2.4. Aggregation propensityThe aggr

2.4. Aggregation propensity
The aggregation propensity of MNEI and Y65R was assessed by
incubating protein aliquots in 100 mM ammonium acetate buffer,
pH 5.1 or in 100 mM phosphate buffer at pH 6.8. The protein samples,
all at a concentration of 0.5 mg  ml1, were incubated at different
temperatures for times ranging from 2 to 24 h. At the time
indicated aliquots of 20 ll were withdrawn for the control, while
the remaining part of the sample was centrifuged at 13.000 rpm
for 3 min, to separate the supernatant from the pellet, which was
suspended in 100 ll of loading buffer. Identical volumes (20 ll)
of supernatant and precipitate were then loaded on the same gel,
to evaluate protein solubility and tendency to form sodium dodecyl
sulphate (SDS) resistant aggregates. SDS polyacrylamide gel
electrophoresis (PAGE) was performed according to the Laemmli
protocol using 15% polyacrylamide gels. Gels were
stained with Coomassie Brilliant Blue R-250.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การรวมสิ่งสิ่งรวม MNEI และ Y65R ถูกประเมินโดยincubating aliquots โปรตีนในบัฟเฟอร์ acetate แอมโมเนีย 100 มม.pH 5.1 หรือ 100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.8 ตัวอย่างโปรตีนทั้งหมดที่ความเข้มข้นของ 0.5 mg ml 1 ถูก incubated ที่แตกต่างกันอุณหภูมิเวลาตั้งแต่ 2 ถึง 24 ชม ในขณะระบุ aliquots 20 จะถูกถอนตัว ในขณะที่ส่วนที่เหลือของตัวอย่างถูก centrifuged ที่ 13.000 rpmสำหรับ 3 นาที จากเม็ด supernatant ที่กันซึ่งเป็นหยุดชั่วคราวใน 100 จะของโหลดบัฟเฟอร์ ไดรฟ์ข้อมูลที่เหมือนกัน (20 ll)ของ supernatant และ precipitate ได้แล้วโหลดบนเจเดียวการประเมินแนวโน้มเพื่อ dodecyl โซเดียมและละลายโปรตีนรวมข้อมูลทนซัลเฟต (SDS) เจ polyacrylamide SDSทำตาม Laemmli electrophoresis (หน้า)โพรโทคอลที่ใช้ 15% polyacrylamide gels เจได้สีด้วย Coomassie Brilliant บลู R-250

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 นิสัยชอบการรวมนิสัยชอบการรวมตัวของ MNEI Y65R และได้รับการประเมินโดยฟักaliquots โปรตีนใน 100 มิลลิบัฟเฟอร์อะซิเตตแอมโมเนียมพีเอช5.1 หรือ 100 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.8 กลุ่มตัวอย่างโปรตีนทั้งหมดที่ความเข้มข้น 0.5 มก. หรือไม่? มล. 1 ได้รับการบ่มที่แตกต่างกันอุณหภูมิสำหรับเวลาตั้งแต่2-24 ชั่วโมง ในเวลาที่ระบุ aliquots 20 ll จะถูกถอนออกสำหรับการควบคุมในขณะที่ส่วนที่เหลือของกลุ่มตัวอย่างได้รับการหมุนเหวี่ยงที่13.000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา3 นาทีเพื่อแยกใสจากเม็ดซึ่งถูกระงับใน100 LL ของบัฟเฟอร์โหลด เล่มที่เหมือนกัน (20 LL) ของสารละลายและตะกอนถูกโหลดจากนั้นในการเจลเดียวกันในการประเมินการละลายโปรตีนและแนวโน้มที่จะฟอร์มโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต(SDS) มวลทน SDS polyacrylamide เจลอิเล็ก(หน้า) ได้ดำเนินการตามที่ Laemmli โปรโตคอลที่ใช้เจลอะคริเลต 15% เจลที่ถูกย้อมด้วยสีฟ้าสดใส Coomassie R-250

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การรวมกลุ่มของ mnei ความโน้มเอียงความเอนเอียง

y65r และประเมินโดยการแช่ในน้ำเฉยๆ โปรตีน 100 มิลอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.1
หรือ 100 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 . โปรตีนตัวอย่าง
ทั้งหมดที่ความเข้มข้น 0.5 มิลลิกรัมต่อ   1 ถูกบ่มที่อุณหภูมิแตกต่างกัน
สำหรับเวลาตั้งแต่ 2 ถึง 24 ชั่วโมง ณเวลา
พบเฉยๆ 20 จะถูกถอนเพื่อการควบคุมในขณะที่
ส่วนที่เหลือจำนวนไฟฟ้าที่ 13.000 รอบต่อนาที
3 นาทีเพื่อแยกนำจากเม็ดซึ่ง
แขวนลอยใน 100 จะโหลดบัฟเฟอร์ เล่มเหมือนกัน ( 20 จะตกตะกอน แล้วนำ
ของและโหลดบนเจลเดียวกัน
ประเมินการละลายโปรตีนและโซเดียมโดเดซิล
แนวโน้มรูปแบบซัลเฟต ( SDS ) ทนมวลรวม . SDS polyacrylamide gel electrophoresis
( หน้า ) ได้ปฏิบัติตามขั้นตอน laemmli
ใช้ 15% เจลอะคริลาไมด์ . เจลถูก
เปื้อนเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส