5.5. Measurement of plant hormones

5.5. Measurement of plant hormones and intermediates
For each enzyme assay, accumulation of tZR (11), was analyzed with a LC-MS/MS system as described above on a reversed-phase column (COSMOSIL 5C18-MS-II Waters ϕ2.0 × 150 mm; Nacalai Tesque, Inc, Kyoto, Japan) at a flow rate of 0.2 ml/min in 0.1% AcOH in H2O with a linear gradient of MeOH (0% for 3 min, 0–70% for 13 min, and 70% for 5 min). The column temperature was 40 °C. Quantification was performed in the select ion recording mode. Monitored ions for tZR (11) were as follows: m/z 220 and 352 for tZR (11), and m/z 225 and 357 for [2H5]tZR (44).

To determine levels of endogenous hormone, including CKs, indole-3-acetic acid (28), ABA (23), and GA (33), whole seedlings (100 mg fresh weight) were frozen and crushed in a microcentrifuge tube, and then extracted using MeOH: HCO2H: H2O (15: 1:4, v/v). After pre-purification, the extracts were subjected to liquid chromatography–tandem mass chromatography (ACQUITY UPLC System/Quattro Premier XE, Waters) (Kojima et al., 2009).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5.5 การวัดของฮอร์โมนพืชและตัวกลาง
สำหรับแต่ละทดสอบเอนไซม์, การสะสมของ tzr (11) ได้รับการวิเคราะห์ด้วยระบบ LC-MS/MS ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในคอลัมน์เฟสตรงกันข้าม (cosmosil 5c18-MS-ii น้ำφ2.0× 150 มม. nacalai tesque, inc, เกียวโต, ญี่ปุ่น) ที่อัตราการไหล 0.2 มล. / นาทีใน 0.1% ใน acoh h2o ด้วยลาดเชิงเส้นของเมธานอล (0% เป็นเวลา 3 นาที, 0-70% เป็นเวลา 13 นาทีและ 70 % เป็นเวลา 5 นาที)คอลัมน์อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส ปริมาณได้ดำเนินการในโหมดบันทึกไอออนเลือก ไอออนตรวจสอบการ tzr (11) มีดังนี้ ม. / ซี 220 และ 352 เพื่อ tzr (11) และ ม. / ซี 225 และ 357 เพื่อ [2H5] tzr (44)

เพื่อตรวจสอบระดับของฮอร์โมนภายนอกรวมทั้ง CKS. , อินโดล-3-กรดอะซิติก (28), aba (23) และ ga (33)ต้นกล้าทั้งหมด (100 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักสด) มีแช่แข็งและบดใ​​นหลอด microcentrifuge แล้วสกัดโดยใช้เมธานอล: hco2h: h2o (15: 1:4 v / v) หลังจากก่อนการฟอกสารสกัดถูกยัดเยียดให้ของเหลวมวลโคโคควบคู่-(ระบบ Acquity UPLC / XE ชั้นนำควอทน้ำ) (โคจิ et al,. 2009)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5.5. ฮอร์โมนพืชและ intermediates วัด
สำหรับวิเคราะห์แต่ละเอนไซม์ สะสมของ tZR (11), ถูกวิเคราะห์ ด้วยระบบ LC-MS/MS เป็นข้างบนคอลัมน์ระยะย้อนกลับ (COSMOSIL 5C 18-MS-II เตอร์ส ϕ2.0 ×มม. 150 Nacalai Tesque, Inc เกียวโต ญี่ปุ่น) ที่อัตราการไหลของ 0.2 ml/min ใน 0.1% AcOH ใน H2O ด้วยการไล่ระดับสีแบบเส้นตรงของทานอ (0% ใน 3 นาที) 0–70% ใน 13 นาที และ 70% สำหรับ 5 นาที คอลัมน์อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส นับงานในโหมดการบันทึกเลือกไอออน ตรวจสอบประจุสำหรับ tZR (11) มีดังนี้: m/z 220 และ 352 tZR (11), และ tZR m/z 225 และ 357 สำหรับ [2H 5] (44) .

เพื่อกำหนดระดับของฮอร์โมน endogenous รวม CKs กรดอะซิอินโดล-3-ติก (28), ABA (23), และ GA (33), กล้าไม้ทั้งหมด (100 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักสด) ถูกแช่แข็งบดในหลอด microcentrifuge และจากนั้น แยกใช้ทานอ: HCO2H: H2O (15:1:4, v/v) หลังจากฟอกก่อน สารสกัดถูกต้องของเหลว chromatography–tandem chromatography มวล (XE ACQUITY UPLC ระบบ/Quattro พรีเมียร์ น้ำ) (มะ et al., 2009)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5.5 . การวัดของโรงงานผลิตฮอร์โมนและ intermediates
สำหรับแต่ละเอนไซม์สอบ,การสะสมของ tzr ( 11 ),เป็นวิเคราะห์ด้วย LC - MS / MS ระบบตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในที่พลิกกลับ. - เฟสคอลัมน์( cosmosil 5 C 18 - MS - II น้ำϕ 2.0 × 150 มม.; nacalai tesque , Inc ., Kyoto ,ญี่ปุ่น)ที่อัตราไหลของ 0.2 มล./นาทีใน 0.1% acoh ใน H 2 O พร้อมด้วยแนวยาวการไล่ระดับสีของ meoh ( 0% สำหรับ 3 นาที, 0 - 70% ของ 13 นาทีและ 70% เป็นเวลา 5 นาที)คอลัมน์ที่มี อุณหภูมิ 40 ° C รุปธรรมได้ดำเนินการในโหมดการบันทึกเลือกไอออน ตรวจสอบเพิ่มพลังไอออนสำหรับ tzr ( 11 )มีดังนี้ม./ z 220 และ 352 สำหรับ tzr ( 11 )และม./ z 225 และ 357 สำหรับ[ 2 ] tzr H 5 ( 44 ).

เพื่อกำหนดระดับของฮอร์โมนเองในระยะยาวรวมถึง CKS , indole - 3 - กรดอะซิติกกรด( 28 ),รหัส ABA ( 23 )และ, GA ( 33 ),ต้นไม้แคระ(น้ำหนักสด 100 มก.)ถูกจับแช่แข็งและบดขยี้ในท่อดูดฝุ่น microcentrifuge แล้วถูกดึงมาใช้ meoh H hco 2 H 2 O ( 151 : 4 v / v ) หลังจากการทำน้ำบริสุทธิ์ที่มีสารสกัดจากสาหร่ายต้องตกอยู่ในน้ำ chromatography - ลง chromatography Mass ( acquity uplc quattro Premier XE ,ระบบ/น้ำ)( kojima et al . 2009 )