Wild-type phage isolation. Wild-typ

Wild-type phage isolation. Wild-type phages were isolated using previously
described protocols (19, 23) with some variations. Wastewater samples were
collected from 14 different municipal wastewater treatment plants located
throughout Indiana. Samples were frozen at 20°C until processed. Thawed
samples (20 ml) were centrifuged (2,000  g for 10 min), and the supernatants
were filtered (0.2-m filters) and treated with chloroform (1:100). Filtered samples
were added to log-phase Salmonella enterica serovar Typhimurium in double-
strength tryptic soy broth (TSB; Difco, Sparks, MD) containing 50 g/ml
nalidixic acid and incubated at 37°C overnight with shaking. Overnight cultures
were centrifuged (1,000  g for 10 min), filtered (0.2-m filter), and treated with
chloroform (1:100). Serial 10-fold dilutions of the filtered samples (100 l) were
combined with 100 l of fresh log-phase S. Typhimurium, 67.5 l of 1 M CaCl2,
and 3 ml of nutrient agar (5%) overlay (containing 50 g/ml nalidixic acid). The
phage-overlay solution was then added to nutrient agar plates and incubated
overnight at 37°C. One isolate from each wastewater treatment plant (n  14)
was plaque purified three times, suspended in SM buffer (0.1 M NaCl, 1 mM
MgSO4, 0.2 M Tris [pH 7.5], 0.01% gelatin) containing 1% chloroform, and
stored at 80°C until further use.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชนิดป่า phage แยก Phages ชนิดป่าถูกแยกโดยใช้ก่อนหน้านี้กล่าวถึงโพรโทคอล (19, 23) ด้วยรูปแบบบาง ตัวอย่างน้ำทิ้งได้รวบรวมจากโรงบำบัดน้ำเสียเทศบาลต่าง ๆ 14 แห่งอินดีแอนาตลอด ตัวอย่างถูกแช่แข็งที่ 20° C จนกว่าการประมวลผล Thawedตัวอย่าง (20 มล.) ถูก centrifuged (2000 กรัมสำหรับ 10 นาที), และ supernatantsมีกรอง (กรอง 0.2 m) และรักษา ด้วยคลอโรฟอร์ม (1: 100) กรองตัวอย่างจะ serovar enterica ซัลเฟสล็อก Typhimurium ในคู่ซุปถั่วเหลือง tryptic แรง (TSB Difco สปาร์ค MD) ประกอบด้วย 50 g/mlนาลิดิซิกกรด และ incubated ที่ 37° C ค้างคืนกับสั่น วัฒนธรรมที่ค้างคืนมี centrifuged (1000 กรัมสำหรับ 10 นาที), กรอง (กรอง 0.2 m), และรับคลอโรฟอร์ม (1: 100) มี dilutions 10-fold ประจำอย่างที่กรอง (100 ลิตร)กับเฟสล็อกสด s ได้ Typhimurium, 1 M CaCl2, 67.5 l 100 lและ 3 ml ของ agar ธาตุอาหาร (5%) ซ้อนทับ (ประกอบด้วยกรดนาลิดิซิก 50 g/ml) ที่ซ้อนทับ phage โซลูชันแล้วเพิ่มแผ่นธาตุอาหาร agar และ incubatedนอนที่ที่ 37 องศาเซลเซียส หนึ่งแยกจากแต่ละโรงบำบัดน้ำเสีย (n 14)มีหินปูนบริสุทธิ์สามครั้ง หยุดชั่วคราวในบัฟเฟอร์ SM (0.1 M NaCl, 1 มม.MgSO4 ตรี 0.2 M [pH 7.5], ตุ๋น 0.01%) ที่ประกอบด้วยคลอโรฟอร์ม 1% และเก็บที่ 80° C จนกระทั่งใช้ต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ป่าชนิดแยกทำลายจุลินทรีย์ phages ป่าชนิดที่แยกได้ก่อนหน้านี้โดยใช้
โปรโตคอลอธิบาย (19, 23) ด้วยรูปแบบบาง ตัวอย่างน้ำเสียที่ถูก
เก็บมาจากที่แตกต่างกัน 14 โรงบำบัดน้ำเสียเทศบาลตั้งอยู่
ทั่วรัฐอินเดียนา ตัวอย่างที่ถูกแช่แข็งที่ 20 ° C จนการประมวลผล ละลาย
ตัวอย่าง (20 มล.) ได้รับการหมุนเหวี่ยง (? 2,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที) และ supernatants
ถูกกรอง (0.2- เมตรกรอง?) และรับการรักษาด้วยคลอโรฟอร์ม (1: 100) ตัวอย่างกรอง
ที่ถูกเพิ่มเข้าสู่ระบบเฟส Salmonella enterica serovar Typhimurium ในสองครั้ง
ความแรงของน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB; Difco ประกาย, MD) ที่มี 50 g / ml
กรด nalidixic และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสค้างคืนกับสั่น วัฒนธรรมค้างคืน
ถูกหมุนเหวี่ยง (1,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที?) กรอง (0.2- กรอง m?) และรับการรักษาด้วย
คลอโรฟอร์ม (1: 100) อนุกรมเจือจาง 10 เท่าของกลุ่มตัวอย่างที่ผ่านการกรอง (100 ลิตร) ถูก
รวมกับ 100 ลิตรสดเข้าสู่ระบบเฟสเอส Typhimurium, 67.5? ลิตร 1 M CaCl2,
และ 3 มลสารอาหารวุ้น (5%) ซ้อนทับ (ที่มี 50? g / ml กรด nalidixic)
การแก้ปัญหาการทำลายจุลินทรีย์ซ้อนทับแล้วถูกบันทึกอยู่ในแผ่นวุ้นสารอาหารและบ่ม
ค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หนึ่งแยกจากกันระบบบำบัดน้ำเสีย (n? 14)
เป็นคราบจุลินทรีย์บริสุทธิ์สามครั้งที่ถูกระงับในบัฟเฟอร์เอสเอ็ม (0.1 M NaCl 1 มิลลิ
MgSO4 0.2 M Tris [พีเอช 7.5], เจลาติน 0.01%) ที่มีคลอโรฟอร์ม 1% และ
เก็บไว้ ที่? 80 องศาเซลเซียสจนใช้งานต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ประเภทการแยกป่าเฟจ . จประเภทป่าแยกใช้ก่อนหน้านี้
อธิบายโปรโตคอล ( 19 , 23 ) กับบางรูปแบบ น้ำเสียที่ใช้ในการทดลอง
เก็บจากที่แตกต่างกัน 14 เทศบาลบำบัดน้ำเสียอยู่
ตลอดอินเดียน่า จำนวน  20 ° C จนแช่แข็งแปรรูป ละลาย
ตัวอย่าง ( 20 มิลลิลิตร ) มีไฟฟ้า ( 2000  G 10 นาที ) และ supernatants
ถูกกรอง ( 02 -  M ตัวกรอง ) และรักษาด้วยคลอโรฟอร์ม ( 1 : 100 ) กรองตัวอย่าง
ถูกเพิ่มเข้าสู่ระบบระยะที่เชื้อ Salmonella enterica ซีโรวาร์สีชมพูคู่ -
พลังอาหารถั่วเหลืองซุป ( TSB ; difco , ประกายไฟ , MD ) บรรจุ 50  g / ml
กรดนาลิดิซิกบ่มที่ 37 ° C ค้างคืนกับสั่น ค้างคืนวัฒนธรรม
เป็นระดับ ( 1 , 000  G 10 นาที ) , กรอง ( 0.2 -  M กรอง ) และรักษาด้วย
คลอโรฟอร์ม ( 1 : 100 )หมายเลข 10 เท่าวิธีการกรองตัวอย่าง ( 100  L )
รวมกับ 100  l สด log phase S . typhimurium 67.5  ผม 1 m
3 มิลลิลิตรผลิตและ , NUMB3RS ( 5% ) ทับ ( บรรจุ 50  g / ml สะพานกรุงธน )
เฟจซ้อนทับในสารละลายแล้วเพิ่มแผ่นวุ้นสารอาหารและบ่มที่ 37 ° C
ค้างคืนหนึ่งแยกจากแต่ละโรงบำบัดน้ำเสีย ( N  14 )
คือ จุลินทรีย์บริสุทธิ์ สามครั้ง แขวนลอยใน SM บัฟเฟอร์ ( 0.1 M NaCl 1 mm
MgSO4 ใ , 0.2 เมตรโดย [ pH 7.5 ] 0.01 % เจลาติน ) ที่ประกอบด้วย 1% คลอโรฟอร์ม และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 80 องศา C
 จนกว่าจะใช้ต่อไป