Germacrene C was found by GC-MS and

Germacrene C was found by GC-MS and NMR analysis to be the most abundant sesquiterpene in the leaf oil of Lycopersicon esculentum cv. VFNT Cherry, with lesser amounts of germacrene A, guaia-6,9-diene, germacrene B, β-caryophyllene, α-humulene, and germacrene D. Soluble enzyme preparations from leaves catalyzed the divalent metal ion-dependent cyclization of [1-3H]farnesyl diphosphate to these same sesquiterpene olefins, as determined by radio-GC. To obtain a germacrene synthase cDNA, a set of degenerate primers was constructed based on conserved amino acid sequences of related terpenoid cyclases. With cDNA prepared from leaf epidermis-enriched mRNA, these primers amplified a 767-bp fragment that was used as a hybridization probe to screen the cDNA library. Thirty-one clones were evaluated for functional expression of terpenoid cyclase activity in Escherichia coli by using labeled geranyl, farnesyl, and geranylgeranyl diphosphates as substrates. Nine cDNA isolates expressed sesquiterpene synthase activity, and GC-MS analysis of the products identified germacrene C with smaller amounts of germacrene A, B, and D. None of the expressed proteins was active with geranylgeranyl diphosphate; however, one truncated protein converted geranyl diphosphate to the monoterpene limonene. The cDNA inserts specify a deduced polypeptide of 548 amino acids (Mr = 64,114), and sequence comparison with other plant sesquiterpene cyclases indicates that germacrene C synthase most closely resembles cotton δ-cadinene synthase (50% identity).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Germacrene C ถูกพบโดย GC-MS และการวิเคราะห์ NMR จะเป็น sesquiterpene มากที่สุดในน้ำมันใบ Lycopersicon esculentum พันธุ์ VFNT เชอร์รี่ที่มีจำนวนน้อยกว่า germacrene, Guaia-6,9-diene, B germacrene, β-caryophyllene, α-humulene และ germacrene ดีที่ละลายน้ำได้เตรียมเอนไซม์จากใบเร่งปฏิกิริยาโลหะ divalent cyclization ไอออนขึ้นอยู่กับ [1- 3H] farnesyl เพทเหล่านี้โอเลฟิน sesquiterpene เดียวกันตามที่กำหนดโดยวิทยุ GC ที่จะได้รับยีนเทส germacrene, ชุดของไพรเมอร์เลวถูกสร้างขึ้นอยู่กับลำดับกรดอะมิโนอนุรักษ์ของ cyclases terpenoid ที่เกี่ยวข้อง ด้วยยีนที่เตรียมจาก mRNA ใบหนังกำพร้าที่อุดมด้วยไพรเมอร์เหล่านี้ขยายส่วน-767 bp ที่ถูกใช้เป็นโพรบพันธุ์ไปยังหน้าจอห้องสมุด cDNA สามสิบหนึ่งโคลนได้รับการประเมินสำหรับการแสดงออกการทำงานของเคลส terpenoid กิจกรรมในเชื้อ Escherichia coli โดยใช้ติดป้าย geranyl, farnesyl และ diphosphates geranylgeranyl เป็นสารตั้งต้น เก้า cDNA แยกแสดงกิจกรรม sesquiterpene เทสและการวิเคราะห์ GC-MS ของผลิตภัณฑ์ที่ระบุ germacrene C ที่มีขนาดเล็กจำนวนมาก germacrene A, B, และ D ไม่มีโปรตีนแสดงบทบาทกับ geranylgeranyl เพท; แต่หนึ่งในโปรตีนที่ถูกตัดทอนดัดแปลง geranyl เพทเพื่อ limonene monoterpene แทรกยีนระบุ polypeptide อนุมาน 548 ของกรดอะมิโน (นาย = 64,114) และลำดับเมื่อเทียบกับ cyclases sesquiterpene พืชอื่น ๆ แสดงให้เห็นว่าเทส germacrene ซีมากที่สุดใกล้เคียงกับผ้าฝ้ายเทสδ-cadinene (บัตรประจำตัว 50%)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

germacrene C ถูกพบโดย GC-MS และการวิเคราะห์ NMR เป็นเซสควิเทอร์ปีนชุกชุมที่สุดในใบ lycopersicon น้ำมันของมะเขือเทศพันธุ์ vfnt เชอร์รี่กับจํานวนน้อยกว่า germacrene , guaia-6,9-diene germacrene B , บีตา - caryophyllene , แอลฟา humulene และ germacrene Dละลายเอนไซม์ที่เตรียมจากใบเร่งไอออนโลหะขนาดขึ้นอยู่กับอัล [ 1-3h ] farnesyl พุ่งหลาวเหล่านี้เดียวกันเซสควิเทอร์ปีนส์ ตามที่กำหนดโดยวิทยุ GC . ได้รับ germacrene เทสยีน ชุดไพรเมอร์ถูกสร้างขึ้นบนพื้นฐานของการรักษาลำดับกรดอะมิโนที่เกี่ยวข้องกับเทอร์ปีนอยด์ cyclases . กับ cDNA ที่เตรียมจากใบของใบอุดม ,ไพรเมอร์เหล่านี้ขยาย 767 BP ที่จำเพาะที่ใช้เป็น probe แสดง cDNA probes ที่ห้องสมุด สามสิบหนึ่งโคลนมาศึกษาการทำงานของกิจกรรมการแสดงออก ไซเคลสเทอร์ปีนอยด์ใน Escherichia coli โดยใช้ป้าย geranyl farnesyl , และ geranylgeranyl ไดฟอ ฟตเป็นท แสดงกิจกรรมและเซสควิเทอร์ปีนเก้าเชื้อไอโซเลท ,และการวิเคราะห์ของผลิตภัณฑ์และระบุ germacrene C ปริมาณขนาดเล็กของ germacrene A B และ D . ไม่มีของแสดงออกโปรตีนที่ถูกใช้งานกับ geranylgeranyl พุ่งหลาว อย่างไรก็ตาม หนึ่งตัดโปรตีนแปลง geranyl พุ่งหลาวไป โมโนเทอร์ปีน ลิโมนิน วิธีแทรกระบุว่า โพลีเปปไทด์ของกรดอะมิโน 548 ( MR = 64114 )และลำดับการเปรียบเทียบกับ cyclases เซสควิเทอร์ปีนพืชอื่น ๆ พบว่า germacrene C และอย่างใกล้ชิดที่สุด คล้ายผ้าฝ้ายδ - คาดินีน synthase ( 50 ตัว )