For an initial screen one can use commercially available screens that exploit the sparse matrix incomplete factorial method of trial conditions.
The sparse matrix incomplete factorial method is biased by and selected from known crystallization conditions for macromolecules (Carter
and Carter, 1979; Cudney et al., 1994; Jancarik and Kim, 1991; Jancarik et al., 1991). If the crystallization condition is already known, a
narrow screen can be assembled, varying the precipitant concentration and pH around the original hit. The most commonly successful
precipitant is polyethylene glycol (PEG), followed by ammonium sulfate. Together, these two precipitants account for approximately 60% of all
recorded macromolecular precipitants used for crystallization (Gilliland et al., 1994; Kimber et al., 2003; Page et al., 2003).
2. Prepare your crystallization solutions. Usually these conditions are combined from a precipitating agent, salt of some kind and a buffer to set
the pH. In some cases additives may be added specifically for the protein of interest. All stock solution should be filtered using 0.22 μm filter.
Some of the stock solution might be very viscous (50% PEGs, glycerol, PEG-MME, etc ).
• Prepare 1.5 mL of 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 M NaCl each in 0.1 M NaOAc pH 4.0, 4.3, 4.6 and 4.9 (total of 24 solutions)
สำหรับหน้าจอการเริ่มต้น หนึ่งสามารถใช้ในเชิงพาณิชย์ที่มีหน้าจอที่เมทริกซ์เบาบางไม่สมบูรณ์แฟกทอเรียลวิธีการเงื่อนไขการทดลองลำเอียงโดยวิธีเมทริกซ์เบาบางแฟกทอเรียลที่สมบูรณ์ และเลือกจากเงื่อนไขรู้จักตกผลึกโมเลกุล (คาร์เตอร์และ คาร์เตอร์ 1979 Cudney et al. 1994 Jancarik และคิม 1991 Jancarik et al. 1991) ถ้าเงื่อนไขตกผลึกแล้ว การจอแคบสามารถประกอบติดตั้ง precipitant ความเข้มข้นและค่า pH ประมาณตีต้นฉบับที่แตกต่างกัน ประสบความสำเร็จมากที่สุดprecipitant คือ เอทิลีนไกลคอล (PEG), ตาม ด้วยแอมโมเนียซัลเฟต ด้วยกัน เหล่านี้ precipitants สองบัญชีประมาณ 60% ของทั้งหมดบันทึก macromolecular precipitants ใช้สำหรับการตกผลึก (Gilliland et al. 1994 Kimber et al. 2003 หน้า et al. 2003)2. เตรียมตกผลึกโซลูชันของคุณ โดยปกติรวมเงื่อนไขเหล่านี้จากตัวแทนการตกตะกอน เกลือบางชนิดและบัฟเฟอร์การตั้งค่าค่า pH ในบางกรณี อาจเพิ่มสารเติมแต่งสำหรับโปรตีนที่น่าสนใจโดยเฉพาะ โซลูชันทั้งหมดสต็อกควรกรองใช้กรอง 0.22 ไมครอนบางโซลูชันหุ้นอาจหนืดมาก (50% ครู กลีเซอรอล PEG-MME ฯลฯ)•เตรียม 1.5 mL ของ 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 M NaOAc M NaCl 0.1 ในแต่ละค่า pH 4.0, 4.3, 4.6 และ 4.9 (รวมของโซลูชั่น 24)
การแปล กรุณารอสักครู่..

สำหรับหน้าจอเริ่มต้นหนึ่งสามารถใช้หน้าจอใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ที่ใช้ประโยชน์จากเบาบางเมทริกซ์วิธีปัจจัยที่ไม่สมบูรณ์ของเงื่อนไขการพิจารณาคดี.
เบาบางเมทริกซ์วิธีปัจจัยที่ไม่สมบูรณ์จะลำเอียงโดยเลือกจากเงื่อนไขการตกผลึกที่รู้จักสำหรับโมเลกุล (คาร์เตอร์
และคาร์เตอร์ 1979; et al, Cudney 1994; Jancarik และคิม 1991; Jancarik, et al, 1991). ถ้าเงื่อนไขการตกผลึกเป็นที่รู้จักกันอยู่แล้วว่าเป็น
หน้าจอที่แคบสามารถประกอบแตกต่างกันความเข้มข้นของตะกอนและค่า pH รอบเดิมตี ที่ประสบความสำเร็จมากที่สุด
ใจเร็วด่วนคือ polyethylene glycol (PEG) ตามด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต ร่วมกันทั้งสองตะกอนที่บัญชีสำหรับประมาณ 60% ของทั้งหมด
ตะกอนโมเลกุลที่บันทึกไว้ใช้สำหรับการตกผลึก (กิลลิแลนด์ et al, 1994;.. Kimber et al, 2003;. หน้า, et al, 2003).
2 เตรียมความพร้อมการแก้ปัญหาการตกผลึกของคุณ โดยปกติเงื่อนไขเหล่านี้จะรวมกันจากตัวแทนวุ่นวายเกลือของบางชนิดและบัฟเฟอร์การตั้ง
ค่าความเป็นกรด ในบางกรณีสารเติมแต่งอาจจะเพิ่มเฉพาะสำหรับโปรตีนที่น่าสนใจ ทางออกหุ้นควรจะกรองโดยใช้ 0.22 ไมครอนกรอง.
บางส่วนของการแก้ปัญหาสต็อกอาจจะมีความหนืดมาก (50% หมุดกลีเซอรอล PEG-MME ฯลฯ ).
•เตรียม 1.5 มิลลิลิตร 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 M NaCl ในแต่ละ 0.1 M NaOAc ค่า pH 4.0, 4.3, 4.6 และ 4.9 (รวม 24 Solutions)
การแปล กรุณารอสักครู่..

สำหรับการเริ่มต้น หนึ่งหน้าจอสามารถใช้ในเชิงพาณิชย์ที่มีหน้าจอที่ใช้ประโยชน์จากเมทริกซ์มากเลขศูนย์ไม่สมบูรณ์แบบวิธีการเงื่อนไขการทดลองเมทริกซ์หร็อมแหร็มสมบูรณ์แบบวิธีการลำเอียง โดยคัดเลือกจากการตกผลึกและรู้จักสภาพโมเลกุล ( คาร์เตอร์และ คาร์เตอร์ , 1979 ; cudney et al . , 1994 ; jancarik และคิม , 1991 ; jancarik et al . , 1991 ) ถ้าเงื่อนไขการตกผลึกแล้วรู้จักหน้าจอแคบสามารถประกอบที่ความเข้มข้นสารตกตะกอนและ pH ประมาณเดิมตี ส่วนใหญ่มักประสบความสำเร็จความหุนหันพลันแล่นเป็น polyethylene glycol ( PEG ) ตามมาด้วยแอมโมเนียม ซัลเฟต ด้วยกัน สองคนนี้ precipitants บัญชีสำหรับประมาณ 60% ของทั้งหมดบันทึก precipitants macromolecular ใช้ผลึก ( กิลีแลนด์ et al . , 1994 ; Kimber et al . , 2003 ; หน้า et al . , 2003 )2 . เตรียมการแก้ไขของคุณ ปกติเงื่อนไขเหล่านี้จะรวมจากตัวแทนตกตะกอนเกลือบางชนิดและการตั้งค่าบัฟเฟอร์ค่า pH ในบางกรณีอาจจะเพิ่มสารอาหารโดยเฉพาะโปรตีนที่น่าสนใจ ทั้งหมดโซลูชั่นหุ้นควรจะกรองใช้ 0.22 μ M ตัวกรองบางส่วนของโซลูชั่นหุ้นอาจจะหนืดมาก ( หมุด 50% กลีเซอรอล peg-mme ฯลฯ )- เตรียมปริมาณ 1.5 0.6 , 0.8 , 1.0 , 1.2 , 1.4 , 1.6 M NaCl 0.1 M แต่ละ naoac pH 4.0 , 4.3 , 4.6 และ 4.7 ( รวม 24 โซลูชั่น )
การแปล กรุณารอสักครู่..
