Xylanase activity was assayed using the method described by
Bailey et al. [19,20], and the reaction was stopped by DNS. Briefly,
50 l of diluted enzyme and 50 l of substrate were incubated at
the indicated temperatures for 10 min. The enzyme reaction was
terminated by adding 100-l DNS and heating at 95 ◦C for 10 min.
The absorbance at 540 nm was measured using a Multiskan Spectrum
spectrophotometer (Thermo Scientific, Finland). The amount
of reducing sugar liberated was determined by the DNS method
using xylose as the standard [21]. One unit of xylanase activity was
defined as the amount of enzyme that produced 1 mol of xylose
per min.
The thermostability and activity of the xylanase enzymes were
assessed at various pH values and temperatures. To determine the
optimal pH, the purified enzyme was assayed at pH values ranging
from 3.0 to 10.0 in the following buffers (100 mM): acetic acid (pH
3.0–6.0), sodium phosphate (pH 6.0–8.0), Tris–HCl(pH 8.0–9.0) and
Gly-NaOH (pH 9.0–10.0) [22]. The optimal temperature was determined
by incubating the purified enzyme at temperatures ranging
from 40 to 75 ◦C in 100 mM sodium–phosphate buffer (pH 7.0). To
determine the thermostability, purified enzyme was incubated in
sodium phosphate buffer (pH 7.0) at different temperatures for
various times. The residual activity was measured and compared
with the enzyme activity at pH 7.0 (sodium phosphate buffer) and
55 ◦C, which was considered to be 100% activity [23]. The kinetic
parameters were determined according to the Lineweaver–Burk
method.
2.
กิจกรรมของไซลาเนสถูก assayed โดยใช้วิธีการที่อธิบายโดย
Bailey et al . [ 19,20 ] , และปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดย DNS สั้น ๆ ,
50 ลิตร 50 ลิตร ( เอนไซม์เจือจางและอุณหภูมิ
เป็นเวลา 10 นาที ) อุณหภูมิของปฏิกิริยาคือ
ยกเลิกโดยเพิ่ม DNS 100-l และความร้อนที่ 95 ◦ C 10 นาที
น 540 nm ซึ่งวัดโดยใช้ multiskan
สเปกตรัมวัสดุ ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , ฟินแลนด์ ปริมาณการปลดปล่อยน้ำตาล
ถูกกำหนดโดย DNS โดยใช้วิธี
6 เป็นมาตรฐาน [ 21 ] หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์คือ
หมายถึงจํานวน เอนไซม์ที่ผลิต 1 โมลต่อนาที 6
และทดล กิจกรรมของเอนไซม์ไซลาเนสที่ค่า pH
ประเมินต่าง ๆ และอุณหภูมิ หา
pH ที่เหมาะสมเอนไซม์คือเอนไซม์ที่ค่า pH ตั้งแต่
จาก 3.0 ถึง 10.0 ในบัฟเฟอร์ต่อไปนี้ ( 100 มม. ) : กรด ( pH
3.0 – 6.0 ) , โซเดียมฟอสเฟต ( pH 6.0 - 8.0 ) , ทริส– HCl ( pH 8.0 และ 9.0 และ GLY NaOH )
( พีเอช 9.0 – 10.0 ) [ 22 ] . อุณหภูมิที่เหมาะสมคือมุ่งมั่น
โดยการแช่เอนไซม์ที่อุณหภูมิตั้งแต่
จาก 40 75 ◦ C 100 มิลลิเมตรโซเดียมและฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 )
ศึกษาทดลบริสุทธิ์เอนไซม์ )
โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) ที่อุณหภูมิแตกต่างกัน
ครั้งต่างๆ กิจกรรมที่เหลือคือวัดและเปรียบเทียบ
กับเอนไซม์ที่ pH 7.0 ( โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ )
55 ◦ C ซึ่งถือว่าเป็น 100% กิจกรรม [ 23 ] ค่าพารามิเตอร์จลน์
ตัดสินใจไปตามไลน์วีเวอร์–วิธีเบิร์ก
.
2
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)