Standard Preparation: A standard st

Standard Preparation: A standard stock solution of The injection volume was 10µL for samples and streptomycin (100mg/100mL) was prepared by dissolving standards, which is injected to the column by auto the drug in Buffer. The concentration of standard was sampler. The separation was achieved using Column oven
1mg/ml solution was further diluted with mobile phase in L-2300 at 40°C and column Intersil ODS-3 C18 (GL same ratio to 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 0.2, 2.5 and 3.0µg/ml [25, 26]. Sciences Inc. Tokyo Japan 5um, 250×4.6 mm) and the All the solutions were refrigerated at 4°C and were detection wavelength was set at 240 nm. The UV brought to room temperature before use. absorbance of the effluent was scanned by UV Spectrophotometer (optima S-3000 Kyoto, Japan)
Sample Preparation: The sample solution was prepared over the range of 200-400nm and was obtained by
and analyzed in the same manner as a standard solution. measuring the absorption of 0.1µg/ml solution, The sample solution was prepared by adding of five prepared from stock solution. This showed a maximum standard solutions of vitamin-c to made concentrations absorbance on 240nm.
(1.0, 2.0, 3.0, 5.0 and 10.0 µg/ml) to a synthetic juice having
no Vitamin C. The fortification is usually made by spiking. RESULTS
These fortified samples were allowed to stand at 4°C for
24 h after spiking. LOD and LOQ: Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) of the assay method was determined.
Extraction of Vitamin-C: A volume of 5ml of juice were Results showed that the detection limit of Vitamin-C was mixed with 5 ml Mobile phase. The mixture was 0.05 mg/ml and was a good improvement of before centrifuged at 5,000 rpm for 5 min and filtered through reported methods. For measurement, consideration was PVDF Millipore filters (13 mm, 0.45 µm). 20ul sample given only when the first condition was satisfied for uploaded to HPLC for analysis of vitamin-C. All samples ascertaining the presence of target compound with a were extracted in triplicate. signal/noise ratio of 3 (S/N = 3). The LOQ calculated was
0.1mg/ml. So, LOQ was started from this concentration. Optimaization of Mobile Phase Composition: The mobile The LOQ was calculated on the basis of minimal accepted phase composition was optimized by different ratios. value of S/N =10.
The aqueous phase was composed of Potassium
dihydrogen orthophosphate and meta phosphoric acid Linearity: Intra-day and inter-day precision was buffer while the organic phase was methanol and determined by injecting 20µl six standard spiked acetonitrile. Many efforts were made on the adjustment of sample. (n = 6). The mean of the recorded peak area of the ratios of the components of mobile phases, pH, flow inter day and intra day is taken for calibration curve. rate and wavelength of UV absorbance. The best (Table 1) The peak areas which were automatically separation and recovery were made by using 20% measured by an integrator of HPLC instrument. The methanol with 80% buffer at pH 3.0±0.1 by 300nm calibration curve obtained by plotting peak area against wavelength [27]. concentration of the standard and spiked samples in (Graph 1) which showed linearity in accordance to Beer’s
Chromatography: The optimized mobile phase was a law over this range and the linearity equation was y =
methanol and Buffer. Pump A was adjusted at flow rate 10926x - 6445 for standard and y = 10825x + 1474 for
20% for Methanol while pump B at 80% flow rate for sample. The regression coefficient r2 were same. 9999(n=6) Buffer. The flow rate was set at 1 ml/min. [28, 29].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เตรียมสอบมาตรฐาน: แก้ไขปัญหาสินค้าคงคลังมาตรฐานของปริมาณฉีดได้ 10µL สำหรับตัวอย่างและ streptomycin (100mg / 100mL) ถูกเตรียม โดยยุบมาตรฐาน ซึ่งจะฉีดในคอลัมน์ โดยอัตโนมัติยาในบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของมาตรฐานเป็นแซมเพลอร์ ใช้เตาอบคอลัมน์แยกสำเร็จโซลูชั่น 1mg/ml ถูกผสมกับระยะเคลื่อนใน L-2300 ที่ 40° C และคอลัมน์ C18 Intersil ODS-3 เพิ่มเติม (GL อัตราส่วนเดียวกันที่ 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 0.2, 2.5 และ 3.0µg / ml [25, 26] วิทยาศาสตร์ Inc. โตเกียวญี่ปุ่น 5um, 250 × 4.6 mm) และโซลูชันทั้งหมดถูก refrigerated ที่ 4 ° C และได้มีการตั้งค่าตรวจหาความยาวคลื่นที่ 240 nm UV ที่มากับอุณหภูมิห้องก่อนใช้ absorbance ของน้ำถูกสแกน ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่าง UV (พติ S 3000 เกียวโต ญี่ปุ่น)การเตรียมตัวอย่าง: การแก้ปัญหาอย่างถูกเตรียมช่วง 200-400nm และกล่าวโดยและวิเคราะห์ในลักษณะเดียวกันเป็นสารละลายมาตรฐาน วัดการดูดซึม 0.1µg / ml โซลูชัน การแก้ปัญหาอย่างถูกเตรียม โดยเพิ่มห้าเตรียมจากโซลูชันหุ้น นี้แสดงโซลูชั่นมาตรฐานสูงสุดของวิตามินซีกับ absorbance ที่ความเข้มข้นที่ทำบน 240nm(1.0, 2.0, 3.0, 5.0 และ 10.0 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml) น้ำสังเคราะห์มีไม่มีวิตามินซี ระบบป้อมปราการที่เป็นมักจะทำ โดย spiking ผลลัพธ์ตัวอย่างธาตุเหล่านี้ได้รับอนุญาตให้ยืนอยู่ที่ 4° C สำหรับ24 ชมหลังจาก spiking ลอดและ LOQ: กำหนดขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) และจำนวนนับ (LOQ) ของวิธีการวิเคราะห์ผลลัพธ์ที่แสดงให้เห็นว่า จำนวนตรวจสอบวิตามินซีถูกผสม ด้วยระยะเคลื่อน 5 ml สกัดวิตามิน c: A ปริมาตร 5ml ของน้ำได้ ส่วนผสมคือ 0.05 mg/ml และได้ปรับปรุงดีของ centrifuged ที่ 5000 rpm สำหรับ 5 นาที และกรองผ่านวิธีการรายงาน สำหรับวัด พิจารณาถูกกรองมาก PVDF (13 mm, 0.45 µm) ตัวอย่าง 20ul ที่ให้เฉพาะ เมื่อเงื่อนไขแรกไม่พอสำหรับอัพโหลดไปยัง HPLC เพื่อการวิเคราะห์วิตามินซี ตัวอย่างทั้งหมดของเป้าหมายผสมกับ ascertaining ถูกสกัดใน triplicate 3 อัตราส่วนสัญญาณ/สัญญาณรบกวน (S/N = 3) LOQ ที่คำนวณได้0.1 mg/ml ดังนั้น LOQ เป็นจุดเริ่มต้นความเข้มข้นนี้ Optimaization ขององค์ประกอบของเฟสเคลื่อน: LOQ เคลื่อนถูกคำนวณน้อยยอมรับองค์ประกอบขั้นตอนถูกปรับตามอัตราส่วนที่แตกต่างกัน ค่าของ S/N = 10ระยะสเอาท์ประกอบด้วยโพแทสเซียมไฮโดรเจน orthophosphate และเมตาฟอสฟอริกกรดแบบดอกไม้: ความแม่นยำภายในวัน และระหว่างวันมีบัฟเฟอร์ขณะระยะอินทรีย์เมทานอล และตาม injecting 20µl หกมาตรฐานถูกแทง acetonitrile ในความพยายามในการปรับปรุงอย่าง (n = 6) ค่าเฉลี่ยของพื้นที่สูงสุดที่บันทึกไว้ของอัตราส่วนของส่วนประกอบของระยะเคลื่อน pH กระแสอินเตอร์วัน และวันอินทราจะได้รับการเทียบเส้นโค้ง ความยาวคลื่นของรังสียูวี absorbance และอัตรา สุด (ตารางที่ 1) พื้นที่สูงสุดที่ได้โดยอัตโนมัติแยกและการกู้คืนถูกทำโดย 20% วัดจากตัวการรวมเครื่องมือ HPLC เมทานอลกับ 80% บัฟเฟอร์ที่ pH 3.0±0.1 โดย 300nm เทียบโค้งรับตามพล็อตที่ตั้งสูงสุดเทียบกับความยาวคลื่น [27] ความเข้มข้นอย่างมาตรฐาน และถูกแทงใน (กราฟ 1) ซึ่งแสดงให้เห็นแบบดอกไม้ในกับเบียร์Chromatography: เฟสเคลื่อนที่ให้เหมาะถูกกฎหมายช่วงนี้ และแบบดอกไม้สมการเป็น y =เมทานอลและบัฟเฟอร์ ปั๊ม A ถูกปรับที่อัตราการไหล 10926 x - 6445 มาตรฐานและ y = 10825 x + 1474 สำหรับ20% สำหรับเมทานอลในขณะที่ปั๊ม B ที่อัตราการไหล 80% สำหรับตัวอย่าง R2 สัมประสิทธิ์ถดถอยเหมือนกัน 9999(n=6) บัฟเฟอร์ อัตราการไหลที่ได้ที่ 1 ml/นาที [28, 29]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มาตรฐานการเตรียมการแก้ปัญหาสต็อกมาตรฐานของการปริมาณการฉีดเป็น10μLสำหรับตัวอย่างและ streptomycin (100mg / 100mL) ถูกจัดทำขึ้นตามมาตรฐานการละลายซึ่งถูกฉีดคอลัมน์โดยอัตโนมัติยาเสพติดในบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของมาตรฐานเป็นตัวอย่าง แยกก็ประสบความสำเร็จโดยใช้คอลัมน์เตาอบ
1mg / แก้ปัญหามลถูกเจือจางต่อกับเฟสเคลื่อนที่ใน L-2300 ที่ 40 องศาเซลเซียสและคอลัมน์ Intersil ODS-3 C18 (อัตราส่วน GL เดียวกัน 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 0.2, 2.5 และ 3.0 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร [25 26]. วิทยาศาสตร์อิงค์โตเกียวญี่ปุ่น 5um 250 × 4.6 มม) และการแก้ปัญหาทั้งหมดได้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและถูกตรวจจับคลื่นตั้งอยู่ที่ 240 นาโนเมตร รังสียูวีนำที่อุณหภูมิห้องก่อนการใช้งาน การดูดกลืนแสงของน้ำเสียที่ถูกสแกนโดยรังสียูวี Spectrophotometer (Optima S-3000 เกียวโตญี่ปุ่น)
เตรียมสารตัวอย่าง: ตัวอย่างการแก้ปัญหาถูกจัดทำขึ้นในช่วงของ 200-400nm
และได้รับการที่ได้จากการวิเคราะห์ในลักษณะเดียวกับการแก้ปัญหามาตรฐาน การวัดการดูดซึมของ0.1μg / ml แก้ปัญหา, การแก้ปัญหาตัวอย่างถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่มห้าจัดทำขึ้นจากการแก้ปัญหาสต็อก นี้แสดงให้เห็นโซลูชั่นมาตรฐานสูงสุดของวิตามิน c เพื่อความเข้มข้นทำให้การดูดกลืนแสงใน 240nm.
(1.0, 2.0, 3.0, 5.0 และ 10.0 ไมโครกรัม / มล.)
เพื่อให้น้ำผลไม้สังเคราะห์ที่มีวิตามินซีไม่มีป้อมปราการมักจะทำโดยspiking ผลตัวอย่างเสริมเหล่านี้ได้รับอนุญาตให้อยู่ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงหลังจากองศา LOD และ LOQ: จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) และขีด จำกัด ของปริมาณ (LOQ) ของวิธีการทดสอบถูกกำหนด. สกัดวิตามิน C: ปริมาณ 5ml ของน้ำผลไม้ถูกพบว่าขีด จำกัด ของการตรวจสอบของวิตามินซีผสมกับ 5 มล. เฟสมือถือ ส่วนผสมที่เป็น 0.05 mg / ml และการปรับปรุงที่ดีของการหมุนเหวี่ยงก่อนที่ 5,000 รอบต่อนาทีในเวลา 5 นาทีและกรองด้วยวิธีการรายงาน สำหรับการตรวจวัดการพิจารณาเป็นตัวกรอง PVDF ค (13 มม 0.45 ไมครอน) ตัวอย่าง 20ul รับเฉพาะเมื่อเงื่อนไขแรกเป็นที่น่าพอใจสำหรับอัปโหลดไปยัง HPLC เพื่อการวิเคราะห์ของวิตามิน C- ตัวอย่างทั้งหมดสืบหาการปรากฏตัวของสารประกอบที่มีเป้าหมายสกัดในเพิ่มขึ้นสามเท่า อัตราส่วนสัญญาณเสียง / 3 (S / N = 3) LOQ คำนวณเป็น0.1mg / ml ดังนั้น LOQ เริ่มต้นจากความเข้มข้นนี้ Optimaization เฟสมือถือประกอบการมือถือ LOQ ที่คำนวณบนพื้นฐานขององค์ประกอบขั้นตอนน้อยที่สุดได้รับการยอมรับได้รับการเพิ่มประสิทธิภาพโดยอัตราส่วนที่แตกต่างกัน ค่าของ S / N = 10. ในช่วงน้ำประกอบด้วยโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนออร์โธฟอสเฟตและกรดฟอสฟเมตาเส้นตรง: ภายในวันและความแม่นยำระหว่างวันเป็นกันชนในขณะที่เฟสอินทรีย์เมทานอลและมุ่งมั่นโดยการฉีด20μlหกมาตรฐานถูกแทง acetonitrile ความพยายามของหลายคนทำในการปรับตัวของกลุ่มตัวอย่าง (n = 6) ค่าเฉลี่ยของการบันทึกพื้นที่จุดสูงสุดของอัตราส่วนของส่วนประกอบของขั้นตอนการมือถือ, ค่าความเป็นกรดไหลวันระหว่างวันและภายในเป็นที่สำหรับกราฟมาตรฐาน และอัตราการดูดกลืนแสงความยาวคลื่นของรังสียูวี ที่ดีที่สุด (ตารางที่ 1) พื้นที่สูงสุดที่มีการแยกโดยอัตโนมัติและการกู้คืนที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ 20% ที่วัดโดยบูรณาการของเครื่อง HPLC เมทานอล 80% บัฟเฟอร์ที่ pH 3.0 ± 0.1 จากกราฟมาตรฐาน 300Nm ที่ได้จากการวางแผนพื้นที่สูงสุดกับความยาวคลื่น [27] ความเข้มข้นของมาตรฐานและถูกแทงตัวอย่าง (กราฟ 1) ซึ่งแสดงให้เห็นเป็นเส้นตรงตามเบียร์โครมาโต: ในช่วงที่ดีที่สุดโทรศัพท์มือถือเป็นกฎหมายในช่วงนี้และสมการเชิงเส้นคือ Y = เมทานอลและบัฟเฟอร์ ปั๊มได้รับการปรับอัตราการไหล 10926x - 6445 มาตรฐานและ y = 10825x + 1474 สำหรับ20% เมทานอลในขณะที่ปั๊ม B ที่อัตราการไหล 80% สำหรับกลุ่มตัวอย่าง ค่าสัมประสิทธิ์การถดถอย r2 ได้เหมือนกัน 9999 (n = 6) บัฟเฟอร์ อัตราการไหลที่ถูกตั้งไว้ที่ 1 มล. / นาที [28 29]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมมาตรฐาน : โซลูชั่นสินค้ามาตรฐานของปริมาณการฉีดได้ 10 µ L สำหรับตัวอย่างและสเตร็ปโตมัยซิน ( 100 มก. / 100 มล. ) เตรียมโดยละลายมาตรฐาน ซึ่งจะฉีดให้คอลัมน์โดยอัตโนมัติ ยาในบัฟเฟอร์ ความเข้มข้นของมาตรฐานตัวอย่าง . การใช้ตู้อบคอลัมน์
สําเร็จ1mg / ml ในสารละลายเจือจางด้วยเฟสเคลื่อนที่ต่อไปใน l-2300 ที่ 40 ° C และคอลัมน์ นเตอร์ซิล ods-3 c18 ( GL อัตราส่วนเดียวกัน 0.1 , 0.5 , 1.0 , 1.5 , 2 , 2.5 และ 3.0 µ g / ml [ 25 , 26 ) วิทยาศาสตร์อิงค์ โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น 5um 250 × 4.6 มม. ) และโซลูชั่นทั้งหมด 4 ° C และมีตู้เย็นที่ความยาวคลื่นตรวจจับไว้ที่ 240 nm . UV ทำให้อุณหภูมิห้องก่อนที่จะใช้การดูดกลืนแสงของน้ำที่ถูกสแกนโดยเครื่องยูวี ( Optima s-3000 เกียวโต , ญี่ปุ่น )
การเตรียมสารตัวอย่าง : ตัวอย่างสารละลายที่เตรียมไว้ไปช่วง 200-400nm ได้มาจาก
และวิเคราะห์ในลักษณะเดียวกันเป็นโซลูชั่นที่ได้มาตรฐาน การวัดการดูดซึมของµ 0.1 g / ml สารละลาย , สารละลายตัวอย่างที่เตรียมโดยการเพิ่มของห้าที่เตรียมจากหุ้นโซลูชั่นนี้แสดงให้เห็นถึงมาตรฐานสูงสุดของวิตามินซีจะทำให้ความเข้มข้นของโซลูชั่นการดูดกลืนแสงใน 240nm .
( 1.0 , 2.0 , 3.0 , 5.0 และ 10.0 µกรัม / มิลลิลิตร ) น้ำสังเคราะห์มี
ไม่มีวิตามินซีเสริมมักจะทำโดยขึ้น ผลลัพธ์
เหล่านี้เสริมจำนวนอนุญาตให้ยืนที่ 4 ° C
24 ชั่วโมงหลังจากขึ้น และ LOD loq :ขีดจำกัดของการตรวจหา ( LOD ) และจำกัดปริมาณ ( loq ) ของการทดสอบวิธีการ ตัดสินใจ
การสกัดวิตามินซี : ปริมาณ 5ml ของน้ำผลไม้ ผลพบว่า ขีดจำกัดของวิตามินซีผสมกับ 5 ml เฟสเคลื่อนที่ . ส่วนผสมคือ mg / ml และทางที่ดีคือการปรับปรุงระดับที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีก่อน 5 นาที แล้วกรองผ่านรายงานวิธีการ สำหรับการวัดการพิจารณาคือ PVDF กระดาษกรองมิลลิพอร์ ( 13 มม. , 0.45 µ M ) 20ul ตัวอย่างให้เฉพาะเมื่อเงื่อนไขแรก คือ พอใจสำหรับการอัปโหลดไปยัง HPLC วิเคราะห์ vitamin-c. ทุกตัวอย่างสอบถามสถานะของเป้าหมาย ด้วยสารสกัดทั้งสามใบ อัตราส่วนสัญญาณ / เสียงรบกวนของ 3 ( S / N = 3 ) ที่คำนวณได้
0.1mg/ml loq ดังนั้น loq เริ่มจากสมาธินี้optimaization ของเฟสเคลื่อนที่ส่วนประกอบ : มือถือ loq ถูกคำนวณบนพื้นฐานขององค์ประกอบที่เหมาะสม จากระยะที่น้อยที่สุดที่ยอมรับได้ในอัตราส่วนที่แตกต่างกัน ค่าของ S / N = 10
เฟสสารละลายประกอบด้วยโพแทสเซียมฟอสเฟต dihydrogen
และ meta กรดฟอสฟอริค ถึง :วันภายในและระหว่างวันแน่นอน คือ บัฟเฟอร์ ในขณะที่ระยะอินทรีย์เป็นเมทานอล และกำหนดโดยการฉีด 20 µ L 6 มาตรฐาน spiked ไน . ความพยายามมากมายในการปรับตัวของตัวอย่าง ( n = 6 ) ค่าเฉลี่ยของพื้นที่บันทึกสูงสุดของอัตราส่วนขององค์ประกอบ ขั้นตอน , pH มือถือไหลระหว่างวัน และภายในวันถ่ายรูปโค้ง . คะแนนและความยาวคลื่นของการดูดกลืนแสงยูวีดีที่สุด ( ตารางที่ 1 ) ยอดพื้นที่ซึ่งแยกโดยอัตโนมัติและการกู้คืนที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ 20% วัดโดย HPLC ) ของเครื่องดนตรี เมทานอลกับบัฟเฟอร์ pH 3.0 ± 80% 0.1 โดย 300nm รูปโค้งได้โดยวางแผนพื้นที่กับความยาวคลื่นสูงสุด [ 27 ] ความเข้มข้นของมาตรฐานและถูกแทง ) ( กราฟที่ 1 ) ซึ่งพบเป็นเส้นตรงตามเบียร์
เทคนิค : ปรับเฟสเคลื่อนที่เป็นกฎหมายเฉพาะช่วงนี้ถึงสมการเป็น y =
เมทานอลและบัฟเฟอร์ ปั๊มปรับที่ 10926x - อัตราการไหล 6445 มาตรฐาน Y = 10825x แต่ด้วย
20 เปอร์เซ็นต์เมทานอลในขณะที่ปั๊ม B ที่ 80% อัตราการไหลสำหรับตัวอย่าง สัมประสิทธิ์ถดถอย R2 อยู่เหมือนกัน 9999 ( n = 6 ) กันชน อัตราการไหลเท่ากับ 1 มล. / นาที 28 [ 29 ]