Enumeration (required)If a sample t

Enumeration (required)
If a sample tests positive for L. monocytogenes, use a reserve portion of sample for enumeration. Current methods of enumeration are only presumptive for Listeria monocytogenes and some degree of further testing of isolated Listeria colonies is necessary. Conventional enumeration is described and alternative rapid methods are indicated. The proportion of presumptive isolates that are actually L. monocytogenes may be determined by conventional or rapid tests. Flexibility in choice of methods and adaptations of them is permitted but the observed count must be reported with 95% confidence limits, the method used named and any modifications indicated. The correction factor for converting the observed count to L. monocytogenes numbers must be reported as the whole number ratio of number of isolates identified as L. monocytogenes to the total numberof Listeria isolates tested.
All enumeration methods, including microscopic, colony and Most Probable Number (MPN) counts are fundamentally governed by the Poisson distribution law of infrequent events. This describes the distribution of Listeria among the arrays of compartments (tubes, wells, counting chamber squares, filter grid squares, and virtual squares on culture agar surfaces). Compartmentalization separates or delineates colony-forming units in the various methods. In general, the confidence limits (CLs) of these estimates are considered proportional to the square root of the observed count. [The tabulated CLs for MPN results are asymmetric about the mean because they are usually obtained with low numbers of tubes (3 or 5) near the dilution endpoint.] As the count increases its confidence limits, expressed as a percentage of the count, decrease. Thus, choosing among methods largely reduces to a consideration of material and labor expenses and to how inoculation manipulations for an optimal number of compartments can be reduced by techniques such as filtration, semi-automation and robotics.
Surveillance Enumeration. This is required for accumulating data on cell numbers of L. monocytogenes in regulatory samples that test positive for the pathogen. Contact Karen Jinneman if you are unable to enumerate the reserve portion of a positive sample in order to try to arrange for its enumeration. To estimate the degree of sample contamination by presumptive L. monocytogenes, quantify the initial enrichment broth, before starting incubation, by direct spread plate count on ALOA, BCM or equivalent differential agar. Also, use a 3 or more-tube/well MPN culture procedure on 1, 0.1, 0.01and 0.001-g samples in BLEB (30° C, 48 h, with or without pyruvate and without delayed addition of selective agents) followed by streaking on the chosen selective agar. If all the MPN tubes are Listeria positive, use reserve sample to repeat the MPN determination using an appropriate range of more dilute analytical portions, e.g. 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, and 10-8 g.
If selective agar plates are in short supply, an economic alternative to spreading dilution aliquots on individual selective agar plates is the drop plating method. Using a multi-channel pipette is well suited to this method. Decimally dilute 10 µl amounts of the contents of the enrichment containers in 90 µl amounts of TSBye in micro-titer plates with round-bottomed wells. Mix with a gentle circular motion of the micropipette tip before changing the tip for the next dilution. Carefully plate 10 µl of the dilutions as drops on plates of ALOA, BCM or equivalent agar. Let the droplets be absorbed before inverting the plates for incubation. Square plates are most convenient and efficient for this technique.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การแจงนับ (จำเป็น)ถ้าตัวอย่างทดสอบบวกสำหรับ L. monocytogenes ใช้ส่วนสำรองของตัวอย่างสำหรับการแจงนับ ปัจจุบันวิธีการแจงนับเป็นเพียง presumptive สำหรับออลิ monocytogenes และบางส่วนของการทดสอบแยกออลิอาณานิคมเพิ่มเติม จำเป็น อธิบายการแจงนับแบบเดิม และมีระบุวิธีอื่นอย่างรวดเร็ว สัดส่วนของ presumptive แยกที่จริง L. monocytogenes อาจถูกกำหนด โดยการทดสอบแบบเดิม หรืออย่างรวดเร็ว ความยืดหยุ่นในการเลือกวิธีและท้องของพวกเขาจะได้รับอนุญาต แต่ต้องรายงานการตรวจนับพบกับขีดจำกัดความเชื่อมั่น 95% วิธีการใช้การตั้งชื่อ และระบุการปรับเปลี่ยน ต้องรายงานตัวแก้ไขสำหรับการแปลงการตรวจนับพบ L. monocytogenes จำนวนเป็นอัตราส่วนจำนวนเต็มของจำนวนแยกระบุเป็น L. monocytogenes จะ numberof รวมออลิแยกทดสอบพื้นฐานแจงนับ วิธี รวมถึงกล้องจุลทรรศน์ อาณานิคม และจำนวนมากที่สุดน่าเป็นหมายเลข (บริษัทเอ็มพีเอ็น) เป็นไปตามกฎหมายการแจกแจงปัวซองของเหตุการณ์ไม่ นี้อธิบายการกระจายของออลิระหว่างอาร์เรย์ของช่อง (ท่อ บ่อ นับสี่เหลี่ยมหอการค้า ตัวกรองตารางสี่เหลี่ยม และสี่เหลี่ยมเสมือนบนผิวของ agar วัฒนธรรม) Compartmentalization แยก หรือ delineates หน่วยโคโลนีขึ้นรูปในวิธีต่าง ๆ ทั่วไป มั่นใจจำกัด (มหาชน) การประเมินเหล่านี้จะถือเป็นสัดส่วนกับค่ารากที่สองของการตรวจนับพบ [มหาชน tabulated สำหรับผลลัพธ์ของบริษัทเอ็มพีเอ็นมี asymmetric เกี่ยวกับค่าเฉลี่ยเนื่องจากพวกเขาจะมักจะได้รับ ด้วยหมายเลขต่ำสุดของท่อ (3 หรือ 5) ใกล้ปลายเจือจาง] เป็นจำนวนเพิ่มขึ้นของขีดจำกัดความเชื่อมั่น แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของการตรวจนับ ลด ดังนั้น เลือกระหว่างวิธีส่วนใหญ่ลดการพิจารณาค่าใช้จ่ายวัสดุ และแรงงาน และวิธีลด inoculation manipulations ภาพจำนวนช่องที่เหมาะสมได้โดยเทคนิคการกรอง กึ่งอัตโนมัติ และหุ่นเฝ้าระวังการแจงนับ กำหนดข้อมูลที่สะสมในเซลล์จำนวน L. monocytogenes ในระเบียบตัวอย่างที่ทดสอบค่าบวกสำหรับการศึกษา ติดต่อกะเหรี่ยง Jinneman ถ้าคุณไม่สามารถระบุส่วนสำรองของตัวอย่างบวกเพื่อพยายามจัดแจงนับของ การประเมินระดับการปนเปื้อนของตัวอย่าง โดย presumptive L. monocytogenes กำหนดปริมาณซุปขอเริ่มต้น ก่อนที่จะเริ่มบ่ม โดยนับจำนวนจานที่แพร่กระจายโดยตรง ALOA, BCM หรือ agar แตกต่างเทียบเท่า ใช้เป็น 3 หรือมากกว่าหลอด/ดีบริษัทเอ็มพีเอ็นวัฒนธรรมตอนบน 1, 0.1, 0.01and ตัวอย่าง 0.001 g ใน BLEB (30 ° C, h 48 มี หรือไม่ มี pyruvate และไม่ มีเพิ่มล่าช้าของงาน) ตาม streaking ใน agar เลือกท่าน ถ้าหลอดบริษัทเอ็มพีเอ็น ออลิบวก ตัวอย่างสำรองใช้ซ้ำกำหนดบริษัทเอ็มพีเอ็นเป็นช่วงที่เหมาะสมของการใช้ dilute วิเคราะห์ บางส่วน เช่น 10-4, 10-5, 10-6, 10-7 และ 10-8 gถ้าแผ่น agar เลือกในระยะสั้น อุปทาน ทางเลือกเศรษฐกิจแพร่กระจาย aliquots เจือจางใน agar เลือกแต่ละแผ่นจะหล่นชุบวิธี ใช้เปตต์หลายช่องเหมาะกับวิธีนี้ Decimally dilute 10 µl จำนวนเนื้อหาของคอนเทนเนอร์ขอใน 90 µl จำนวน TSBye ในแผ่นไมโคร titer มียนที่รอบบ่อ ผสมกับกลมอ่อนโยนของ micropipette เคล็ดลับก่อนที่จะเปลี่ยนคำแนะนำสำหรับเจือจางถัดไป อย่างแผ่น 10 µl ของ dilutions เป็นหยดบนจาน ALOA, BCM หรือ agar ที่เทียบเท่า ให้หยดหลงก่อนสีตรงกันข้ามแผ่นสำหรับคณะทันตแพทยศาสตร์ แผ่นสี่เหลี่ยมจะสะดวก และมีประสิทธิภาพมากที่สุดสำหรับเทคนิคนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแจงนับ ( ต้อง )
ถ้าตัวอย่างการทดสอบบวกสำหรับฉัน monocytogenes ใช้ในส่วนของตัวอย่างสำหรับการ . ในปัจจุบันวิธีของการเป็นเพียงความเป็นไปได้ สำหรับวงแหวนแวนอัลเลน และบางส่วนของเพิ่มเติมการทดสอบแยก Listeria อาณานิคมที่จําเป็น การแจกแจงปกติ ลักษณะและวิธีการอย่างรวดเร็วเป็นทางเลือกที่ระบุไว้สัดส่วนของเชื้อที่ให้ผลจริง . monocytogenes อาจถูกกำหนดโดยแบบทดสอบอย่างรวดเร็ว มีความยืดหยุ่นในการเลือกวิธี และการปรับตัวของพวกเขาจะได้รับอนุญาต แต่สังเกตนับจะต้องรายงานกับขีดจำกัดความเชื่อมั่น 95% , วิธีการตั้งชื่อและการปรับเปลี่ยนใด ๆที่ระบุไว้ ปัจจัยการแก้ไขเพื่อเปลี่ยนวิธีนับล.monocytogenes ตัวเลขจะต้องรายงานทั้งจำนวนอัตราส่วนของจำนวนเชื้อที่ระบุว่าเป็น L . monocytogenes ต่อ Listeria จำนวนรวมสายพันธุ์ทดสอบ
วิธีการแจกแจงทั้งหมดรวมถึงกล้องจุลทรรศน์อาณานิคมและน่าจะเป็นหมายเลข ( MPN ) นับภาระควบคุมโดยการแจกแจงปัวซงกฎหมายของเหตุการณ์ที่เกิดขึ้นไม่บ่อยนัก .นี้จะอธิบายถึงการกระจายของลิสทีเรีย ระหว่าง อาร์เรย์ของ ช่อง ( ท่อบ่อนับสี่เหลี่ยม , โรงกรองตารางสี่เหลี่ยมและสี่เหลี่ยมเสมือนจริงบนพื้นผิวต่างๆ วัฒนธรรม ) เรื่องการควบคุมอารมณ์ แยก หรืออธิบายอาณานิคมสร้างหน่วยในวิธีการต่าง ๆ โดยทั่วไปมั่นใจจำกัด ( CLS ) ของการประมาณการเหล่านี้จะถือว่าเป็นสัดส่วนกับรากที่สองของ 2 นับ [ tabulated CLS ผล MPN เป็นสมมาตรเกี่ยวกับหมายถึงเพราะพวกเขามักจะได้รับตัวเลขต่ำของหลอด ( 3 หรือ 5 ) ใกล้ ( endpoint ) เป็นการนับเพิ่มขีดจำกัดความเชื่อมั่นของมัน แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของจำนวนที่ลดลง ดังนั้นการเลือกระหว่างวิธีส่วนใหญ่ลดการพิจารณาค่าใช้จ่ายของวัสดุและแรงงานและวิธีการปลูกเชื้อ manipulations สำหรับจำนวนที่เหมาะสมของช่องที่สามารถลดลงได้โดยเทคนิค เช่น การกรอง ระบบอัตโนมัติ และกึ่งหุ่นยนต์
การเฝ้าระวัง . นี้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการสะสมข้อมูลเบอร์มือถือของ Lmonocytogenes ในการกำกับตัวอย่างที่ทดสอบบวกสำหรับเชื้อโรค ติดต่อคาเรน jinneman ถ้าคุณไม่สามารถระบุในส่วนของตัวอย่างที่ดีในการพยายามที่จะจัดเรียงของการแจกแจง การประเมินระดับการปนเปื้อนของตัวอย่าง โดยอาจจะเป็นไปได้ . monocytogenes ปริมาณน้ำซุป , การเริ่มต้น , ก่อนที่จะเริ่มระยะเวลาโดยตรงกระจายจานนับ aloa BCM หรือวุ้น , ค่าเทียบเท่า ยังใช้ 3 ตัวหรือมากกว่า / หลอด ดี เอ็ม พี เอ็น วัฒนธรรมตามขั้นตอนที่ 1 , 0.1 , ตัวอย่าง 0.01and 0.001-g ใน bleb ( 30 ° C , 48 ชั่วโมง , ไพรูเวทและโดยไม่ล่าช้าหรือไม่และตัวแทนที่เลือก ) ตามด้วย streaking ที่เลือกใช้วุ้น ถ้าหลอดทั้งหมด MPN มี Listeria บวกใช้ในการหาตัวอย่างซ้ำ เมื่อใช้ช่วงที่เหมาะสมมากขึ้นเจือส่วนวิเคราะห์ เช่น สามารถ 10-7 10-5 10-4 , , , , และ 10-8 G .
ถ้าแผ่นวุ้นที่เลือกอยู่ในการจัดหาสั้น ทางเลือกทางเศรษฐกิจการกระจายการเลือกอาหารในแต่ละจานอยู่เฉยๆปล่อยชุบโดยวิธี การใช้ปิเปตต์หลายช่องเหมาะกับวิธีนี้decimally เจือจาง 10 µ L ปริมาณเนื้อหาของการบรรจุ 90 µ L ปริมาณ tsbye ในแผ่นระดับไมโครรอบสุด เวลส์ ผสมกับวงกลมอ่อนโยนของไมโครปิเปตทิปก่อนเปลี่ยนเคล็ดลับสำหรับการถัดไป อย่างจาน 10 µ L ของเจือจางเป็นหยดบนแผ่น aloa BCM หรือเทียบเท่า , วุ้นให้หยดถูกดูดซึมก่อนที่จะกลับหัวจานสำหรับการบ่ม แผ่นสี่เหลี่ยมที่สะดวกที่สุดและมีประสิทธิภาพสำหรับเทคนิคนี้