2.1. Cultivar selection and samplin

2.1. Cultivar selection and sampling
A total of 9 cultivars of pineapple were collected. Selection of this cultivar was made based on information
given by Malaysian Pineapple Industry Board. The cultivar were Josapine, Gandul, Yankee, MD2, MD2
(Tissue Culture), Morris Bentanggur, Morris Gajah, N36 and Sarawak Green Local. According to them, these
9 pineapple cultivars have their own commercial value. Young and fresh leaf were selected, labelled and kept
in proper storage bag.
2.2. DNA analysis
Genomic DNA was extracted from fresh material using QIAGEN Dneasy Mini Plant Kit with slight
modification. The DNA obtained was stored in -20oC for long term usage. The amplification of the ITS region
was carried out using primer pairs AB101 and AB102, forward and reverse primer respectively as shown in
Figure 1. Each reaction included 5 μl 10x Standard Taq Reaction Buffer, 1 μl of each 10 μM forward and
reverse primers, 1 μl of dNTPs, 39.75 μl sterile deionized water, 0.25 μl Taq DNA polymerase and 2 μl
template genomic DNA. The PCR profile includes 1 cycle predenaturation at 94oC for 2 minutes, 30 cycles of
denaturation at 94oC for 50 seconds, annealing 50oC for 1 minutes, extension 72oC for 7 minutes and final
extension at 72oC for 7 minutes. PCR product was visualized by 0.8% of agarose gel electrophoresis.
PCR product were cloned into pGEM-T Easy (Promega) and transformed into NEB5 competent cell.
Plasmid extraction was conducted by QIAmp Spin Miniprep following manufacturer’s instruction. Restriction
enzyme digestion was carried by using EcoRI. Digestion mixture was prepared before addition of restriction

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1. cultivar เลือกและสุ่มตัวอย่างจำนวน 9 พันธุ์ของสับปะรดถูกเก็บรวบรวม เลือกของ cultivar นี้ถูกสร้างขึ้นตามข้อมูลกำหนด โดยคณะกรรมการอุตสาหกรรมสับปะรดมาเลเซีย Cultivar มี Josapine, Gandul แยง MD2, MD2(เยื่อ), Bentanggur มอร์ริส ดี คลับมอร์ริส N36 และซาราวัคเขียวท้องถิ่น ตาม พวกเขาเหล่านี้พันธุ์สับปะรด 9 มีมูลค่าการค้าของตนเอง หนุ่มสาวและใบไม้สดเลือก มัน และเก็บไว้ในกระเป๋าเก็บที่เหมาะสม2.2 การวิเคราะห์ DNAGenomic DNA ที่สกัดจากวัสดุสดด้วย QIAGEN Dneasy มินิโรงงานชุดเล็กน้อยปรับเปลี่ยน ดีเอ็นเอได้ถูกเก็บไว้ใน - 20oC สำหรับการใช้งานระยะยาว ขยายของภาคได้ดำเนินการใช้รองพื้นคู่ AB101 และ AB102 ไปข้างหน้า และย้อนกลับพื้นตามลำดับดังแสดงในรูปที่ 1 แต่ละปฏิกิริยารวม 5 μl 10 x บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา Taq มาตรฐาน μl 1 ของแต่ละข้างหน้า 10 μM และกลับไพรเมอร์ μl 1 ของ dNTPs, μl 39.75 น้ำ deionized กอซ 0.25 μl Taq DNA พอลิเมอเรส และ 2 μlแม่ genomic DNA โพรไฟล์ PCR มี 1 วงจร predenaturation ที่ 94oC 2 นาที 30 รอบของdenaturation ที่ 94oC วินาที การอบเหนียว 50oC สำหรับนาที ขยาย 72oC 1 ใน 7 นาทีและสุดท้ายส่วนขยายที่ 72oC 7 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR มี visualized 0.8% ของ agarose เจ electrophoresisผลิตภัณฑ์ PCR โคลนเป็น Easy pGEM-T (Promega) และเปลี่ยนเป็นเซลล์เชี่ยวชาญ NEB5QIAmp หมุน Miniprep ตามคำแนะนำของผู้ผลิตได้ดำเนินการสกัด plasmid ข้อจำกัดเอนไซม์ย่อยอาหารถูกดำเนินโดย EcoRI มีเตรียมส่วนผสมย่อยอาหารก่อนเพิ่มข้อจำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 การเลือกพันธุ์และการสุ่มตัวอย่าง
จำนวน 9 สายพันธุ์ของสับปะรดที่ถูกเก็บรวบรวม การคัดเลือกพันธุ์นี้ถูกสร้างขึ้นบนพื้นฐานของข้อมูล
ที่ได้รับจากคณะกรรมการอุตสาหกรรมสับปะรดมาเลเซีย เป็นพันธุ์ Josapine, Gandul, Yankee, MD2, MD2
(เนื้อเยื่อวัฒนธรรม), มอร์ริส Bentanggur มอร์ริส Gajah, N36 และซาราวักสีเขียวท้องถิ่น ตามที่พวกเขาเหล่านี้
9 สายพันธุ์สับปะรดมีมูลค่าการค้าของตัวเอง หนุ่มสาวและใบสดได้รับการคัดเลือกป้ายและเก็บไว้
ในถุงเก็บรักษาที่เหมาะสม.
2.2 การวิเคราะห์ดีเอ็นเอ
จีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจากวัตถุดิบสดใหม่โดยใช้ QIAGEN Dneasy โรงงานมินิชุดเล็กน้อยกับ
การปรับเปลี่ยน DNA ที่ได้ถูกเก็บไว้ในอุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสสำหรับการใช้งานในระยะยาว การขยายของภูมิภาค
ได้รับการดำเนินการโดยใช้คู่ไพรเมอร์และ AB101 AB102, ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ตามลำดับดังแสดงใน
รูปที่ 1 แต่ละปฏิกิริยารวม 5 ไมโครลิตร 10x มาตรฐาน Taq ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ 1 ไมโครลิตรละ 10 ไมครอนไปข้างหน้าและ
ย้อนกลับไพรเมอร์ 1 ไมโครลิตรของ dNTPs, 39.75 deionized น้ำหมันไมโครลิตร, 0.25 ไมโครลิตรโพลิเมอร์ Taq DNA และ 2 ไมโครลิตร
แม่แบบดีเอ็นเอ รวมถึงรายละเอียดวิธี PCR 1 รอบ predenaturation ที่ 94oC เป็นเวลา 2 นาที 30 รอบของการ
สูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 94oC 50 วินาที 50oC หลอม 1 นาที 72oC ส่วนขยายสำหรับ 7 นาทีและสุดท้าย
ส่วนขยายที่ 72oC เป็นเวลา 7 นาที สินค้าที่ได้รับการมองเห็น PCR 0.8% ของข่าวคราว agarose.
ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโคลนเข้า pGEM-T ง่าย (Promega) และกลายเป็นเซลล์ NEB5 อำนาจ.
สกัดพลาสมิดได้ดำเนินการโดย QIAmp ปั่น miniprep ต่อไปนี้การเรียนการสอนของผู้ผลิต ข้อ จำกัด
การย่อยอาหารเอนไซม์ได้ดำเนินการโดยใช้ EcoRI ส่วนผสมย่อยอาหารถูกจัดทำขึ้นก่อนที่นอกเหนือจากข้อ จำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . การคัดเลือกพันธุ์และสุ่ม
ทั้งหมด 9 พันธุ์สับปะรด ได้รวบรวม การคัดเลือกพันธุ์นี้ถูกสร้างขึ้นมาจากข้อมูลที่ได้รับจากคณะกรรมการอุตสาหกรรมสับปะรด
มาเลเซีย พันธุ์เป็น josapine gandul แยงกี้ md2 , , , , md2
( เพาะเนื้อเยื่อ ) , มอร์ริส bentanggur มอร์ริสช้าง , n36 และซาราวักสีเขียวท้องถิ่น ตามที่พวกเขา , เหล่านี้
9 สับปะรดพันธุ์มีมูลค่าเชิงพาณิชย์ของตนเอง ใบอ่อนและสดถูก labelled และเก็บไว้ในถุงกระเป๋าที่เหมาะสม
.
2.2 . การวิเคราะห์ดีเอ็นเอจีโนมดีเอ็นเอจาก
วัสดุสดที่ใช้ dneasy มินิเพิ่มพืชชุดกับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย

ดีเอ็นเอที่ได้ถูกเก็บไว้ใน 20oc สำหรับการใช้งานในระยะยาว การเพิ่มปริมาณของของเขต
มีการใช้ไพรเมอร์คู่ ab101 ab102 ไปข้างหน้าและย้อนกลับ ไพรเมอร์ตามลำดับดังแสดงในรูปที่ 1
. แต่ละปฏิกิริยารวม 5 μผม 10x มาตรฐานแท็กปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ 1 μลิตรละ 10 μ M
ย้อนกลับไปข้างหน้าและไพรเมอร์ 1 μ l dntps 39.75 μ , ผมเป็นหมันคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ 0.25 ลิตร ทัคμ DNA polymerase และ 2 μ L
แม่แบบ genomic DNAการตรวจรายละเอียดรวมถึง 1 รอบ predenaturation ที่ 94oc 2 นาที 30 รอบ
( ที่ 94oc 50 วินาที annealing 50oc เป็นเวลา 1 นาที ส่งเสริม 72oc 7 นาที และส่งเสริม 72oc สุดท้าย
ที่ 7 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกมองเห็นโดย 0.8% ของกาโรสเจล ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูก pgem-t
โคลนเข้าง่าย ( promega ) และเปลี่ยนเป็นเซลล์ที่มีความสามารถ neb5 .
การสกัดพลาสมิดโดยการสอน miniprep qiamp ปั่นตามผู้ผลิตครับ เอนไซม์ย่อยอาหารจำกัด
ดำเนินการโดยใช้ชิ้นส่วน . ส่วนผสมอาหารจำกัด
นอกจากนี้เตรียมก่อน