR ที่สอดคล้องกับขนาดที่คาดว่าจะมาจากการแทรกเบิ้มีข้อยกเว้น 7 เลน (รูปที่. 3) ในขณะที่ไม่มีสัญญาณที่ได้รับกับการควบคุมดีเอ็นเอเอช pluvialis อัตราผลตอบแทน 100% ของผู้ร่วมแทรกสารบัญสังเกตแสดงให้เห็นว่ายีนเพิ่มเติมที่เชื่อมโยงกับพีบีเอสใน PDS-PDS สามารถเปลี่ยนเป็นเอช pluvialis กับการขาดไฟ EF สูงมาก นอกจากนี้ยังมีการแทรกดูเหมือนจะเกิดขึ้นใกล้กับจุดสิ้นสุดของดีเอ็นเอเชิงเส้นตั้งแต่โคลนทนทุกการทดสอบยังให้ความสำคัญขนาดเต็มเทป psad-เบิ้ผลิตภัณฑ์ PCR (ดำเนินการเกี่ยวกับการสกัด gDNA, ไม่แสดง) WT (ป่าพิมพ์) ดีเอ็นเอให้ผลไม่มีผลิตภัณฑ์ PCR สำหรับยีนนี้ในขณะที่วิธี PCR ให้ผลบวกการควบคุมสินค้าที่คาดว่า (รูปที่. 3) ยีนเบิ้ถูกคัดลอกลงในใบรับรองผลการเรียนอ่อนอาร์เอ็นเอเป็นนักโทษสาย rmed โดยไอออนบวก PCR ampli สายแม่แบบยีนสังเคราะห์จากสารสกัดอาร์เอ็นเอของอาณานิคมเปลี่ยน (รูปที่. 4) ผลิตภัณฑ์ PCR รวมถึง 986bp สอดคล้องกับบางส่วน 5 'psad UTR, ซีดีเบิ้เต็มรูปแบบ (intronless) และ psad 3' UTR หลักฐาน PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทปนี้ถูกตัดและเพิ่มกระแสกลายพันธุ์ PDS ใช้ kpni xhoi เว็บไซต์และข้อ จำกัด หรือ ผ่านการทำเครื่องหมายด้วย BamHI xbai และเว็บไซต์ ( รูปที่ 2 ) ทั้งสองรุ่นถูกผลิตใช้ PBS – PDS สั้น ( s ) หรือยาว ( L ) รุ่น ( Figs 1 และ 2 ) พลาสมิดซึ่งถูกเปลี่ยนเรียบร้อยแล้วเป็นชั่วโมง สีเขียว หยุ่น หรือflโคโลนีทนต่อ urazon - ,แม้ว่าผลผลิตลดการแปลงความถี่ ( ตารางที่ 2 ) การประสบความสำเร็จของ psad – ble เทปคือข้อมูลจึงเอ็ดซึ่ง ampli จึงการใช้ไพรเมอร์กาจึง C กับ ble ที่แทรกอยู่ในตอนท้ายของ psad 5 นั้น และในตอนท้ายของซีดี ble ที่วาดในรูปที่ 2 ทั้งหมดได้มาจากการเปลี่ยนแปลงกับ PBS –อาณานิคม PDS S – ble BamHI xbai ; , PBS ) PDS แอล– ble BamHI xbai ; PBS ) , PDS S – ble kpni xhoi ; ,พีบีเอส– PDS แอล– ble kpni xhoi ; , หรือเชิงเส้นกับชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่สกัดจากพลาสมิดที่โดดเด่นและผลิตภัณฑ์ที่สอดคล้องกับขนาดคาดหวังจากแทรก ble มีข้อยกเว้นของช่อง 7 ( รูปที่ 3 ) ในขณะที่ไม่มีสัญญาณได้ด้วยการควบคุมเอชสีเขียว ดีเอ็นเอ100 เปอร์เซ็นต์ CO แทรก ble สังเกตพบว่า ยีนที่เชื่อมโยงกับ PDS เพิ่มเติมใน PBS – PDS สามารถเปลี่ยนเป็น H . สีเขียวกับ EF ประสิทธิภาพสูงมากจึง . ยังแทรกปรากฏเกิดขึ้นมากอยู่ใกล้กับจุดสิ้นสุดของชิ้นส่วนดีเอ็นเอโดยตรง เนื่องจากโคลนทนการทดสอบทั้งหมด โดดเด่นด้วยผลิตภัณฑ์ PCR ขนาดเต็ม psad เทป ble ( ขึ้นอยู่กับสกัด gdna ไม่แสดง )WT ( ไพรม์ไทม์ ) ดีเอ็นเอจากยีนดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์นี้ในขณะที่ควบคุมให้ผลบวกโดยคาดว่าผลิตภัณฑ์ ( รูปที่ 3 ) ยีนและ RNA transcripts ใน ble เป็นอย่างอ่อน เช่น คอน จึง rmed โดยวิธี PCR จึง ampli cDNA ที่สังเคราะห์จากการสกัด RNA จากแม่แบบเปลี่ยนอาณานิคม ( รูปที่ 4 ) ผลิตภัณฑ์ซึ่งรวมถึง 986bp สอดคล้องกับบางส่วนของ 5 ' UTR psad ,เต็มรูปแบบ ble ซีดี ( intronless ) และ psad 3 ' UTR )
. .