- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Pierce et al. (2008) developed a me
Pierce et al. (2008) developed a method based on fungal biofilm
development. In their model, biofilms of medically-important
moulds and yeasts grown in a 96-well microtiter plate were subjected
to antifungal drugs. The tetrazolium salt was added to
measure the metabolic activities of cells within the biofilm. By this
method, the rate of biofilm formation was shown to be reproducible
and there were no statistical differences in replicate values of
the susceptibility tests.
Clausen and Yang (2011) optimized parameters for the XTT
microassay and demonstrated that the variability between fungal
species can be used to demonstrate the relative resistance of
different fungal species to several antifungal agents. Since isothiazolinone
is commonly used by the wood preservation industry
to inhibit mould growth on preservative treated wood, it was
selected as the model compound for this study to compare laboratory
mould resistance test methods.
The objectives of this study were 1) to compare the MIC90 for
isothiazolinone using the XTT assay with the MIC90 for two standardized
laboratory methods, 2) to verify XTT results with ATP
production, and 3) to assess fungicidal versus fungistatic activity of
isothiazolinone against mould spores using the XTT assay.
2. Materials and methods
2.1. XTT assay reagents
Growth medium supporting spore germination was RPMI 1640
medium (Moore et al., 1967) without sodium bicarbonate supplemented
with L-glutamine and buffered with 165 mM morpholinepropanesulfonic
(MOPS) acid, pH 7.0 (SigmaeAldrich, St. Louis,
MO) (Pierce et al., 2008). The tetrazolium salt, 2,3-bis(2-methoxy-
4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenyl-amino)carbonyl]-2H-tetrazolium
hydroxide (hereafter called XTT) (SigmaeAldrich) was diluted
in phosphate buffered saline, (PBS; 10 mM phosphate buffer,
2.7 mM potassium chloride, 137 mM sodium chloride, pH 7.4)
(SigmaeAldrich) to a concentration of 0.5 g l-1, filter-sterilized and
stored in 10 ml aliquots protected from light at 70 C. A 10 mM
stock of menadione (2-methyl-1,4 naphthoquinone) (Sigmae
Aldrich) was prepared in 100% acetone and stored in 50 ml
aliquots at 70 C. Isothiazolinone (SUPATIMBER H.E.14, supplied
by Viance, Charlotte, NC) served as the model mould inhibitor. Twofold
dilutions of isothiazolinone were prepared resulting in
concentrations ranging 0e800 ppm. Isothiazolinone was diluted in
RPMI for the XTT assay and in water for the American Wood
Protection Association Standards (AWPA) and American Society for
Testing Materials (ASTM) standardized test methods.
2.2. Spore inoculum
Mould fungi, Aspergillus niger 2.242 (provided by the University
of Virginia School of Medicine, Charlottesville, Virginia, USA),
Penicillium chrysogenum PH02 (provided by the USDA Forest
Products Laboratory, Madison, Wisconsin, USA) and Trichoderma
atroviride ATCC 20476 were maintained on 2% malt extract agar
(Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA) and stored at 5 C.
Individual isolates were grown on 2% malt extract agar in Petri
dishes and incubated at 27 C for two weeks. Two different spore
suspensions were prepared as described below:
For the XTT assay, spores from individual test fungi were
collected by flooding the surface of a two-week-old culture with
10 ml of sterile PBS plus 0.025% Tween-20. The resulting spore
suspension was removed via aspiration to a sterile container,
washed twice in sterile PBS and collected by centrifugation at
3000 g for 15 min each at 4 C. Spores suspended in RPMI 1640
were counted with a hemocytometer and further diluted in RPMI to
development. In their model, biofilms of medically-important
moulds and yeasts grown in a 96-well microtiter plate were subjected
to antifungal drugs. The tetrazolium salt was added to
measure the metabolic activities of cells within the biofilm. By this
method, the rate of biofilm formation was shown to be reproducible
and there were no statistical differences in replicate values of
the susceptibility tests.
Clausen and Yang (2011) optimized parameters for the XTT
microassay and demonstrated that the variability between fungal
species can be used to demonstrate the relative resistance of
different fungal species to several antifungal agents. Since isothiazolinone
is commonly used by the wood preservation industry
to inhibit mould growth on preservative treated wood, it was
selected as the model compound for this study to compare laboratory
mould resistance test methods.
The objectives of this study were 1) to compare the MIC90 for
isothiazolinone using the XTT assay with the MIC90 for two standardized
laboratory methods, 2) to verify XTT results with ATP
production, and 3) to assess fungicidal versus fungistatic activity of
isothiazolinone against mould spores using the XTT assay.
2. Materials and methods
2.1. XTT assay reagents
Growth medium supporting spore germination was RPMI 1640
medium (Moore et al., 1967) without sodium bicarbonate supplemented
with L-glutamine and buffered with 165 mM morpholinepropanesulfonic
(MOPS) acid, pH 7.0 (SigmaeAldrich, St. Louis,
MO) (Pierce et al., 2008). The tetrazolium salt, 2,3-bis(2-methoxy-
4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenyl-amino)carbonyl]-2H-tetrazolium
hydroxide (hereafter called XTT) (SigmaeAldrich) was diluted
in phosphate buffered saline, (PBS; 10 mM phosphate buffer,
2.7 mM potassium chloride, 137 mM sodium chloride, pH 7.4)
(SigmaeAldrich) to a concentration of 0.5 g l-1, filter-sterilized and
stored in 10 ml aliquots protected from light at 70 C. A 10 mM
stock of menadione (2-methyl-1,4 naphthoquinone) (Sigmae
Aldrich) was prepared in 100% acetone and stored in 50 ml
aliquots at 70 C. Isothiazolinone (SUPATIMBER H.E.14, supplied
by Viance, Charlotte, NC) served as the model mould inhibitor. Twofold
dilutions of isothiazolinone were prepared resulting in
concentrations ranging 0e800 ppm. Isothiazolinone was diluted in
RPMI for the XTT assay and in water for the American Wood
Protection Association Standards (AWPA) and American Society for
Testing Materials (ASTM) standardized test methods.
2.2. Spore inoculum
Mould fungi, Aspergillus niger 2.242 (provided by the University
of Virginia School of Medicine, Charlottesville, Virginia, USA),
Penicillium chrysogenum PH02 (provided by the USDA Forest
Products Laboratory, Madison, Wisconsin, USA) and Trichoderma
atroviride ATCC 20476 were maintained on 2% malt extract agar
(Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA) and stored at 5 C.
Individual isolates were grown on 2% malt extract agar in Petri
dishes and incubated at 27 C for two weeks. Two different spore
suspensions were prepared as described below:
For the XTT assay, spores from individual test fungi were
collected by flooding the surface of a two-week-old culture with
10 ml of sterile PBS plus 0.025% Tween-20. The resulting spore
suspension was removed via aspiration to a sterile container,
washed twice in sterile PBS and collected by centrifugation at
3000 g for 15 min each at 4 C. Spores suspended in RPMI 1640
were counted with a hemocytometer and further diluted in RPMI to
0/5000
เพียร์ซ et al. (2008) พัฒนาวิธีการขึ้นอยู่กับเชื้อรา biofilmการพัฒนา ในรูปแบบของพวกเขา biofilms ทางสำคัญแม่พิมพ์และ yeasts โตในจาน microtiter 96 ดีถูกต้องให้ยาต้านเชื้อรา มีเพิ่มเกลือ tetrazoliumวัดกิจกรรมเผาผลาญของเซลล์ภายใน biofilm โดยการนี้วิธี อัตราการก่อตัวของ biofilm ที่แสดงจะจำลองและมีไม่แตกต่างกันทางสถิติค่า replicateไก่ทดสอบClausen และยาง (2011) เพิ่มประสิทธิภาพพารามิเตอร์สำหรับ XTTmicroassay และสาธิตที่สำหรับความผันผวนระหว่างเชื้อราสามารถใช้ชนิดแสดงให้เห็นถึงความต้านทานที่ญาติของสายพันธุ์เชื้อราต่าง ๆ ไปหลายตัวแทนต้านเชื้อรา ตั้งแต่ isothiazolinoneโดยทั่วไปใช้ โดยอุตสาหกรรมไม้อนุรักษ์ยับยั้งการเจริญเติบโตของแม่พิมพ์บนไม้ preservative บำบัด มันเป็นเลือกเป็นแบบผสมสำหรับการศึกษานี้เพื่อเปรียบเทียบการปฏิบัติการแม่พิมพ์วิธีการทดสอบความต้านทานวัตถุประสงค์ของการศึกษา 1) เพื่อเปรียบเทียบ MIC90 สำหรับisothiazolinone ที่ใช้ทดสอบ XTT MIC90 ที่สองมาตรฐานห้องปฏิบัติการวิธีการ 2) เพื่อตรวจสอบผล XTT ATPผลิต และ 3) เพื่อประเมิน fungicidal กับกิจกรรม fungistatic ของเพาะเฟิร์น isothiazolinone กับแม่พิมพ์ที่ใช้ทดสอบ XTT2. วัสดุและวิธีการ2.1. XTT reagents วิเคราะห์เจริญเติบโตปานกลางสนับสนุนสปอร์การงอกมี RPMI 1640ปานกลาง (มัวร์ et al., 1967) โดยโซเดียมไบคาร์บอเนตเสริมมี L glutamine และ buffered ด้วย morpholinepropanesulfonic 165 มม.(MOPS) กรด ค่า pH 7.0 (SigmaeAldrich, St. LouisMO) (เพียร์ซ et al., 2008) Tetrazolium เกลือ 2,3-bis(2-methoxy-4-ไนโตร-5-sulfophenyl) -5-[(phenyl-amino) carbonyl] tetrazolium-2 Hไฮดรอกไซด์ (โดยเรียกว่า XTT) (SigmaeAldrich) ถูกทำให้เจือจางในน้ำเกลือฟอสเฟต buffered, (PBS; 10 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์2.7 มม.โพแทสเซียมคลอไรด์ โซเดียมคลอไรด์ 137 มม. ค่า pH 7.4)(SigmaeAldrich) กับความเข้มข้น 0.5 g l-1 กรอง-sterilized และใน 10 ml aliquots ป้องกันจากแสงสว่างค. 70 10 มม.หุ้นของ menadione (naphthoquinone 2-methyl-1,4) (SigmaeAldrich) ถูกเตรียมไว้ใน 100% อะซิโตน และเก็บไว้ใน 50 mlaliquots ที่ 70 C. Isothiazolinone (SUPATIMBER H.E.14 ที่มาโดย Viance ชาร์ลอตต์ NC) เป็นสารยับยั้งแบบจำลอง สองเท่าdilutions isothiazolinone ได้เตรียมการในความเข้มข้นตั้งแต่ 0e800 ppm Isothiazolinone ถูกยกเว้นในRPMI วิเคราะห์ XTT และน้ำสำหรับไม้อเมริกันมาตรฐานสมาคมการป้องกัน (AWPA) และสมาคมอเมริกันเพื่อทดสอบวัสดุ (ASTM) มาตรฐานวิธีการทดสอบ2.2. สปอร์ inoculumแม่พิมพ์เชื้อรา Aspergillus ไนเจอร์ 2.242 (โดยมหาวิทยาลัยของเวอร์จิเนียโรงเรียนแพทย์ Charlottesville เวอร์จิเนีย สหรัฐอเมริกา),Penicillium chrysogenum PH02 (ป่าจากโดยห้องปฏิบัติการผลิตภัณฑ์ เมดิสัน วิสคอนซิน สหรัฐอเมริกา) และ Trichodermaatroviride ATCC 20476 ได้อยู่ใน 2% มอลต์สกัด agar(ห้องปฏิบัติการ Difco ดีทรอยต์ มิชิแกน สหรัฐอเมริกา) และเก็บไว้ที่ค. 5แยกแต่ละถูกปลูกใน 2% มอลต์สกัด agar ใน Petriอาหาร และ incubated สำหรับสองสัปดาห์ที่ 27 C สปอร์ทั้งสองแตกต่างกันพักได้เตรียมไว้ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง:สำหรับทดสอบ XTT เพาะเฟิร์นจากแต่ละการทดสอบเชื้อราได้รวบรวม โดยพื้นผิวของวัฒนธรรมเก่าสองสัปดาห์กับน้ำท่วม10 ml ของ PBS กอซบวก 0.025% Tween-20 สปอร์ได้ระบบกันสะเทือนถูกเอาออกผ่านคอนเทนเนอร์ใส่ ความใฝ่ฝันล้างสองครั้ง ใน PBS กอซ และรวบรวม โดย centrifugation ที่3000 g สำหรับ 15 นาทีแต่ละที่ 4 C. เพาะเฟิร์นถูกระงับใน RPMI 1640นับได้ มี hemocytometer และต่อไปจะแตกออกใน RPMI
การแปล กรุณารอสักครู่..
Pierce et al. (2008) developed a method based on fungal biofilm
development. In their model, biofilms of medically-important
moulds and yeasts grown in a 96-well microtiter plate were subjected
to antifungal drugs. The tetrazolium salt was added to
measure the metabolic activities of cells within the biofilm. By this
method, the rate of biofilm formation was shown to be reproducible
and there were no statistical differences in replicate values of
the susceptibility tests.
Clausen and Yang (2011) optimized parameters for the XTT
microassay and demonstrated that the variability between fungal
species can be used to demonstrate the relative resistance of
different fungal species to several antifungal agents. Since isothiazolinone
is commonly used by the wood preservation industry
to inhibit mould growth on preservative treated wood, it was
selected as the model compound for this study to compare laboratory
mould resistance test methods.
The objectives of this study were 1) to compare the MIC90 for
isothiazolinone using the XTT assay with the MIC90 for two standardized
laboratory methods, 2) to verify XTT results with ATP
production, and 3) to assess fungicidal versus fungistatic activity of
isothiazolinone against mould spores using the XTT assay.
2. Materials and methods
2.1. XTT assay reagents
Growth medium supporting spore germination was RPMI 1640
medium (Moore et al., 1967) without sodium bicarbonate supplemented
with L-glutamine and buffered with 165 mM morpholinepropanesulfonic
(MOPS) acid, pH 7.0 (SigmaeAldrich, St. Louis,
MO) (Pierce et al., 2008). The tetrazolium salt, 2,3-bis(2-methoxy-
4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenyl-amino)carbonyl]-2H-tetrazolium
hydroxide (hereafter called XTT) (SigmaeAldrich) was diluted
in phosphate buffered saline, (PBS; 10 mM phosphate buffer,
2.7 mM potassium chloride, 137 mM sodium chloride, pH 7.4)
(SigmaeAldrich) to a concentration of 0.5 g l-1, filter-sterilized and
stored in 10 ml aliquots protected from light at 70 C. A 10 mM
stock of menadione (2-methyl-1,4 naphthoquinone) (Sigmae
Aldrich) was prepared in 100% acetone and stored in 50 ml
aliquots at 70 C. Isothiazolinone (SUPATIMBER H.E.14, supplied
by Viance, Charlotte, NC) served as the model mould inhibitor. Twofold
dilutions of isothiazolinone were prepared resulting in
concentrations ranging 0e800 ppm. Isothiazolinone was diluted in
RPMI for the XTT assay and in water for the American Wood
Protection Association Standards (AWPA) and American Society for
Testing Materials (ASTM) standardized test methods.
2.2. Spore inoculum
Mould fungi, Aspergillus niger 2.242 (provided by the University
of Virginia School of Medicine, Charlottesville, Virginia, USA),
Penicillium chrysogenum PH02 (provided by the USDA Forest
Products Laboratory, Madison, Wisconsin, USA) and Trichoderma
atroviride ATCC 20476 were maintained on 2% malt extract agar
(Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA) and stored at 5 C.
Individual isolates were grown on 2% malt extract agar in Petri
dishes and incubated at 27 C for two weeks. Two different spore
suspensions were prepared as described below:
For the XTT assay, spores from individual test fungi were
collected by flooding the surface of a two-week-old culture with
10 ml of sterile PBS plus 0.025% Tween-20. The resulting spore
suspension was removed via aspiration to a sterile container,
washed twice in sterile PBS and collected by centrifugation at
3000 g for 15 min each at 4 C. Spores suspended in RPMI 1640
were counted with a hemocytometer and further diluted in RPMI to
development. In their model, biofilms of medically-important
moulds and yeasts grown in a 96-well microtiter plate were subjected
to antifungal drugs. The tetrazolium salt was added to
measure the metabolic activities of cells within the biofilm. By this
method, the rate of biofilm formation was shown to be reproducible
and there were no statistical differences in replicate values of
the susceptibility tests.
Clausen and Yang (2011) optimized parameters for the XTT
microassay and demonstrated that the variability between fungal
species can be used to demonstrate the relative resistance of
different fungal species to several antifungal agents. Since isothiazolinone
is commonly used by the wood preservation industry
to inhibit mould growth on preservative treated wood, it was
selected as the model compound for this study to compare laboratory
mould resistance test methods.
The objectives of this study were 1) to compare the MIC90 for
isothiazolinone using the XTT assay with the MIC90 for two standardized
laboratory methods, 2) to verify XTT results with ATP
production, and 3) to assess fungicidal versus fungistatic activity of
isothiazolinone against mould spores using the XTT assay.
2. Materials and methods
2.1. XTT assay reagents
Growth medium supporting spore germination was RPMI 1640
medium (Moore et al., 1967) without sodium bicarbonate supplemented
with L-glutamine and buffered with 165 mM morpholinepropanesulfonic
(MOPS) acid, pH 7.0 (SigmaeAldrich, St. Louis,
MO) (Pierce et al., 2008). The tetrazolium salt, 2,3-bis(2-methoxy-
4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenyl-amino)carbonyl]-2H-tetrazolium
hydroxide (hereafter called XTT) (SigmaeAldrich) was diluted
in phosphate buffered saline, (PBS; 10 mM phosphate buffer,
2.7 mM potassium chloride, 137 mM sodium chloride, pH 7.4)
(SigmaeAldrich) to a concentration of 0.5 g l-1, filter-sterilized and
stored in 10 ml aliquots protected from light at 70 C. A 10 mM
stock of menadione (2-methyl-1,4 naphthoquinone) (Sigmae
Aldrich) was prepared in 100% acetone and stored in 50 ml
aliquots at 70 C. Isothiazolinone (SUPATIMBER H.E.14, supplied
by Viance, Charlotte, NC) served as the model mould inhibitor. Twofold
dilutions of isothiazolinone were prepared resulting in
concentrations ranging 0e800 ppm. Isothiazolinone was diluted in
RPMI for the XTT assay and in water for the American Wood
Protection Association Standards (AWPA) and American Society for
Testing Materials (ASTM) standardized test methods.
2.2. Spore inoculum
Mould fungi, Aspergillus niger 2.242 (provided by the University
of Virginia School of Medicine, Charlottesville, Virginia, USA),
Penicillium chrysogenum PH02 (provided by the USDA Forest
Products Laboratory, Madison, Wisconsin, USA) and Trichoderma
atroviride ATCC 20476 were maintained on 2% malt extract agar
(Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA) and stored at 5 C.
Individual isolates were grown on 2% malt extract agar in Petri
dishes and incubated at 27 C for two weeks. Two different spore
suspensions were prepared as described below:
For the XTT assay, spores from individual test fungi were
collected by flooding the surface of a two-week-old culture with
10 ml of sterile PBS plus 0.025% Tween-20. The resulting spore
suspension was removed via aspiration to a sterile container,
washed twice in sterile PBS and collected by centrifugation at
3000 g for 15 min each at 4 C. Spores suspended in RPMI 1640
were counted with a hemocytometer and further diluted in RPMI to
การแปล กรุณารอสักครู่..
เพียร์ซ et al . ( 2008 ) พัฒนาวิธีการพัฒนาตามฟิล์ม
รา ในรูปแบบของไบโอฟิล์มของแม่พิมพ์ที่สำคัญทางการแพทย์และยีสต์
โตในจาน 96 ดีไมโครถูก
ให้ยาต้านเชื้อรา . การ tetrazolium เกลือเพิ่ม
วัดกิจกรรมการเผาผลาญอาหารเซลล์ภายในฟิล์ม . โดยวิธีนี้
, อัตราการสร้างไบโอฟิล์มเป็น 10
เป็นและไม่มีความแตกต่างทางสถิติในการทดสอบความไวของเลียนแบบค่า
.
เคลาเซิ่นหยาง ( 2011 ) ปรับพารามิเตอร์สำหรับ xtt
microassay และแสดงให้เห็นว่าความผันแปรระหว่างเชื้อรา
ชนิดสามารถใช้เพื่อแสดงให้เห็นถึงความต้านทานของญาติ
ชนิดของเชื้อราที่แตกต่างกันหลายยาต้านเชื้อรา . ตั้งแต่ isothiazolinone
เป็นที่ใช้กันทั่วไปโดยไม้รักษาอุตสาหกรรม
ยับยั้งแม่พิมพ์ของสารกันบูดรักษาไม้ มัน
เลือกเป็นสารประกอบรูปแบบการศึกษานี้เพื่อเปรียบเทียบวิธีการทดสอบแม่พิมพ์ต้านทานห้องปฏิบัติการ
.
วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้ 1 ) เพื่อเปรียบเทียบ mic90 สำหรับ
isothiazolinone ใช้ xtt ) กับ mic90 สองวิธี ห้องปฏิบัติการมาตรฐาน
2 ) เพื่อยืนยันผลด้วย
xtt เอทีพีผลิต และ 3 ) เพื่อประเมิน fungistatic fungicidal กับกิจกรรม
isothiazolinone กับแม่พิมพ์สปอร์ใช้ xtt assay .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . xtt assay เพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตปานกลาง การงอกของสปอร์
RPMI 1640 เป็น
ขนาดกลาง ( Moore et al . , 1967 ) โดยโซเดียมไบคาร์บอเนตอาหาร
กับ 2 กับ 165 มม. และ Glutamine morpholinepropanesulfonic
( ไม้ถูพื้น ) กรด pH 70 ( sigmaealdrich เซนต์หลุยส์
โม ) ( แทง et al . , 2008 ) การ tetrazolium เกลือ 2,3-bis ( 2-methoxy -
4-nitro-5-sulfophenyl ) - 5 - [ ( เฟนิลคาร์บอนิลอะมิโน ) ] - 2h tetrazolium
โซดาไฟ ( ต่อจากนี้เรียก xtt ) ( sigmaealdrich ) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือเจือจาง
( PBS 10 mM ฟอสเฟต บัฟเฟอร์
2.7 มม. โพแทสเซียมคลอไรด์ , 137 มม. โซเดียมคลอไรด์พีเอช 7.4 )
( sigmaealdrich ) ความเข้มข้น 0.5 กรัม L-1 ,กรองและฆ่าเชื้อ
เก็บไว้ใน 10 ml เฉยๆป้องกันจากแสงที่ 70 C 10 mm
หุ้นของ menadione ( 2-methyl-1,4 แนพโทควิโนน ) ( sigmae
ดิช ) ถูกเตรียมใน 100% อะซิโตนและเก็บไว้ใน 50 ml
เฉยๆที่ 70 C isothiazolinone ( supatimber h.e.14 มา
โดย viance ชาร์ล็อต NC ) ทำหน้าที่เป็นแบบจำลองแม่พิมพ์ยับยั้ง . สองเท่า
วิธีการ isothiazolinone เตรียมส่งผล
ความเข้มข้นตั้งแต่ 0e800 ppm isothiazolinone เจือจางใน
RPMI สำหรับ xtt assay และในน้ำเพื่อป้องกันไม้
สมาคมมาตรฐานอเมริกา ( awpa ) และสมาคม
การทดสอบวัสดุอเมริกา ( ASTM ) วิธีการทดสอบมาตรฐาน .
2.2 . สปอร์ของเชื้อรา
เชื้อรา Aspergillus niger 2.242 ( จัดโดยมหาวิทยาลัย
ของโรงเรียนแพทย์เวอร์จิเนีย Charlottesville , Virginia , สหรัฐอเมริกา ) ,
ph02 Penicillium เก๊กฮวย ( โดย USDA ป่า
ผลิตภัณฑ์ในห้องปฏิบัติการ , Madison , Wisconsin , USA ) และเชื้อรา
atroviride ATCC 20476 ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 2% malt extract agar
( difco ห้องปฏิบัติการ , Detroit , Michigan , USA ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 5 C .
แต่ละไอโซเลทเติบโต 2% malt extract agar ใน Petri
อาหารและ บ่มที่อุณหภูมิ 27 องศาเซลเซียส เป็นเวลาสองสัปดาห์ ที่แตกต่างกันสองสปอร์
ช่วงล่างเตรียมตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง :
สำหรับ xtt ) สปอร์จากเชื้อราทดสอบแต่ละตัว
รวบรวมโดยน้ำท่วมพื้นผิวสองสัปดาห์เก่าวัฒนธรรมกับ
10 มิลลิลิตร PBS เป็นหมันบวก 0.025% tween-20 . ผลสปอร์
ช่วงล่างถูกลบออกผ่านทางที่มีภาชนะหมัน
ล้างสองครั้งใน PBS เป็นหมัน และเก็บรวบรวม โดยการปั่นเหวี่ยงที่
3000 G 15 นาทีละ 4 Cสปอร์แขวนลอยใน RPMI 1640
ถูกนับด้วย hemocytometer และเพิ่มเติมใน RPMI เพื่อเจือจาง
รา ในรูปแบบของไบโอฟิล์มของแม่พิมพ์ที่สำคัญทางการแพทย์และยีสต์
โตในจาน 96 ดีไมโครถูก
ให้ยาต้านเชื้อรา . การ tetrazolium เกลือเพิ่ม
วัดกิจกรรมการเผาผลาญอาหารเซลล์ภายในฟิล์ม . โดยวิธีนี้
, อัตราการสร้างไบโอฟิล์มเป็น 10
เป็นและไม่มีความแตกต่างทางสถิติในการทดสอบความไวของเลียนแบบค่า
.
เคลาเซิ่นหยาง ( 2011 ) ปรับพารามิเตอร์สำหรับ xtt
microassay และแสดงให้เห็นว่าความผันแปรระหว่างเชื้อรา
ชนิดสามารถใช้เพื่อแสดงให้เห็นถึงความต้านทานของญาติ
ชนิดของเชื้อราที่แตกต่างกันหลายยาต้านเชื้อรา . ตั้งแต่ isothiazolinone
เป็นที่ใช้กันทั่วไปโดยไม้รักษาอุตสาหกรรม
ยับยั้งแม่พิมพ์ของสารกันบูดรักษาไม้ มัน
เลือกเป็นสารประกอบรูปแบบการศึกษานี้เพื่อเปรียบเทียบวิธีการทดสอบแม่พิมพ์ต้านทานห้องปฏิบัติการ
.
วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้ 1 ) เพื่อเปรียบเทียบ mic90 สำหรับ
isothiazolinone ใช้ xtt ) กับ mic90 สองวิธี ห้องปฏิบัติการมาตรฐาน
2 ) เพื่อยืนยันผลด้วย
xtt เอทีพีผลิต และ 3 ) เพื่อประเมิน fungistatic fungicidal กับกิจกรรม
isothiazolinone กับแม่พิมพ์สปอร์ใช้ xtt assay .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . xtt assay เพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตปานกลาง การงอกของสปอร์
RPMI 1640 เป็น
ขนาดกลาง ( Moore et al . , 1967 ) โดยโซเดียมไบคาร์บอเนตอาหาร
กับ 2 กับ 165 มม. และ Glutamine morpholinepropanesulfonic
( ไม้ถูพื้น ) กรด pH 70 ( sigmaealdrich เซนต์หลุยส์
โม ) ( แทง et al . , 2008 ) การ tetrazolium เกลือ 2,3-bis ( 2-methoxy -
4-nitro-5-sulfophenyl ) - 5 - [ ( เฟนิลคาร์บอนิลอะมิโน ) ] - 2h tetrazolium
โซดาไฟ ( ต่อจากนี้เรียก xtt ) ( sigmaealdrich ) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือเจือจาง
( PBS 10 mM ฟอสเฟต บัฟเฟอร์
2.7 มม. โพแทสเซียมคลอไรด์ , 137 มม. โซเดียมคลอไรด์พีเอช 7.4 )
( sigmaealdrich ) ความเข้มข้น 0.5 กรัม L-1 ,กรองและฆ่าเชื้อ
เก็บไว้ใน 10 ml เฉยๆป้องกันจากแสงที่ 70 C 10 mm
หุ้นของ menadione ( 2-methyl-1,4 แนพโทควิโนน ) ( sigmae
ดิช ) ถูกเตรียมใน 100% อะซิโตนและเก็บไว้ใน 50 ml
เฉยๆที่ 70 C isothiazolinone ( supatimber h.e.14 มา
โดย viance ชาร์ล็อต NC ) ทำหน้าที่เป็นแบบจำลองแม่พิมพ์ยับยั้ง . สองเท่า
วิธีการ isothiazolinone เตรียมส่งผล
ความเข้มข้นตั้งแต่ 0e800 ppm isothiazolinone เจือจางใน
RPMI สำหรับ xtt assay และในน้ำเพื่อป้องกันไม้
สมาคมมาตรฐานอเมริกา ( awpa ) และสมาคม
การทดสอบวัสดุอเมริกา ( ASTM ) วิธีการทดสอบมาตรฐาน .
2.2 . สปอร์ของเชื้อรา
เชื้อรา Aspergillus niger 2.242 ( จัดโดยมหาวิทยาลัย
ของโรงเรียนแพทย์เวอร์จิเนีย Charlottesville , Virginia , สหรัฐอเมริกา ) ,
ph02 Penicillium เก๊กฮวย ( โดย USDA ป่า
ผลิตภัณฑ์ในห้องปฏิบัติการ , Madison , Wisconsin , USA ) และเชื้อรา
atroviride ATCC 20476 ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 2% malt extract agar
( difco ห้องปฏิบัติการ , Detroit , Michigan , USA ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 5 C .
แต่ละไอโซเลทเติบโต 2% malt extract agar ใน Petri
อาหารและ บ่มที่อุณหภูมิ 27 องศาเซลเซียส เป็นเวลาสองสัปดาห์ ที่แตกต่างกันสองสปอร์
ช่วงล่างเตรียมตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง :
สำหรับ xtt ) สปอร์จากเชื้อราทดสอบแต่ละตัว
รวบรวมโดยน้ำท่วมพื้นผิวสองสัปดาห์เก่าวัฒนธรรมกับ
10 มิลลิลิตร PBS เป็นหมันบวก 0.025% tween-20 . ผลสปอร์
ช่วงล่างถูกลบออกผ่านทางที่มีภาชนะหมัน
ล้างสองครั้งใน PBS เป็นหมัน และเก็บรวบรวม โดยการปั่นเหวี่ยงที่
3000 G 15 นาทีละ 4 Cสปอร์แขวนลอยใน RPMI 1640
ถูกนับด้วย hemocytometer และเพิ่มเติมใน RPMI เพื่อเจือจาง
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Thank you that you do not leave me.
- ฉันหวังว่าคุณจะรักฉัน เเละคิดถึงฉันเช่นก
- His heart was beating fast
- I-I'm not obligated to look out for her
- I'm not well
- So, we have looked at
- Take over
- ครูของฉันบอกว่าเรียนมากๆแล้วจะมีอนาคตที่
- The Titmus 2a Vision Screener is an inst
- Dear K. Brighde,We would like to Tell yo
- ผลลัพธ์ (ภาษาอังกฤษ) 2:I think I will go
- TOWN IS CITY THE HAS A LOF PEOPLE WHERE
- ฉันรักคุณมาก
- พุฒกุล
- Attentive with the ball.
- Though
- Control must be built around the concept
- đến
- ในขณะที่เพื่อนฉันกำลังสนุกกับการเล่นน้ำท
- Your gums will get numb in a few minutes
- Changesin total phenolic content that oc
- Banyak sgt contacts.. Maaf kalau terdele
- เป็นได้ทั้งสุข และทุกข์
- Its width varies between 6 and 12 km and
