- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2.3. Seed coatingPrior to seed coat
2.3. Seed coating
Prior to seed coating treatments being applied, seeds were
placed on sterile filter paper in 55 mm Petri dishes (10 seeds/dish)
and air dried in a laminar flow hood. Seeds were coated with either
a preparation of xanthan gum (Xan) (0.2%) or methylcellulose (MC)
(2%). Coatings were prepared by adding 5 mL of a 2 108 conidia/
mL 0.01% sterile aqueous Triton X-100 suspension to 20 mL of
coating to give a final concentration of 5 107 conidia per mL. Viability
of the conidia was assessed by spreading 100 lL of inoculum
over the surface of a Sabouraud dextrose agar (SDA) (Difco, NJ)
plate and incubating at 20 C. Germination was assessed after
18 h by putting one drop of lactophenol cotton blue (Merck, NJ)
onto the plate, overlaying with a coverslip and examining under
a microscope; three assessments were made on 100 randomly selected
conidia for each germination assessment (Goettel and Inglis,
1997). Viability was >90% for all batches of conidia used.
Control treatments were prepared for each fungus using the
same method but 5 mL of 0.01% Triton only was added to the xanthan
or methylcellulose coating. In total, six treatments were prepared;
1. F668 Xan, 2. F668 MC, 3. F647 Xan, 4. F647 MC, 5. Xan
Control (no fungi), 6. MC Control (no fungi).
Fifty gram batches of seed were placed in a rotating Erweka
(Heusenstamm, Germany) coating pan (45 angle, 200 rpm) and
25 mL of coating material applied via a spray gun at 4 bar pressure.
Where seeds started clumping, unheated forced air was applied
using a hairdryer to break clumps. After coating, seeds were removed
from the pan and placed onto trays until dry in appearance,
prior to packaging into TGT bags (Convex Plastic Limited, Hamilton,
NZ) (six bags per 50 g treatment). Bags were held at 20 C.
Spore loadings on the seeds were determined after preparation.
For each coating and fungus, 10 seeds were placed into 10 mL sterile
0.01% Triton X-100 in a sterile 20 mL plastic tube. Two replicate
tubes were prepared for each coating. Seeds were soaked for
30 mins to allow coatings to rehydrate before shaking the tubes
on a wrist shaker (Lab-Line, India) set at maximum for 10 mins. Serial
dilutions were then prepared and 100 lL aliquots plated onto a
semi selective agar medium, BSM (Beauveria selective medium:
quarter strength PDA containing 350 mg/L streptomycin sulfate,
50 mg/L tetracycline hydrochloride and 125 mg/L cycloheximide
(Sigma)). Two replicate plates were prepared for each dilution.
Plates were incubated at 20 C and colony forming units (cfu’s)
counted after 10 days.
The loadings for the MC treatments were 8.70 106 conidia per
seed for isolate F647, and 7.80 106 conidia per seed for isolate
F668. For the Xan treatments the loadings were 4.40 106 conidia
per seed for isolate F647 and 5.10 106 conidia per seed for isolate
F668.
The viability of the coated seeds was tested by placing 10 seeds
per treatment on filter paper moistened with sterile distilled water
in 55 mm diam Petri dishes which were placed in the dark at 20 C
for 2–3 weeks. Control seeds for both the MC and Xan treatments
had a germination rate of 81% and 88%, respectively. Seeds coated
with F647 MC had a 69% germination rate, F647 Xan had a 94% germination
rate, F668 MC had a 94% germination rate, and F668 Xan
had an 84% germination rate.
For each treatment, 30 seeds were sown to ensure that five
seedlings from each treatment were available for sampling at each
of the three sampling periods (see below). Seeds were individually
planted into South-Hort Garden Grow Compost (Southern Horticultural
Products Ltd., Christchurch, New Zealand) in multi-cell
trays and held in a greenhouse at 15 C in the dark until seeds began
to germinate. Once germinated, seedlings were allowed to
grow for 8 weeks before being individually transplanted into PB
1½ (approx. 0.9 L) planting bags (Egmont, NZ) containing the same
growing medium and were grown in a greenhouse at approximately
20 C. Seedlings were watered weekly for the remainder
of the trial.
At 2, 4 and 9 months after germination five seedlings from each
treatment were randomly chosen and destructively sampled as described
below.
Prior to seed coating treatments being applied, seeds were
placed on sterile filter paper in 55 mm Petri dishes (10 seeds/dish)
and air dried in a laminar flow hood. Seeds were coated with either
a preparation of xanthan gum (Xan) (0.2%) or methylcellulose (MC)
(2%). Coatings were prepared by adding 5 mL of a 2 108 conidia/
mL 0.01% sterile aqueous Triton X-100 suspension to 20 mL of
coating to give a final concentration of 5 107 conidia per mL. Viability
of the conidia was assessed by spreading 100 lL of inoculum
over the surface of a Sabouraud dextrose agar (SDA) (Difco, NJ)
plate and incubating at 20 C. Germination was assessed after
18 h by putting one drop of lactophenol cotton blue (Merck, NJ)
onto the plate, overlaying with a coverslip and examining under
a microscope; three assessments were made on 100 randomly selected
conidia for each germination assessment (Goettel and Inglis,
1997). Viability was >90% for all batches of conidia used.
Control treatments were prepared for each fungus using the
same method but 5 mL of 0.01% Triton only was added to the xanthan
or methylcellulose coating. In total, six treatments were prepared;
1. F668 Xan, 2. F668 MC, 3. F647 Xan, 4. F647 MC, 5. Xan
Control (no fungi), 6. MC Control (no fungi).
Fifty gram batches of seed were placed in a rotating Erweka
(Heusenstamm, Germany) coating pan (45 angle, 200 rpm) and
25 mL of coating material applied via a spray gun at 4 bar pressure.
Where seeds started clumping, unheated forced air was applied
using a hairdryer to break clumps. After coating, seeds were removed
from the pan and placed onto trays until dry in appearance,
prior to packaging into TGT bags (Convex Plastic Limited, Hamilton,
NZ) (six bags per 50 g treatment). Bags were held at 20 C.
Spore loadings on the seeds were determined after preparation.
For each coating and fungus, 10 seeds were placed into 10 mL sterile
0.01% Triton X-100 in a sterile 20 mL plastic tube. Two replicate
tubes were prepared for each coating. Seeds were soaked for
30 mins to allow coatings to rehydrate before shaking the tubes
on a wrist shaker (Lab-Line, India) set at maximum for 10 mins. Serial
dilutions were then prepared and 100 lL aliquots plated onto a
semi selective agar medium, BSM (Beauveria selective medium:
quarter strength PDA containing 350 mg/L streptomycin sulfate,
50 mg/L tetracycline hydrochloride and 125 mg/L cycloheximide
(Sigma)). Two replicate plates were prepared for each dilution.
Plates were incubated at 20 C and colony forming units (cfu’s)
counted after 10 days.
The loadings for the MC treatments were 8.70 106 conidia per
seed for isolate F647, and 7.80 106 conidia per seed for isolate
F668. For the Xan treatments the loadings were 4.40 106 conidia
per seed for isolate F647 and 5.10 106 conidia per seed for isolate
F668.
The viability of the coated seeds was tested by placing 10 seeds
per treatment on filter paper moistened with sterile distilled water
in 55 mm diam Petri dishes which were placed in the dark at 20 C
for 2–3 weeks. Control seeds for both the MC and Xan treatments
had a germination rate of 81% and 88%, respectively. Seeds coated
with F647 MC had a 69% germination rate, F647 Xan had a 94% germination
rate, F668 MC had a 94% germination rate, and F668 Xan
had an 84% germination rate.
For each treatment, 30 seeds were sown to ensure that five
seedlings from each treatment were available for sampling at each
of the three sampling periods (see below). Seeds were individually
planted into South-Hort Garden Grow Compost (Southern Horticultural
Products Ltd., Christchurch, New Zealand) in multi-cell
trays and held in a greenhouse at 15 C in the dark until seeds began
to germinate. Once germinated, seedlings were allowed to
grow for 8 weeks before being individually transplanted into PB
1½ (approx. 0.9 L) planting bags (Egmont, NZ) containing the same
growing medium and were grown in a greenhouse at approximately
20 C. Seedlings were watered weekly for the remainder
of the trial.
At 2, 4 and 9 months after germination five seedlings from each
treatment were randomly chosen and destructively sampled as described
below.
0/5000
2.3. เมล็ดเคลือบก่อนที่จะถูกนำไปใช้รักษาของเคลือบเมล็ดพันธุ์ เมล็ดพันธุ์ได้วางบนกระดาษกรองใส่ในจาน Petri 55 มม. (10 เมล็ด/จาน)และอากาศที่แห้งในฮูดกระแส laminar เมล็ดถูกเคลือบ ด้วยอย่างใดอย่างหนึ่งการเตรียมหมากฝรั่ง xanthan (Xan) (0.2%) หรือ methylcellulose (MC)(2%). เคลือบได้เตรียมเพิ่ม 5 mL ของ conidia 2 108 /มล 0.01% กอซไตรตั้น X 100 ระงับการ 20 mL ของเคลือบให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ conidia 5 107 ต่อมล ชีวิตของ conidia ถูกประเมิน โดยการกระจาย 100 lL ของ inoculumบนผิวของ agar ขึ้นเป็น Sabouraud (SDA) (Difco, NJ)จานและ incubating ที่ 20 C. การงอกมีประเมินหลังh 18 โดยใส่หนึ่งหยด lactophenol ฝ้ายสีน้ำเงิน (เมอร์ค NJ)ลงบนจาน ว่า มี coverslip การ และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ทำประเมิน 3 ใน 100 ที่สุ่มเลือกconidia สำหรับการประเมินแต่ละการงอก (Goettel และ Inglisปี 1997) . ชีวิตถูก > 90% สำหรับชุดทั้งหมดของ conidia ที่ใช้ควบคุมรักษาถูกเตรียมไว้สำหรับการใช้เชื้อราแต่ละวิธีเดียวกันแต่ 5 mL ของไตรตั้นเท่านั้นถูกเพิ่ม xanthan 0.01%หรือเคลือบ methylcellulose รวม รักษาหกได้เตรียม1 F668 Xan, 2 F668 MC, 3 F647 Xan, 4 F647 MC, 5 Xanควบคุม (ไม่เชื้อรา), 6 MC ควบคุม (ไม่เชื้อรา)ชุด 50 กรัมเมล็ดพันธุ์ไว้ใน Erweka หมุนปานเคลือบ (Heusenstamm เยอรมนี) (มุม 45, 200 รอบต่อนาที) และmL 25 ของวัสดุเคลือบผิวที่ใช้ผ่านพ่นที่แรงดัน 4 บาร์เมล็ดเริ่ม clumping อากาศว่ายบังคับใช้ใช้ไดร์เป่าผมการกระจุก หลังจากเคลือบ เมล็ดออกจากกระทะ และวางลงบนถาดจนแห้งในลักษณะก่อนบรรจุลงในถุง TGT (นูนพลาสติก จำกัด แฮมิลตันนิวซีแลนด์) (หกถุงต่อรักษา 50 g) กระเป๋าถูกจัดขึ้นที่ซี 20Loadings สปอร์บนเมล็ดพืชถูกกำหนดหลังจากเตรียมสำหรับเคลือบและเห็ดราแต่ละ เมล็ด 10 ถูกวางเป็น 10 mL ใส่0.01% 100 X ไตรตั้นในพลาสติก 20 mL ใส่หลอด ทำซ้ำสองหลอดถูกเตรียมไว้สำหรับเคลือบแต่ละ เมล็ดเปี่ยมล้นไปด้วยสำหรับ30 นาทีให้เคลือบ rehydrate ก่อนเขย่าหลอดในการข้อมือเชคเกอร์ (ห้องปฏิบัติการสาย อินเดีย) ที่สูงสุดใน 10 นาที พอร์ตอนุกรมdilutions ถูกเตรียมไว้แล้ว และจะ 100 aliquots ชุบลงบนตัวกึ่งกลางใช้ agar เรา (Beauveria ใช้สื่อ:PDA แรงไตรมาสประกอบด้วยซัลเฟต streptomycin 350 mg/L50 mg/L เตตราไซคลีนไฮโดรคลอไรด์และ 125 mg/L cycloheximide(ซิกมา)) แผ่นสอง replicate ถูกเตรียมไว้สำหรับเจือจางแต่ละแผ่นก็ incubated ที่ 20 C และขึ้นรูปหน่วยโคโลนี (cfu ของ)นับหลังจากวันที่ 10Loadings สำหรับรักษา MC ถูก 8.70 conidia 106 ต่อเมล็ดการแยก F647, conidia 7.80 106 ต่อเมล็ดสำหรับแยกF668 สำหรับการรักษา Xan loadings ที่ได้ 4.40 106 conidiaต่อเมล็ดพันธุ์ conidia 5.10 106 ต่อเมล็ดสำหรับแยกและแยก F647F668ทดสอบสภาพความยั่งยืนของการเคลือบเมล็ดด้วยเมล็ด 10ต่อการรักษาบนกระดาษกรอง moistened น้ำกลั่นฆ่าเชื้อในจาน Petri diam 55 มม. ซึ่งถูกเก็บไว้ในมืดที่ 20 Cสำหรับ 2 – 3 สัปดาห์ เมล็ดพันธุ์ควบคุมสำหรับ MC และ Xanมีอัตราการงอก 81% และ 88% ตามลำดับ เมล็ดเคลือบMC กับ F647 มีอัตราการงอก 69%, F647 Xan มีการงอก 94%อัตรา F668 MC มีอัตราการงอก 94% และ F668 Xanมีอัตราการงอก 84%ในแต่ละทรีทเม้นต์ 30 เมล็ดถูกหว่านใจที่ห้ากล้าไม้จากการรักษาแต่ละมีการสุ่มตัวอย่างในแต่ละ3 สุ่มรอบ (ดูด้านล่าง) แต่ละเมล็ดได้ปลูกเป็น Hort ใต้สวนเติบโตปุ๋ย (Horticultural ภาคใต้ผลิตภัณฑ์จำกัด ไครสต์เชิร์ช นิวซีแลนด์) ในหลายเซลล์ถาดขึ้นในเรือนกระจกที่ 15 C ในมืดจนเมล็ดเริ่มการ germinate เมื่อเปลือกงอก กล้าไม้ได้รับอนุญาตให้เติบโต 8 สัปดาห์ก่อนการที transplanted ใน PB1½ (ประมาณ 0.9 L) ปลูกถุง (เอ็กมอนต์ นิวซีแลนด์) ประกอบด้วยเหมือนกันเจริญเติบโตปานกลาง และมีปลูกในเรือนกระจกที่ประมาณกล้าไม้ 20 C. มีผู้รายสัปดาห์สำหรับส่วนเหลือของการทดลองที่ 2, 4 และ 9 เดือนหลังจากการงอกห้ากล้าไม้จากรักษาได้โดยการสุ่มเลือก และแก่ชีวิตตัวอย่างดังที่ด้านล่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3 การเคลือบเมล็ดพันธุ์
ก่อนที่จะมีการรักษาเมล็ดพันธุ์ถูกนำมาใช้เคลือบเมล็ดถูก
วางลงบนกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อใน 55 มมจานเลี้ยงเชื้อ (10 เมล็ด / จาน)
และอากาศแห้งในเครื่องดูดควันไหล เมล็ดพันธุ์ที่ถูกเคลือบด้วยทั้ง
เตรียมความพร้อมของหมากฝรั่ง xanthan (Xan) (0.2%) หรือเมทิล (MC)
(2%) เคลือบสีได้จัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 5 มิลลิลิตร 2 108 สปอร์ /
มล 0.01% ผ่านการฆ่าเชื้อน้ำ Triton X-100 ระงับ 20 มล
สารเคลือบผิวเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 107 สปอร์ต่อมิลลิลิตร ความมีชีวิต
ของสปอร์ได้รับการประเมินโดยการกระจาย 100 lL ของเชื้อ
กว่าพื้นผิวของเดกซ์โทรส Sabouraud agar (SDA) (Difco, นิวเจอร์ซีย์)
แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสงอกหลังจากที่ได้รับการประเมิน
18 ชั่วโมงโดยการวางหนึ่งหยด lactophenol ผ้าฝ้ายสีฟ้า ( เมอร์ค, นิวเจอร์ซีย์)
ลงบนแผ่นซ้อนทับกับ coverslip และการตรวจสอบภายใต้
กล้องจุลทรรศน์; สามการประเมินที่ถูกสร้างขึ้นใน 100 สุ่มเลือก
สปอร์ในการประเมินแต่ละงอก (Goettel และ Inglis,
1997) มีชีวิตเป็น> 90% สำหรับสำหรับกระบวนการทั้งหมดของสปอร์ที่ใช้.
การรักษาควบคุมได้จัดทำขึ้นสำหรับแต่ละเชื้อราโดยใช้
วิธีการเดียวกัน แต่ 5 มิลลิลิตร 0.01% Triton เพียงถูกบันทึกอยู่ใน xanthan
หรือเคลือบเมทิล ทั้งหมดหกการรักษาได้เตรียม;
1 F668 Xan 2. F668 MC, 3. F647 Xan 4. F647 MC, 5. Xan
Control (เชื้อราไม่) 6. ควบคุม MC (เชื้อราไม่มี). ห้าสิบ batches กรัมเมล็ดถูกวางไว้ในการหมุน Erweka (Heusenstamm, เยอรมนี) กระทะเคลือบ (45 มุม 200 รอบต่อนาที) และ25 มิลลิลิตรของวัสดุเคลือบสมัครผ่านปืนสเปรย์ที่ 4 ดันบาร์. ที่เมล็ดเริ่มจับตัวเป็นก้อนอากาศบังคับวักถูกนำไปใช้โดยใช้ไดร์เป่าผมที่จะทำลายกอ หลังจากการเคลือบเมล็ดพืชที่ถูกถอดออกจากกระทะและวางลงบนถาดจนแห้งในลักษณะก่อนที่จะมีการบรรจุลงในถุง TGT (นูนพลาสติก จำกัด , แฮมิลตัน, นิวซีแลนด์) (หกถุงละ 50 กรัมการรักษา) กระเป๋าถูกจัดขึ้นที่ 20 องศาเซลเซียสแรงสปอร์ในเมล็ดได้รับการพิจารณาหลังจากที่เตรียม. สำหรับแต่ละเคลือบและเชื้อรา 10 เมล็ดถูกวางลง 10 มลหมัน0.01% Triton X-100 ในการฆ่าเชื้อ 20 มิลลิลิตรหลอดพลาสติก สองซ้ำหลอดกำลังเตรียมพร้อมสำหรับการเคลือบแต่ละ เมล็ดพันธุ์พืชที่ถูกแช่30 นาทีเพื่อให้สารเคลือบเพื่อ rehydrate ก่อนที่จะเขย่าหลอดในเครื่องปั่นข้อมือ (Lab-Line, อินเดีย) การตั้งค่าที่สูงสุดเป็นเวลา 10 นาที อนุกรมเจือจางได้จัดทำแล้วและ 100 ส่วนลงตัว lL ชุบลงบนกลางวุ้นกึ่งเลือก BSM (Beauveria เลือกขนาดกลาง: พีดีเอที่มีความแข็งแรงไตรมาส 350 มิลลิกรัม / ลิตรซัลเฟต streptomycin, 50 มิลลิกรัม / ลิตรไฮโดรคลอไร tetracycline และ 125 มิลลิกรัม / ลิตร cycloheximide (Sigma)) . สองแผ่นซ้ำถูกเตรียมไว้สำหรับการเจือจางแต่ละ. แผ่นบ่มที่อุณหภูมิ 20 C และโคโลนีหน่วย (ของ cfu) นับหลังจาก 10 วัน. แรงสำหรับการรักษา MC เป็น 8.70 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับการแยก F647 และ 7.80 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับ แยกF668 สำหรับการรักษา Xan แรงเป็น 4.40 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับการแยก F647 และ 5.10 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับการแยกF668. ความมีชีวิตของเมล็ดเคลือบได้รับการทดสอบโดยการวาง 10 เมล็ดต่อการรักษาบนกระดาษกรองชุบน้ำกลั่นปลอดเชื้อใน 55 มม จานเส้นผ่าศูนย์กลาง Petri ซึ่งถูกวางไว้ในที่มืดที่ 20 C 2-3 สัปดาห์ เมล็ดพันธุ์ควบคุมทั้งพิธีกรและการรักษา Xan มีอัตราการงอก 81% และ 88% ตามลำดับ เมล็ดเคลือบด้วย F647 MC มีอัตราการงอก 69% F647 Xan มีการงอก 94% อัตรา F668 MC มีอัตราการงอก 94% และ F668 Xan มีอัตราการงอก 84%. สำหรับการรักษาแต่ละ 30 เมล็ดถูกหว่านเพื่อให้แน่ใจว่า ว่าห้าต้นกล้าจากการรักษาแต่ละที่มีอยู่สำหรับการสุ่มตัวอย่างในแต่ละของสามช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่าง (ดูด้านล่าง) เมล็ดพันธุ์พืชเป็นรายบุคคลได้รับการปลูกลงใต้ Hort สวนเติบโตปุ๋ยหมัก (ภาคใต้พืชสวนProducts Ltd. , Christchurch, นิวซีแลนด์) ในหลายเซลล์ถาดและจัดขึ้นในเรือนกระจกที่ 15 C ในที่มืดจนเมล็ดเริ่มงอก งอกเมื่อต้นกล้าได้รับอนุญาตให้เติบโตเป็นเวลา 8 สัปดาห์ก่อนที่จะถูกปลูกเป็นรายบุคคลเป็น PB 1½. (ประมาณ 0.9 ลิตร) ถุงเพาะปลูก (Egmont, NZ) ที่มีเดียวกันขนาดกลางที่กำลังเติบโตและมีปลูกในเรือนกระจกที่ประมาณ20 เซลเซียสต้นกล้าได้รับการรดน้ำ รายสัปดาห์สำหรับส่วนที่เหลือของการพิจารณาคดี. ที่ 2, 4 และ 9 เดือนหลังจากงอกห้าต้นกล้าจากแต่ละการรักษาที่ถูกสุ่มเลือกตัวอย่างและทำลายตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง
ก่อนที่จะมีการรักษาเมล็ดพันธุ์ถูกนำมาใช้เคลือบเมล็ดถูก
วางลงบนกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อใน 55 มมจานเลี้ยงเชื้อ (10 เมล็ด / จาน)
และอากาศแห้งในเครื่องดูดควันไหล เมล็ดพันธุ์ที่ถูกเคลือบด้วยทั้ง
เตรียมความพร้อมของหมากฝรั่ง xanthan (Xan) (0.2%) หรือเมทิล (MC)
(2%) เคลือบสีได้จัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 5 มิลลิลิตร 2 108 สปอร์ /
มล 0.01% ผ่านการฆ่าเชื้อน้ำ Triton X-100 ระงับ 20 มล
สารเคลือบผิวเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 107 สปอร์ต่อมิลลิลิตร ความมีชีวิต
ของสปอร์ได้รับการประเมินโดยการกระจาย 100 lL ของเชื้อ
กว่าพื้นผิวของเดกซ์โทรส Sabouraud agar (SDA) (Difco, นิวเจอร์ซีย์)
แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสงอกหลังจากที่ได้รับการประเมิน
18 ชั่วโมงโดยการวางหนึ่งหยด lactophenol ผ้าฝ้ายสีฟ้า ( เมอร์ค, นิวเจอร์ซีย์)
ลงบนแผ่นซ้อนทับกับ coverslip และการตรวจสอบภายใต้
กล้องจุลทรรศน์; สามการประเมินที่ถูกสร้างขึ้นใน 100 สุ่มเลือก
สปอร์ในการประเมินแต่ละงอก (Goettel และ Inglis,
1997) มีชีวิตเป็น> 90% สำหรับสำหรับกระบวนการทั้งหมดของสปอร์ที่ใช้.
การรักษาควบคุมได้จัดทำขึ้นสำหรับแต่ละเชื้อราโดยใช้
วิธีการเดียวกัน แต่ 5 มิลลิลิตร 0.01% Triton เพียงถูกบันทึกอยู่ใน xanthan
หรือเคลือบเมทิล ทั้งหมดหกการรักษาได้เตรียม;
1 F668 Xan 2. F668 MC, 3. F647 Xan 4. F647 MC, 5. Xan
Control (เชื้อราไม่) 6. ควบคุม MC (เชื้อราไม่มี). ห้าสิบ batches กรัมเมล็ดถูกวางไว้ในการหมุน Erweka (Heusenstamm, เยอรมนี) กระทะเคลือบ (45 มุม 200 รอบต่อนาที) และ25 มิลลิลิตรของวัสดุเคลือบสมัครผ่านปืนสเปรย์ที่ 4 ดันบาร์. ที่เมล็ดเริ่มจับตัวเป็นก้อนอากาศบังคับวักถูกนำไปใช้โดยใช้ไดร์เป่าผมที่จะทำลายกอ หลังจากการเคลือบเมล็ดพืชที่ถูกถอดออกจากกระทะและวางลงบนถาดจนแห้งในลักษณะก่อนที่จะมีการบรรจุลงในถุง TGT (นูนพลาสติก จำกัด , แฮมิลตัน, นิวซีแลนด์) (หกถุงละ 50 กรัมการรักษา) กระเป๋าถูกจัดขึ้นที่ 20 องศาเซลเซียสแรงสปอร์ในเมล็ดได้รับการพิจารณาหลังจากที่เตรียม. สำหรับแต่ละเคลือบและเชื้อรา 10 เมล็ดถูกวางลง 10 มลหมัน0.01% Triton X-100 ในการฆ่าเชื้อ 20 มิลลิลิตรหลอดพลาสติก สองซ้ำหลอดกำลังเตรียมพร้อมสำหรับการเคลือบแต่ละ เมล็ดพันธุ์พืชที่ถูกแช่30 นาทีเพื่อให้สารเคลือบเพื่อ rehydrate ก่อนที่จะเขย่าหลอดในเครื่องปั่นข้อมือ (Lab-Line, อินเดีย) การตั้งค่าที่สูงสุดเป็นเวลา 10 นาที อนุกรมเจือจางได้จัดทำแล้วและ 100 ส่วนลงตัว lL ชุบลงบนกลางวุ้นกึ่งเลือก BSM (Beauveria เลือกขนาดกลาง: พีดีเอที่มีความแข็งแรงไตรมาส 350 มิลลิกรัม / ลิตรซัลเฟต streptomycin, 50 มิลลิกรัม / ลิตรไฮโดรคลอไร tetracycline และ 125 มิลลิกรัม / ลิตร cycloheximide (Sigma)) . สองแผ่นซ้ำถูกเตรียมไว้สำหรับการเจือจางแต่ละ. แผ่นบ่มที่อุณหภูมิ 20 C และโคโลนีหน่วย (ของ cfu) นับหลังจาก 10 วัน. แรงสำหรับการรักษา MC เป็น 8.70 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับการแยก F647 และ 7.80 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับ แยกF668 สำหรับการรักษา Xan แรงเป็น 4.40 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับการแยก F647 และ 5.10 106 สปอร์ต่อเมล็ดพันธุ์สำหรับการแยกF668. ความมีชีวิตของเมล็ดเคลือบได้รับการทดสอบโดยการวาง 10 เมล็ดต่อการรักษาบนกระดาษกรองชุบน้ำกลั่นปลอดเชื้อใน 55 มม จานเส้นผ่าศูนย์กลาง Petri ซึ่งถูกวางไว้ในที่มืดที่ 20 C 2-3 สัปดาห์ เมล็ดพันธุ์ควบคุมทั้งพิธีกรและการรักษา Xan มีอัตราการงอก 81% และ 88% ตามลำดับ เมล็ดเคลือบด้วย F647 MC มีอัตราการงอก 69% F647 Xan มีการงอก 94% อัตรา F668 MC มีอัตราการงอก 94% และ F668 Xan มีอัตราการงอก 84%. สำหรับการรักษาแต่ละ 30 เมล็ดถูกหว่านเพื่อให้แน่ใจว่า ว่าห้าต้นกล้าจากการรักษาแต่ละที่มีอยู่สำหรับการสุ่มตัวอย่างในแต่ละของสามช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่าง (ดูด้านล่าง) เมล็ดพันธุ์พืชเป็นรายบุคคลได้รับการปลูกลงใต้ Hort สวนเติบโตปุ๋ยหมัก (ภาคใต้พืชสวนProducts Ltd. , Christchurch, นิวซีแลนด์) ในหลายเซลล์ถาดและจัดขึ้นในเรือนกระจกที่ 15 C ในที่มืดจนเมล็ดเริ่มงอก งอกเมื่อต้นกล้าได้รับอนุญาตให้เติบโตเป็นเวลา 8 สัปดาห์ก่อนที่จะถูกปลูกเป็นรายบุคคลเป็น PB 1½. (ประมาณ 0.9 ลิตร) ถุงเพาะปลูก (Egmont, NZ) ที่มีเดียวกันขนาดกลางที่กำลังเติบโตและมีปลูกในเรือนกระจกที่ประมาณ20 เซลเซียสต้นกล้าได้รับการรดน้ำ รายสัปดาห์สำหรับส่วนที่เหลือของการพิจารณาคดี. ที่ 2, 4 และ 9 เดือนหลังจากงอกห้าต้นกล้าจากแต่ละการรักษาที่ถูกสุ่มเลือกตัวอย่างและทำลายตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3 การเคลือบเมล็ดพันธุ์
ก่อนการรักษาเคลือบถูกประยุกต์ เมล็ด
วางไว้บนกระดาษกรองเป็นหมันใน 55 มม. จานเลี้ยงเชื้อ ( 10 เม็ด / จาน )
และอากาศแห้งในการไหลแบบราบเรียบ เครื่องดูดควัน เมล็ดเคลือบด้วย
เตรียมแซนแทนกัม ( แซน ) ( 0.2% ) หรือเมธิลเซลลูโลส ( MC )
( 2% ) เคลือบถูกเตรียมโดยการเพิ่ม 5 ml ของ ML 2 108 conidia /
001 % เป็นหมันสารละลาย Triton X-100 ระงับ 20 มล.
เคลือบเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้าย 5 107 โคนิต่อมิลลิลิตร 1
ของโคนิประเมินการแพร่กระจายของเชื้อ โดย 100 จะ
ผ่านพื้นผิวของ sabouraud dextrose agar ( SDA ) ( difco , NJ )
ที่ 20 C จานเพาะงอกได้ประเมิน หลังจาก
18 H โดยใส่หนึ่งหยดของฝ้ายสีฟ้าแลคโตฟีนอล ( Merck , NJ )
บนจานซ้อนทับกับปิดสไลด์และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ 3
; การประเมินที่สร้างขึ้น 100 สุ่ม
โคนิสำหรับแต่ละการการประเมินและ
goettel Inglis , 1997 ) ความมีชีวิตได้ > 90% สำหรับทุกชุดของโคนิเดียใช้ .
การรักษาควบคุมเตรียมสำหรับแต่ละใช้วิธีการเดียวกัน แต่เชื้อรา
5 มิลลิลิตร 0.01 % โดยเฉพาะถูกเพิ่มเข้าไป xanthan
หรือเคลือบเมธิลเซลลูโลส . ในรวม6 กรรมวิธีเตรียม ;
1 f668 แซน 2 f668 MC 3 f647 แซน , 4 f647 MC 5 แซน
ควบคุม ( ไม่มีเชื้อรา ) , 6 . ควบคุม MC ( ไม่มีเชื้อรา )
50 กรัมชุดเมล็ดพันธุ์อยู่ในการหมุน erweka
( Heusenstamm , เยอรมนี ) เคลือบกะทะ ( มุม 45 , 200 รอบต่อนาที ) และ
25 ml เคลือบวัสดุประยุกต์ผ่านปืนฉีด 4 บาร์ความดัน .
ที่เมล็ดเริ่มชกสด ใช้บังคับอากาศ
,การใช้เครื่องเป่าผมที่พักกระจุก หลังจากเคลือบเมล็ดออก
จากกระทะและวางลงบนถาดจนแห้งในลักษณะ
ก่อนบรรจุเป็นถุง TGT ( นูนพลาสติกจำกัด , แฮมิลตัน ,
( NZ ) 6 ถุงละ 50 กรัม รักษา ) กระเป๋าถูกจัดขึ้นที่ 20 C .
สปอร์กระทำบนเมล็ดพืชได้รับการพิจารณาหลังจากการเตรียมการ .
สำหรับแต่ละเคลือบและเชื้อรา 10 เมล็ดอยู่ใน 10 ml เป็นหมัน
001 % Triton X-100 ในปลอดเชื้อ 20 ml พลาสติกหลอด 2 ทำซ้ำ
ท่อเตรียมสำหรับแต่ละเคลือบ เมล็ดแช่นาน 30 นาที เพื่อให้สารเคลือบ
เพื่อ rehydrate ก่อนเขย่าหลอด
บนข้อมือเขย่า ( Lab บรรทัดอินเดีย ) ตั้งได้สูงสุด 10 นาที อนุกรม
เจือจางแล้วเตรียมและ 100 จะเฉยๆ ชุบลงบน
กึ่งกลางวุ้นเลือกเราเลือกขนาดกลาง :
( บิวเวอเรียสำหรับ PDA ที่มีความแข็งแรง 350 มิลลิกรัม / ลิตร สเตรปโตมัยซินซัลเฟต ,
50 มก. / ล. และ tetracycline และ 125 มก. / ล. ร้อยเรียง
( Sigma ) 2 ทำซ้ำแผ่นเตรียมไว้สำหรับแต่ละ dilution
แผ่นอุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสและอาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU )
นับหลังจาก 10 วัน
ภาระสำหรับ MC การทดลอง 8.70 106 โคนิต่อ
f647 สำหรับแยกเมล็ด และ 7 .80 106 โคนิต่อเมล็ดพันธุ์เพื่อแยก
f668 . การรักษาที่ครอบคลุมสำหรับแซนเป็น 4.40 106 โคนิ
ต่อเมล็ดพันธุ์เพื่อแยก f647 และ 5.10 106 โคนิต่อเมล็ดพันธุ์เพื่อแยก f668
ความมีชีวิตของเมล็ดเคลือบถูกทดสอบโดยการวาง 10 เมล็ด
ต่อรักษาบนกระดาษกรองชุบด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ
55 มม. เดียมจานเพาะเลี้ยงซึ่งถูกวางไว้ใน เข้มที่ 20 C
2 - 3 สัปดาห์เมล็ดพันธุ์ควบคุมทั้งพิธีกร และ แซนรักษา
มีอัตราการงอกของ 81% และ 88 ตามลำดับ เมล็ดเคลือบ
กับ f647 MC มีอัตราการงอกเป็น 69% f647 แซนมีอัตราการงอก
94 เปอร์เซ็นต์ f668 MC มีอัตราการงอกเป็น 94% และ f668 แซน
มี 84 % อัตราการงอก
สำหรับการรักษาแต่ละครั้ง 30 เมล็ดหว่านเพื่อให้แน่ใจว่าห้า
ต้นกล้าจากการรักษาแต่ละที่มีอยู่สำหรับการสุ่มตัวอย่างในแต่ละ
ของการวิจัยระยะเวลา ( ดูด้านล่าง ) เมล็ดแบบ
ปลูกลงใต้ปากช่องสวนปลูกปุ๋ยหมัก ( ภาคใต้
ผลิตภัณฑ์พืชสวน จำกัด , Christchurch , นิวซีแลนด์ ) หลายเซลล์
ถาดและจัดขึ้นในเรือนกระจกที่ 15 องศาเซลเซียสในที่มืดจนเมล็ดเริ่มงอก
. เมื่อเพาะกล้าให้
8 สัปดาห์ก่อนที่จะปลูกแบบนาดำใน PB
1 ½ ( ประมาณ 09 L ) ปลูกถุง ( เอ็กมอนต์ , NZ ) ที่มีเดียวกัน
เติบโตปานกลาง และปลูกในเรือนกระจกที่ประมาณ 20 องศาเซลเซียส คือ รดน้ำต้นกล้า
สัปดาห์สำหรับส่วนที่เหลือของการทดลอง .
2 , 4 และ 9 เดือนหลังจากที่งอก 5 ต้นกล้าจากการรักษาแต่ละ
สุ่มเลือกตัวอย่าง และวิธีทำลายตามที่ระบุไว้
ด้านล่าง
ก่อนการรักษาเคลือบถูกประยุกต์ เมล็ด
วางไว้บนกระดาษกรองเป็นหมันใน 55 มม. จานเลี้ยงเชื้อ ( 10 เม็ด / จาน )
และอากาศแห้งในการไหลแบบราบเรียบ เครื่องดูดควัน เมล็ดเคลือบด้วย
เตรียมแซนแทนกัม ( แซน ) ( 0.2% ) หรือเมธิลเซลลูโลส ( MC )
( 2% ) เคลือบถูกเตรียมโดยการเพิ่ม 5 ml ของ ML 2 108 conidia /
001 % เป็นหมันสารละลาย Triton X-100 ระงับ 20 มล.
เคลือบเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้าย 5 107 โคนิต่อมิลลิลิตร 1
ของโคนิประเมินการแพร่กระจายของเชื้อ โดย 100 จะ
ผ่านพื้นผิวของ sabouraud dextrose agar ( SDA ) ( difco , NJ )
ที่ 20 C จานเพาะงอกได้ประเมิน หลังจาก
18 H โดยใส่หนึ่งหยดของฝ้ายสีฟ้าแลคโตฟีนอล ( Merck , NJ )
บนจานซ้อนทับกับปิดสไลด์และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ 3
; การประเมินที่สร้างขึ้น 100 สุ่ม
โคนิสำหรับแต่ละการการประเมินและ
goettel Inglis , 1997 ) ความมีชีวิตได้ > 90% สำหรับทุกชุดของโคนิเดียใช้ .
การรักษาควบคุมเตรียมสำหรับแต่ละใช้วิธีการเดียวกัน แต่เชื้อรา
5 มิลลิลิตร 0.01 % โดยเฉพาะถูกเพิ่มเข้าไป xanthan
หรือเคลือบเมธิลเซลลูโลส . ในรวม6 กรรมวิธีเตรียม ;
1 f668 แซน 2 f668 MC 3 f647 แซน , 4 f647 MC 5 แซน
ควบคุม ( ไม่มีเชื้อรา ) , 6 . ควบคุม MC ( ไม่มีเชื้อรา )
50 กรัมชุดเมล็ดพันธุ์อยู่ในการหมุน erweka
( Heusenstamm , เยอรมนี ) เคลือบกะทะ ( มุม 45 , 200 รอบต่อนาที ) และ
25 ml เคลือบวัสดุประยุกต์ผ่านปืนฉีด 4 บาร์ความดัน .
ที่เมล็ดเริ่มชกสด ใช้บังคับอากาศ
,การใช้เครื่องเป่าผมที่พักกระจุก หลังจากเคลือบเมล็ดออก
จากกระทะและวางลงบนถาดจนแห้งในลักษณะ
ก่อนบรรจุเป็นถุง TGT ( นูนพลาสติกจำกัด , แฮมิลตัน ,
( NZ ) 6 ถุงละ 50 กรัม รักษา ) กระเป๋าถูกจัดขึ้นที่ 20 C .
สปอร์กระทำบนเมล็ดพืชได้รับการพิจารณาหลังจากการเตรียมการ .
สำหรับแต่ละเคลือบและเชื้อรา 10 เมล็ดอยู่ใน 10 ml เป็นหมัน
001 % Triton X-100 ในปลอดเชื้อ 20 ml พลาสติกหลอด 2 ทำซ้ำ
ท่อเตรียมสำหรับแต่ละเคลือบ เมล็ดแช่นาน 30 นาที เพื่อให้สารเคลือบ
เพื่อ rehydrate ก่อนเขย่าหลอด
บนข้อมือเขย่า ( Lab บรรทัดอินเดีย ) ตั้งได้สูงสุด 10 นาที อนุกรม
เจือจางแล้วเตรียมและ 100 จะเฉยๆ ชุบลงบน
กึ่งกลางวุ้นเลือกเราเลือกขนาดกลาง :
( บิวเวอเรียสำหรับ PDA ที่มีความแข็งแรง 350 มิลลิกรัม / ลิตร สเตรปโตมัยซินซัลเฟต ,
50 มก. / ล. และ tetracycline และ 125 มก. / ล. ร้อยเรียง
( Sigma ) 2 ทำซ้ำแผ่นเตรียมไว้สำหรับแต่ละ dilution
แผ่นอุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสและอาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU )
นับหลังจาก 10 วัน
ภาระสำหรับ MC การทดลอง 8.70 106 โคนิต่อ
f647 สำหรับแยกเมล็ด และ 7 .80 106 โคนิต่อเมล็ดพันธุ์เพื่อแยก
f668 . การรักษาที่ครอบคลุมสำหรับแซนเป็น 4.40 106 โคนิ
ต่อเมล็ดพันธุ์เพื่อแยก f647 และ 5.10 106 โคนิต่อเมล็ดพันธุ์เพื่อแยก f668
ความมีชีวิตของเมล็ดเคลือบถูกทดสอบโดยการวาง 10 เมล็ด
ต่อรักษาบนกระดาษกรองชุบด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ
55 มม. เดียมจานเพาะเลี้ยงซึ่งถูกวางไว้ใน เข้มที่ 20 C
2 - 3 สัปดาห์เมล็ดพันธุ์ควบคุมทั้งพิธีกร และ แซนรักษา
มีอัตราการงอกของ 81% และ 88 ตามลำดับ เมล็ดเคลือบ
กับ f647 MC มีอัตราการงอกเป็น 69% f647 แซนมีอัตราการงอก
94 เปอร์เซ็นต์ f668 MC มีอัตราการงอกเป็น 94% และ f668 แซน
มี 84 % อัตราการงอก
สำหรับการรักษาแต่ละครั้ง 30 เมล็ดหว่านเพื่อให้แน่ใจว่าห้า
ต้นกล้าจากการรักษาแต่ละที่มีอยู่สำหรับการสุ่มตัวอย่างในแต่ละ
ของการวิจัยระยะเวลา ( ดูด้านล่าง ) เมล็ดแบบ
ปลูกลงใต้ปากช่องสวนปลูกปุ๋ยหมัก ( ภาคใต้
ผลิตภัณฑ์พืชสวน จำกัด , Christchurch , นิวซีแลนด์ ) หลายเซลล์
ถาดและจัดขึ้นในเรือนกระจกที่ 15 องศาเซลเซียสในที่มืดจนเมล็ดเริ่มงอก
. เมื่อเพาะกล้าให้
8 สัปดาห์ก่อนที่จะปลูกแบบนาดำใน PB
1 ½ ( ประมาณ 09 L ) ปลูกถุง ( เอ็กมอนต์ , NZ ) ที่มีเดียวกัน
เติบโตปานกลาง และปลูกในเรือนกระจกที่ประมาณ 20 องศาเซลเซียส คือ รดน้ำต้นกล้า
สัปดาห์สำหรับส่วนที่เหลือของการทดลอง .
2 , 4 และ 9 เดือนหลังจากที่งอก 5 ต้นกล้าจากการรักษาแต่ละ
สุ่มเลือกตัวอย่าง และวิธีทำลายตามที่ระบุไว้
ด้านล่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- คง
- 中美经贸关系是中美关系的重要基础. 发展经贸合作是双边关系的重要支撑, 对中美两
- วันนี้คุณทำงานไหม.
- After receiving the paper she handed ove
- เวลาจะทำให้ทุกอย่างดีขึ้น
- negative
- 2 hours and then you have to play the ph
- ถ้าคุณเหนื่อยก็พัก
- ฉันอยากกิน
- a place with rides, shows, and other ent
- What is TRUE according to this sign?1)yo
- ชมพู่
- pero no he preparado para todos...
- totally
- ทำไมคุณไม่ต้องการให้ Dragen อยู่กับ Flip
- pair
- ฉันก็ได้ยินมาเหมือนกัน
- My job about legal
- fast food can be healthy when you eat it
- กล้อง, ซูมได้ถึง, จอ, ภาพ
- Thai dish has more than 3-4 flavors
- นอกจากนี้ยังได้ยอมรับร่วมกันอย่างกว้างขว
- ผัดผักรวมหมู
- มีดาวอยู่บนธงชาติ5ดวง
