MATERIALS AND METHODSPlant material

MATERIALS AND METHODS

Plant material and seed germination: Diploid sugar beet 436 and triploid IC genotypes provided by the Sugar Beet Seed Institute (SBSI), Karaj, Iran. To improve germination efficiency, seeds were etching in concentrated H2SO4 (95-97%) about 40 min for both genotypes with gentle stirring. Then, the seeds were rinsed with distilled water to remove sulphuric acid traces. Sterilization process was done with rinsing of seeds in 70% (v/v) EtOH for 2 min followed by sterilizing in 0.1% HgCl2 for 1 min. Final sterilization process was done with immersing of seeds in 20% commercial bleach containing 5.25% active sodium hypochlorite and 0.25 mL Tween 20, 100 mL-1 of solution about 25 min. Finally, the sterilized seeds washed 3 times using distilled sterilized water and dried on filter paper under laminar flow for about 12 h. Then, the sterilized seeds were cultured in glass cultural tubes containing 40 mL of Germination Medium (GM) a solidified compound of MS basal salts, B5 Vitamins (Gamborg et al., 1968), 3% (w/v) sucrose, 0.8% (w/v) agar-agar, 0.5 mg L-1 TIBA and 1 mg L-1 TDZ. The pH was adjusted to 5.75±0.05 with NaOH and HCl before adding agar. Germination medium was autoclaved for 20 min in 121°C at 15 lb sq-1. For primary seed germination the cultural tubes were kept in 21±2°C in dark condition 3 days. After 3 days, the tubes were transferred into incubator under 16:8 h light and darkness period and kept at the same temperature.

Explant preparation for callus induction: For callus induction, three types of explants including hypocotyl, cotyledon and leaf explants were chosen. Hypocotyl and cotyledon explants were excised from 12-14 day-old seedlings. The exact site of hypocotyl and cotyledon explants was shown in Fig. 1. The explants were cut into 3-4 mm in length for both cotyledon and hypocotyls. The leaf explants were taken from 30-35 day-old seedlings cultured in vitro while they had 4-5 true leaves. For excision of leaf explants into 5-6 mm in length, the main vein surrounded tissues shown in Fig. 2 were used as explant because this section has more meristematicsimilar cells than others sites.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการพืชวัตถุดิบ และเมล็ดการงอก: Diploid นทาน 436 และ triploid IC ศึกษาจีโนไทป์ให้โดยนทานเมล็ดสถาบัน (SBSI), Karaj อิหร่าน การเพิ่มประสิทธิภาพการงอก เมล็ดถูกแกะสลักในกำมะถันเข้มข้นกวน (95-97%) ประมาณ 40 นาทีการศึกษาจีโนไทป์ทั้งสองด้วยใจ แล้ว เมล็ดถูก rinsed ด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบร่องรอยกรดซัลฟุริก ทำกระบวนการฆ่าเชื้อ ด้วยการล้างของเมล็ดใน 70% (v/v) EtOH สำหรับ 2 นาทีตาม ด้วย sterilizing ใน 0.1% HgCl2 ใน 1 นาทีกระบวนการฆ่าเชื้อขั้นสุดท้ายทำกับแช่ของเมล็ด 20% ฟอกขาวค้าที่ 5.25% ใช้ฟอกและ 0.25 mL Tween 20, 100 mL-1 ของโซลูชันประมาณ 25 นาที สุดท้าย sterilized เมล็ดหิน 3 ครั้งใช้น้ำ sterilized กลั่น และแห้งบนกระดาษกรองภายใต้ laminar กระแสสำหรับประมาณ 12 h แล้ว เมล็ด sterilized มีอ่างในหลอดแก้วทางวัฒนธรรมที่ประกอบด้วย 40 mL ของการงอกปานกลาง (กรัม) ที่หล่อผสมเกลือโรค MS วิตามิน B5 (Gamborg et al., 1968), ซูโครส 3% (w/v) agar-agar 0.8% (w/v) 0.5 มิลลิกรัม TIBA L-1 และ 1 มิลลิกรัม TDZ L 1 PH มีการปรับปรุงการ 5.75±0.05 ด้วย NaOH และ HCl ก่อนเพิ่ม agar สื่อการงอก autoclaved สำหรับ 20 นาทีใน 121° C 15 ปอนด์ตร. 1 ได้ สำหรับหลักเมล็ดการงอก หลอดวัฒนธรรมถูกเก็บไว้ใน 21±2 ° C ในสภาพมืด 3 วัน หลังจาก 3 วัน หลอดถูกโอนเข้าบ่มเพาะวิสาหกิจภายใต้ h 16:8 ระยะแสงและความมืด และเก็บที่อุณหภูมิเดียวกันExplant เพื่อเหนี่ยวนำให้: สำหรับเหนี่ยวนำแคลลัส explants explants hypocotyl ต่อ และใบไม้รวมทั้งสามชนิดที่ถูกเลือก มี excised explants hypocotyl และต่อจากวันที่ 12-14-กล้าไม้เก่า ไซต์ที่แน่นอนของ hypocotyl และต่อ explants แสดงใน Fig. 1 Explants ถูกตัดเป็น 3-4 มม.ความยาวต่อและ hypocotyls Explants ใบที่ได้มาจากวันที่ 30-35-กล้าไม้เก่าอ่างในเครื่องในขณะที่พวกเขามีใบจริง 4-5 ตอนการผ่าตัดของ explants ใบเป็น 5-6 มม.ยาว เนื้อเยื่อหลอดเลือดดำหลักล้อมรอบแสดงใน Fig. 2 ถูกใช้เป็น explant เนื่องจากส่วนนี้เพิ่มเติม meristematicsimilar เซลล์ไซต์อื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการวัสดุอาคารและการงอกของเมล็ด: น้ำตาลหัวผักกาดซ้ำ 436 และยีน triploid IC จัดไว้ให้โดยเมล็ดพันธุ์ผักกาดน้ำตาลสถาบัน (SBSI) Karaj อิหร่าน เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการงอกของเมล็ดพันธุ์ที่ถูกแกะสลักในความเข้มข้น H2SO4 (95-97%) ประมาณ 40 นาทีทั้งสองสายพันธุ์กับกวนอ่อนโยน จากนั้นเมล็ดถูกล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบร่องรอยกรดกำมะถัน กระบวนการฆ่าเชื้อที่ได้รับการทำกับการล้างเมล็ดพันธุ์ใน 70% (v / v) EtOH เป็นเวลา 2 นาทีตามด้วยการฆ่าเชื้อใน HgCl2 0.1% เป็นเวลา 1 นาที กระบวนการฆ่าเชื้อรอบชิงชนะเลิศที่ได้กระทำกับแช่เมล็ดพันธุ์ใน 20% สารฟอกขาวในเชิงพาณิชย์ที่มีโซเดียมไฮโปคลอไรต์ใช้งาน 5.25% และ 0.25 มิลลิลิตร Tween 20, 100 มล-1 ของการแก้ปัญหาเกี่ยวกับ 25 นาที ในที่สุดเมล็ดฆ่าเชื้อล้าง 3 ครั้งโดยใช้ฆ่าเชื้อน้ำกลั่นและแห้งบนกระดาษกรองภายใต้การไหลประมาณ 12 ชั่วโมง จากนั้นเมล็ดฆ่าเชื้อที่ถูกเพาะเลี้ยงในหลอดวัฒนธรรมแก้วที่มี 40 มลงอกกลาง (จีเอ็ม) เป็นสารประกอบแข็งของ MS เกลือฐาน B5 วิตามิน (Gamborg et al., 1968), 3% (w / v) ซูโครส 0.8% (w / v) วุ้น, 0.5 มก. L-1 TIBA และ 1 มิลลิกรัม L-1 TDZ พีเอชที่ได้รับการปรับให้ 5.75 ± 0.05 ด้วย NaOH และ HCl ก่อนที่จะเพิ่มวุ้น กลางงอกถูกเบาเป็นเวลา 20 นาทีใน 121 ° C ที่£ 15 ตาราง-1 สำหรับการงอกของเมล็ดหลักท่อทางวัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ใน 21 ± 2 องศาเซลเซียสในสภาพมืด 3 วัน หลังจาก 3 วัน, หลอดที่ถูกโอนเข้ามาในศูนย์บ่มเพาะอายุต่ำกว่า 16: 8 ชั่วโมงแสงและช่วงเวลาที่มืดและเก็บไว้ที่อุณหภูมิเดียวกัน. เตรียม explant คำสำหรับการเหนี่ยวนำแคลลัส: สำหรับการเหนี่ยวนำแคลลัส, สามประเภทของชิ้นรวมทั้ง hypocotyl, ใบเลี้ยงใบและชิ้นส่วนได้รับการแต่งตั้ง hypocotyl และใบเลี้ยงชิ้นถูกตัด 12-14 วันต้นกล้าอายุ เว็บไซต์ที่แน่นอนของ hypocotyl และใบเลี้ยงชิ้นถูกนำมาแสดงในรูปที่ 1. ชิ้นส่วนที่ถูกตัดออกเป็น 3-4 มิลลิเมตรยาวทั้งใบเลี้ยงและ hypocotyls ใบชิ้นถูกนำต้นกล้า 30-35 วันเก่าเพาะเลี้ยงในหลอดทดลองในขณะที่พวกเขามีใบจริง 4-5 สำหรับการตัดออกจากชิ้นส่วนลงไปในใบ 5-6 มิลลิเมตรยาว, เส้นเลือดหลักล้อมรอบเนื้อเยื่อที่แสดงในรูป 2 ถูกนำมาใช้เป็นชิ้นส่วนนี้เพราะมีเซลล์ meristematicsimilar มากกว่าเว็บไซต์อื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ

วัสดุปลูกและเมล็ดงอก : การเกิดน้ำตาลและทริพลอยด์พันธุ์ IC โดยเมล็ดน้ำตาลสถาบัน ( sbsi ) , คาราจ อิหร่าน การเพิ่มประสิทธิภาพการงอกของเมล็ด เมล็ดถูกแกะสลักในกรดซัลฟิวริกเข้มข้น ( 95-97 % ) ประมาณ 40 นาที ทั้งพันธุ์กับอ่อนโยนปลุกเร้า แล้วเมล็ดพันธุ์ที่ถูกล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อลบร่องรอยของกรดซัลฟิว .กระบวนการฆ่าเชื้อเสร็จแล้ว ล้างเมล็ดใน 70 % ( v / v ) กลุ่ม 2 นาทีตามด้วยการฆ่าเชื้อใน 0.1% hgcl2 1 นาที สุดท้ายกระบวนการฆ่าเชื้อเสร็จแล้วแช่เมล็ดใน 20% พาณิชย์สารฟอกขาวที่มีร้อยละ 5.25 โซเดียมไฮโปคลอไรต์ปราดเปรียวและ 0.25 ml Tween 20 , 100 แน่นอน ประมาณ 25 นาที สุดท้ายของ โซลูชั่น ,โดยเมล็ดล้าง 3 ครั้งใช้น้ำกลั่นฆ่าเชื้อน้ำและแห้งบนกระดาษกรองภายใต้การไหลแบบราบเรียบประมาณ 12 ชั่วโมง จากนั้น ฆ่าเชื้อเมล็ดเพาะเลี้ยงในหลอดแก้วทางวัฒนธรรมที่มี 40 ml ที่มีขนาดกลาง ( GM ) เป็นสารประกอบของเกลือก้อน MS พื้นฐาน , B5 วิตามิน ( Gamborg et al . , 1968 ) , 3 ( w / v ) 0.5 , 0.8 % ( w / v ) วุ้น , 0.5 มิลลิกรัม L-1 อายุรเวทและ 1 มิลลิกรัม L-1 TDZ .ค่า pH คือปรับระดับด้วย NaOH และ HCl 5.75 ±ก่อนที่จะเพิ่มวุ้น การงอกของอาหารสังเคราะห์สำหรับ 20 นาทีใน 121 ° C ที่ sq-1 15 ปอนด์ . สำหรับการงอกของเมล็ด หลอด วัฒนธรรมถูก 21 ± 2 ° C ในสภาพมืด 3 วัน หลังจาก 3 วัน หลอดถูกย้ายเข้าไปในตู้ใต้ 16 : 8 H แสงและระยะเวลาที่มืดและเก็บไว้ที่อุณหภูมิเดียวกัน

การเตรียมชิ้นส่วนพืชชักนำ : ชักนำ , สามประเภทของอาหารรวมทั้งระบบเนื้อเยื่อใบเลี้ยงใบ , และเลือก ระบบเนื้อเยื่อใบเลี้ยง และถูกตัดจากต้นกล้าอายุ 12-14 วัน ที่เว็บไซต์ของระบบเนื้อเยื่อ และเมื่อถูกแสดงในรูปที่ 1 เนื้อเยื่อที่ถูกตัดออกไป 3-4 มม. ทั้งใบเลี้ยง และสาร .เนื้อเยื่อใบ นำมาจาก 30-35 วัน ต้นกล้าที่เพาะเลี้ยงในหลอดทดลอง ขณะที่เขาอายุได้ 4-5 จริงใบ สำหรับที่เลี้ยงใบเป็น 5-6 มม. ยาวเส้นเลือดหลักล้อมรอบด้วยเนื้อเยื่อที่แสดงในรูปที่ 2 ) มาใช้ต่อ เพราะส่วนนี้มีเซลล์ meristematicsimilar มากกว่าเว็บไซต์อื่น