2.4. Biochemical biomarkersPools of

2.4. Biochemical biomarkersPools of liver of two individuals were used for the assays of theenzymatic activities of superoxide dismutase (SOD), glutathioneperoxidase (GPx) glutathione S-transferases (GST), and for thedetermination of reduced glutathione concentration (GSH), lipidperoxidation levels (LPO) and protein carbonyl assay (PCO). Sam-ples were homogenized in phosphate buffer (0.1 M) at pH 7.0, andcentrifuged at 15.000 × g for 30 min, at 4◦C.SOD activity was assayed according to Gao et al. [15]. 40 L ofsample, 885 L of buffer (1 M Tris-base / 5 mM EDTA, pH 8.0) and50 L of pyrogallol (15 mM) were added to a microtube and thesolution was incubated for 30 min. The reaction was stopped with25 L HCl (1N). In a microplate 200 L of the solution was addedper well, and the absorbance was measured at 440 nm.GPx activity was measured according to Paglia and Valen-tine [29]. In microplate 10 L of sample and 130 L of reactionmedium (3.08 mM of sodium azide; 0.308 mM -NADPH, reducednicotinamide-adenine dinucleotide phosphate; 1.54 U/mL glu-tathione reductase and 3.08 mM reduced glutathione in 0.1 Msodium phosphate buffer, pH 7.0) were added. After two minutes,60 L of hydrogen peroxide (1.5 mM) was added. Absorbance wasmonitored at 340 nm.GSH was measured according to Sedlak and Lindsay [34]. A vol-ume of 50 L of supernatant (after protein precipitation by 10%trichloroacetic acid) and 230 L of TRIS buffer (0.4 M, pH 8.9) wereplaced in a microplate, followed by addition of 20 L of 2.5 mMDTNB in 25% methanol. Absorbance was determined at 415 nm.GST activity was measured using reduced glutathione (GSH-3 mM) and 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB- 3 mM) as sub-strates [21]. The absorbance increase was measured at 340 nm.LPO analysis was carried out using the ferrous oxidation-xylenolassay [18]. A volume of 100 L of sample were mixed with 900 Lof reaction solution (0.1 mM xylenol orange, 25 mM H2SO4, 4.0 mMBHT (butylated hydroxytoluene) and 0.25 mM FeSO4NH4(ammo-nium ferrous sulfate) added in this specific order in 90% grademethanol). After 30 min the absorbance was measured at 570 nm.PCO analysis was conducted at 360 nm by derivatization of theprotein carbonyl groups with 2, 4-dinitrophenol hydrazine (10 mMof 2,4-dinitrophenylhydrazine in 2.0 M of hydrochloric acid) toyield dinitrophenyl hydrazones [24].The protein concentration was determined using Bradford’smethod (1976), with bovine serum albumin as the standard at595 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. biomarkersPools ชีวเคมีของตับของบุคคลทั้งสองได้ใช้ assays ของกิจกรรมซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD), glutathioneperoxidase (GPx) กลูตาไธโอนเอส-transferases (GST), theenzymatic และ thedetermination ของเข้มข้นลดกลูตาไธโอน (GSH), ระดับ lipidperoxidation (LPO) และวิเคราะห์โปรตีน carbonyl (PCO) สาม-ples ที่ homogenized เป็นกลุ่มในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.1 M) ที่ pH 7.0, andcentrifuged ที่ 15.000 × g สำหรับ 30 นาที ที่ 4◦C.SOD กิจกรรมถูก assayed ตามเกา et al. [15] Ofsample 40 L, L 885 บัฟเฟอร์ (1 M ตรีฐาน / 5 mM EDTA, pH 8.0) L pyrogallol (15 มม.) ขึ้นเพิ่ม microtube และ thesolution and50 ถูก incubated ใน 30 นาที หยุดปฏิกิริยา with25 L HCl (1N) ใน microplate เป็น L 200 ของโซลูชันเป็น addedper ดี และมีที่วัด absorbance ที่ 440 nm กิจกรรม GPx ถูกวัดตาม Paglia และ Valen-แพงกว่า [29] ใน microplate 10 L ของตัวอย่างและ 130 L ของ reactionmedium (3.08 มม.ของโซเดียม azide; 0.308 มม. - การลดลงของ NADPH ฟอสเฟต reducednicotinamide adenine dinucleotide; 1.54 reductase glu tathione U/mL และ 3.08 มม.กลูตาไธโอนใน 0.1 Msodium ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0) เพิ่มขึ้น หลังจากสองนาที มีเพิ่ม 60 ลิตรของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (1.5 mM) Wasmonitored absorbance ที่ 340 nm GSH ถูกวัดตาม Sedlak และลินด์เซย์ [34] มี vol-ออฟฟิศของ supernatant (หลังฝนโปรตีนด้วยกรด 10% trichloroacetic) 50 L และ L 230 ของทริสเรทติ้ง wereplaced บัฟเฟอร์ (0.4 M, pH 8.9 นอก) ในการ microplate ตาม ด้วยเพิ่ม 20 L mMDTNB 2.5 ในเมทานอล 25% กำหนด absorbance ที่ 415 nm กิจกรรม GST ถูกวัดโดยใช้ลดลง 1-chloro-2, 4-dinitrobenzene (CDNB - 3 mM) และกลูตาไธโอน (GSH-3 mM) เป็นย่อย-strates [21] เพิ่ม absorbance ที่วัดได้ 340 nm วิเคราะห์ LPO ทำออกใช้เหล็กเกิดออกซิเดชัน-xylenolassay [18] ปริมาตรของตัวอย่าง L 100 ถูกผสมกับโซลูชันการปฏิกิริยา Lof 900 (0.1 mM xylenol ส้ม 25 มม.กำมะถัน mMBHT (butylated hydroxytoluene) และ 0.25 มม. FeSO4NH4 4.0 (nium กระสุนเหล็กซัลเฟต) เพิ่มในใบสั่งเฉพาะใน grademethanol 90%) หลังจาก 30 นาที absorbance ที่ถูกวัดที่ 570 nm วิธีการวิเคราะห์ PCO ที่ 360 nm โดย derivatization theprotein carbonyl กลุ่มด้วย 2, 4-dinitrophenol hydrazine (10 mMof 2, 4-dinitrophenylhydrazine ใน 2.0 M ของกรดไฮโดรคลอริก) toyield dinitrophenyl [24] hydrazones ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดด้วย Bradford'smethod (1976), วัว serum albumin เป็น nm at595 มาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 biomarkersPools ทางชีวเคมีของตับของบุคคลทั้งสองถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ของกิจกรรม theenzymatic ของ superoxide dismutase (SOD) glutathioneperoxidase (GPx) กลูตาไธโอน S-ราน (GST) และสำหรับ thedetermination ของความเข้มข้นของกลูตาไธโอนที่ลดลง (GSH) ระดับ lipidperoxidation (LPO) และทดสอบโปรตีนคาร์บอนิล (PCO) แซม-Ples ถูกปั่นในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.1 เมตร) ที่มีค่า pH 7.0, andcentrifuged ที่ 15.000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่4◦C.SODกิจกรรมได้รับการวิเคราะห์ตาม Gao et al, [15] 40? ofsample L, 885? L ของบัฟเฟอร์ (1 M Tris ฐาน / 5 มิลลิ EDTA, pH 8.0) and50? ลิตร pyrogallol (15 มิลลิเมตร) ถูกเพิ่มไปยัง Microtube และ thesolution ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาหยุด with25? L HCl (1N) ใน microplate 200 L ของการแก้ปัญหาเป็น addedper ดีและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ 440 กิจกรรม nm.GPx วัดตาม Paglia และ Valen-ขวากหนาม [29] ใน microplate L 10 ของกลุ่มตัวอย่างและ 130 ลิตร reactionmedium (3.08 มิลลิของโซเดียม azide;? 0.308 มิลลิ -NADPH ฟอสเฟต dinucleotide reducednicotinamide-adenine; 1.54 U / มิลลิลิตร Glu-reductase tathione และ 3.08 มิลลิกลูตาไธโอนที่ลดลง 0.1 Msodium ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ค่า pH 7.0) มีการเพิ่ม หลังจากนั้นสองนาที 60 ลิตรไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (1.5 มิลลิเมตร) ถูกบันทึก การดูดกลืนแสงที่ 340 wasmonitored nm.GSH วัดตาม Sedlak และ Lindsay [34] ฉบับ-เมะ 50? ลิตรใส (หลังจากตกตะกอนโปรตีน 10% กรดไตรคลอโร) และ 230? L ของบัฟเฟอร์ทริสเรทติ้ง (0.4 M ค่า pH 8.9) wereplaced ใน microplate ตามด้วยนอกเหนือจาก 20 ลิตร 2.5 mMDTNB ใน เมทานอล 25% การดูดกลืนแสงที่ถูกกำหนดที่ 415 กิจกรรม nm.GST ถูกวัดโดยใช้กลูตาไธโอนที่ลดลง (GSH-3 มิลลิเมตร) 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB- 3 มิลลิ) เป็น strates ย่อย [21] การเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่ได้รับการวัดที่ 340 วิเคราะห์ nm.LPO ได้ดำเนินการโดยใช้เหล็กออกซิเดชัน xylenolassay [18] ปริมาณของ 100 L ของกลุ่มตัวอย่างได้รับการผสมกับ 900? ทางออกที่ลอฟปฏิกิริยา (0.1 มิลลิส้ม xylenol 25 มิลลิ H2SO4 4.0 mMBHT (hydroxytoluene butylated) และ 0.25 มิลลิ FeSO4NH4 (กระสุน-เนียมเหล็กซัลเฟต) เพิ่มเข้ามาในลำดับที่เฉพาะเจาะจงใน 90 grademethanol%) หลังจาก 30 นาทีการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ 570 วิเคราะห์ nm.PCO ได้ดำเนินการที่ 360 นาโนเมตรโดยอนุพันธ์ของกลุ่มคาร์บอนิล theprotein 2, ไฮดราซีน 4 dinitrophenol (10 mMof 2,4-dinitrophenylhydrazine ใน 2.0 M ของกรดไฮโดรคลอ) hydrazones toyield dinitrophenyl [ 24] ความเข้มข้นของโปรตีนได้โดยเริ่มต้นที่ถูกกำหนดโดยใช้ Bradford'smethod (1976) กับอัลบูมิซีรั่มวัวเป็นมาตรฐาน at595 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 02.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 02.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 02.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 02.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 02.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 02.4 . ชีวเคมี biomarkerspools ตับของบุคคล 2 คน หรือใช้เพื่อกิจกรรม theenzymatic ของ Superoxide Dismutase ( SOD ) , glutathioneperoxidase ( GPX ) กลูต้าไธโอน s-transferases ( GST ) และกำหนดปริมาณลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) lipidperoxidation ระดับ ( LPO ) และโปรตีนคาร์บอนิล assay ( PCO ) ples สามถูกบดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0