ResultsPhloem unloading into ovule

Results
Phloem unloading into ovule primordia
To analyze phloem unloading in the early stages of ovule
development, we first looked at gynoecia from closed
flowers which corresponded to floral stages 9 and 10
(Smyth et al. 1990; Schneitz et al. 1995). In gynoecia of
stage 9 and stage 10 (Fig. 1a) flowers of transgenic plants
which synthesized membrane anchored GFP (tmGFP9)
under the control of the AtSUC2 promoter (pSUC2), GFP
fluorescence was visible exclusively in the companion cells
of the four phloem strands in the gynoecium wall (Fig. 1b,
arrow). In transgenic pSUC2:GFP plants which contained
phloem-mobile GFP, green fluorescence of similar intensity
was visible in the SE/CC complex of the phloem strands of
the gynoecium (Fig. 1c, arrow) and in ovule primordia
(Fig. 1c, arrowheads). Around the SE/CC complex, a cloudy fluorescence signal was visible, which indicated that
the amount of unloaded GFP was massive (Fig. 1c,
asterisk). GFP fluorescence could be seen throughout the
ovule primordium (Fig. 1d, arrow). In addition, a weak
signal was detectable in all cells of the gynoecium wall
(Fig. 1c). We conclude from these observations that, at
early stages of ovule development, GFP was unloaded into
all cells of the developing ovule, indicating symplastic
phloem unloading and post-phloem transport.
As soon as megaspore mother cells had formed (stage 10),
only weak GFP fluorescence was visible in those cells
(Fig. 1e, arrow). In early stage 11 flowers, no GFP
fluorescence was seen in the enlarged megaspore mother
cell as shown in longitudinal sections (Fig 1f, g) and in
cross-sections through developing ovules (Fig. 1h). At this
stage, outer (asterisks in 1f, g) and inner integuments start
developing and megaspore mother cells have finished
meiosis and have formed a multiplanar tetrade (Schneitz et
al. 1995). In all other cells of the developing ovules, strong
GFP fluorescence was still detectable. The cells of the
gynoecium including the stigma showed GFP fluorescence
with lower intensity than in the developing ovules (Fig. 1h;
“Electronic supplementary material”, Fig. S1a). These data
indicated a reduced cell-to-cell connectivity in the postphloem
pathway between megaspore mother cells and
surrounding tissue in developing ovules of stage 11 flowers.
Phloem unloading into developing ovules
At stage 12 of development, the megaspore undergoes
mitotic divisions to form the female gametophyte and the
integuments grow out to cover the nucellus (Robinson Beers et al. 1992). At this stage, a funicle which contains a
vascular bundle develops. At early stage 12, the funicles in
gynoecia of plants containing phloem-mobile GFP showed
strong green fluorescence (Fig. 2a). In contrast to earlier
developmental stages, both integuments were free of GFP
fluorescence. The same was detected for flowers at late stage
12 in which well-extended papillar cells of the stigma and tips
of white petals are visible (inlay in Fig. 2e, f). Analysis of late
stage 12 gynoecia of pSUC2:GFP plants also showed no
fluorescence in the integuments but strong labeling of
funicles (Fig. 2b). In optical cross-sections through the
funicle, a very strong signal in vascular bundles and a
weaker signal in all funicle cells could be detected
(“Electronic supplementary material”, Fig. S1b). GFP was
also visible in cells of the gynoecium wall and the stigma
including the papillae cells (“Electronic supplementary
material”, Fig. S1a). Longitudinal and tangential optical
cross-sections through mature ovules (late stage 12) showed
a strong GFP fluorescence in the vascular bundle which ended
in the phloem unloading domain (Fig. 2e, f). Almost no
fluorescence was detectable in the adjacent cells, even if
instrument sensitivity was increased beyond saturation of the
vascular GFP signal (Fig. 2e, f). The restriction of GFP to the
vasculature indicated that the symplastic phloem unloading
of GFP is switched off in ovules of stage 12 flowers.
Phloem unloading into developing seeds of open flowers
Next, phloem unloading was analyzed in stage 13 flowers,
which were 10 to 15 h older than late stage 12 flowers. The

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์เปลือกชั้นในการโหลดเป็น ovule primordiaวิเคราะห์เปลือกชั้นในการโหลดในขั้นเริ่มต้นของ ovuleพัฒนา เราต้องมอง gynoecia จากปิดดอกไม้ที่ corresponded กับดอกไม้ขั้น 9 และ 10(Smyth et al. 1990 Schneitz et al. 1995) ใน gynoecia ของระยะที่ 9 และ 10 (Fig. 1a) ดอกไม้ของพืชถั่วเหลืองขั้นตอนการสังเคราะห์เยื่อยึด GFP (tmGFP9)ภายใต้การควบคุมของ AtSUC2 โปรโมเตอร์ (pSUC2), GFPfluorescence ถูกมองเห็นได้เฉพาะในเซลล์เพื่อนของ strands เปลือกชั้นในสี่ผนัง gynoecium (Fig. 1bลูกศร) ในพืช pSUC2:GFP ถั่วเหลืองที่มีอยู่เปลือกชั้นในเคลื่อน GFP, fluorescence สีเขียวของความเข้มคล้ายเห็นในคอมเพล็กซ์ SE/CC ของ strands เปลือกชั้นในของgynoecium (Fig. 1 c ศร) และ ovule primordia(Fig. 1 c หัวลูกศร) สถาน SE/CC ซับซ้อน สัญญาณ fluorescence มีเมฆมากมองเห็นได้ ซึ่งระบุที่จำนวน GFP ยกเลิกการโหลดได้ขนาดใหญ่ (Fig. 1 cเครื่องหมายดอกจัน) GFP fluorescence สามารถเห็นได้ตลอดovule primordium (Fig. 1 d ศร) นอกจากนี้ ความอ่อนแอสัญญาณสามารถตรวจสอบได้ในทุกเซลล์ของผนัง gynoeciumกิน 1c) เราสรุปจากการสังเกตเหล่านี้ที่ ที่ขั้นต้นของ ovule พัฒนา GFP ถูกยกเลิกการโหลดลงในเซลล์ทั้งหมดของ ovule พัฒนา บ่งชี้ symplasticเปลือกชั้นในไม่โหลด และเปลือกชั้นในหลังขนส่งเป็นเซลล์ megaspore แม่ได้เกิดขึ้น (ระยะ 10),เห็นเฉพาะอ่อน GFP fluorescence ในเซลล์เหล่านั้น(Fig. 1e ลูกศร) ในช่วงขั้น 11 ดอกไม้ ไม่ GFPfluorescence ถูกเห็นในแม่ megaspore ขยายเซลล์ตามที่แสดง ในส่วนระยะยาว (1f ฟิก g) และในcross-sections ผ่านพัฒนา ovules กิน 1h) ที่นี้ระยะ ภายนอก (เครื่องหมายดอกจันใน 1f, g) และภายใน integumentsกำลังพัฒนาและเซลล์ megaspore แม่เสร็จแล้วไมโอซิสและมี multiplanar tetrade (Schneitz etal. 1995) ในเซลล์ทั้งหมดอื่น ๆ ovules พัฒนา แข็งแรงGFP fluorescence อาสายังได้ เซลล์รวมภาพดอกไม้ gynoecium พบ GFP fluorescenceมีความเข้มต่ำกว่าใน ovules พัฒนากิน 1h"อิเล็กทรอนิกส์เสริมวัสดุ" ฟิก S1a) ข้อมูลเหล่านี้ระบุการเชื่อมต่อเซลล์เซลล์ลงใน postphloem ที่ทางเดินระหว่างเซลล์ megaspore แม่ และรอบเนื้อเยื่อพัฒนา ovules ดอกไม้ขั้น 11เปลือกชั้นในการโหลดเข้าพัฒนา ovulesในระยะ 12 พัฒนา megaspore ผ่านส่วน mitotic ไป gametophyte หญิงและinteguments เจริญเติบโตออกไปครอบคลุม nucellus (โรบินสันเบียร์ร้อยเอ็ด al. 1992) ในขั้นตอนนี้ funicle ซึ่งประกอบด้วยการสคิวกลุ่มพัฒนา ในระยะแรก ๆ 12, funicles ในแสดงให้เห็นว่า gynoecia ของพืชที่ประกอบด้วยเปลือกชั้นในเคลื่อน GFPแข็งแรงสีเขียว fluorescence (Fig. 2a) ตรงข้ามก่อนขั้นพัฒนา integuments ทั้งสองถูกฟรี GFPfluorescence เดียวกันพบในดอกไม้ที่ขั้นตอนปลาย12 ในเซลล์ papillar ที่ห้องขยายภาพดอกไม้และเคล็ดลับของกลีบสีขาวจะมองเห็นได้ (ฝังใน Fig. 2e, f) วิเคราะห์ของสายขั้นตอน gynoecia 12 pSUC2:GFP ของพืชยังไม่แสดงfluorescence ใน integuments แต่แข็งแกร่งติดฉลากของfunicles (Fig. 2b) ใน cross-sections แสงผ่านการfunicle สัญญาณที่แรงมากในการรวมข้อมูลสคิวและมีการตรวจพบสัญญาณที่แข็งแกร่งใน funicle เซลล์ทั้งหมด("อิเล็กทรอนิกส์เสริมวัสดุ" ฟิก S1b) มี GFPนอกจากนี้ยังปรากฏในเซลล์ของผนัง gynoecium และภาพดอกไม้รวมไปถึงเซลล์ papillae ("อิเล็กทรอนิกส์ส่งเสริมการขายวัสดุ" ฟิก S1a) ระยะยาว และ tangential แสงcross-sections ผ่านผู้ใหญ่ ovules (ขั้นตอนปลาย 12) แสดงให้เห็นว่าfluorescence GFP ที่แข็งแกร่งในกลุ่มสคิวที่สิ้นสุดในเปลือกชั้นในไม่โหลดโดเมน (Fig. 2e, f) เกือบไม่มีfluorescence ถูกตรวจในเซลล์ติดกัน แม้ว่าเครื่องมือความไวเพิ่มขึ้นนอกเหนือจากความเข้มของการหลอดเลือด GFP สัญญาณ (Fig. 2e, f) ข้อจำกัดของ GFP เพื่อระบุ vasculature ที่ symplastic เปลือกชั้นในการโหลดของ GFP ถูกปิดใน ovules ดอกไม้ 12 ขั้นตอนการเปลือกชั้นในการโหลดเข้าพัฒนาเมล็ดพันธุ์ดอกไม้เปิดเปลือกชั้นในการโหลดถูกวิเคราะห์ในขั้นที่ 13 ดอกไม้ที่เก่ากว่าระยะปลายดอกไม้ 12 h 10-15 ได้ ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การขนถ่ายเข้าออวุล ไพรม ์เดีย

มฤคทายวันมฤคทายวันขนถ่ายวิเคราะห์ในขั้นตอนแรกของการพัฒนาออวุล


เราแรกดูที่ gynoecia จากปิด
ดอกไม้ซึ่งสอดคล้องกับ 9 และ 10
ดอกไม้ขั้นตอน ( สมิท et al . 1990 ; schneitz et al . 1995 ) ใน gynoecia ของ
เวทีเวที 9 และ 10 ( รูปที่ 1A ) ดอกไม้ของต้นพืชที่สังเคราะห์ GFP เยื่อยึด

( tmgfp9 )ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ atsuc2 เรืองแสงของ GFP ( psuc2 )
ถูกมองเห็นได้เฉพาะในเซลล์ของ 4 สหาย
ระหว่างเส้นในชั้นเกสรตัวเมียติดผนัง ( รูป 1B
ลูกศร ) ในต้นพืช ซึ่งมี psuc2 : GFP
โฟลเอ็มเคลื่อนที่ GFP เรืองแสงสีเขียวเข้มคล้าย
ถูกมองเห็นได้ใน SE / CC ที่ซับซ้อนระหว่างเส้น
จินนีเซียม ( ภาพที่ 1c , ลูกศร ) และ ออวุล ไพรม ์เดีย
( ภาพที่ 1c หัวลูกศร , ) รอบเซ / CC ที่สัญญาณมีเมฆเรืองแสงมองเห็นได้ ซึ่งพบว่าปริมาณของ GFP
โหลดมีขนาดใหญ่ ( ภาพที่ 1c
, Asterisk ) เรืองแสงของ GFP สามารถมองเห็นได้ตลอด
ออวุลล ( ภาพ 1D , ลูกศร ) นอกจากนี้ สัญญาณอ่อน
ถูกตรวจพบในเซลล์ทั้งหมดของจินนีเซียมผนัง
( ภาพที่ 1c ) เราสรุปจากการสังเกตที่
ในระยะแรกของการพัฒนา คือ ออวุล GFP , โหลดเข้า
เซลล์ทั้งหมดของการพัฒนาออวุล ระบุ symplastic
ระหว่างขนถ่ายและไปรษณีย์ระหว่างการขนส่ง
เกิดขึ้นทันทีที่เหว่แม่เซลล์ได้ ( ระยะที่ 10 ) ,
แต่อ่อนแอ GFP เรืองแสงถูกมองเห็นได้ในเซลล์เหล่านั้น
( รูปที่ 1e ลูกศร ) ในช่วงแรกที่ 11 ดอกไม้ไม่ GFP
เรืองแสงที่เห็นในขยายเหว่แม่
เซลล์ดังแสดงในส่วนตามยาว ( มะเดื่อ 1f , G ) และใน
และผ่านการพัฒนามี ( รูปที่ 1 ) ในขั้นตอนนี้
ด้านนอก ( เครื่องหมายดอกจันใน 1f , G ) และเริ่มพัฒนาและเหว่นเทกิวเมนต์ภายใน
แม่เซลล์เสร็จ
ไมโอซิสและมีรูปแบบที่ tetrade multiplanar ( schneitz et
อัล 1995 ) ในเซลล์อื่น ๆทั้งหมดของการพัฒนา มีเรืองแสงของ GFP แข็งแรง
ยังตรวจพบเซลล์ของ
จินนีเซียมรวมถึงคาวพบ GFP เรืองแสง
ที่มีความรุนแรงกว่าในการพัฒนา มี ( รูปที่ 1 h ;
" อิเล็กทรอนิกส์วัสดุเสริม " รูปที่ s1a ) ข้อมูลเหล่านี้ พบว่า เซลล์จะลดลง

postphloem การเชื่อมต่อของเซลล์ในทางเดินระหว่างเซลล์และเนื้อเยื่อรอบๆเหว่แม่
ในการพัฒนา มีเวที
11 ดอกไม้โฟลเ ขน มีเวทีในการพัฒนา
ที่ 12 ของการพัฒนา เหว่ทนี้
mitotic เขตการปกครองรูปแบบแกมีโทไฟต์หญิง
นเทกิวเมนต์เติบโตออกไปครอบคลุมนูเซลลัส ( โรบินสันเบียร์ et al . 1992 ) ในขั้นตอนนี้ funicle ซึ่งประกอบด้วย
มัดท่อลำเลียงพัฒนา ในขั้นต้น 12 , funicles ใน
gynoecia ของพืชที่มี GFP แสดง
โฟลเอ็มเคลื่อนที่แข็งแรงสีเขียวเรืองแสง ( รูปที่ 2A ) ในทางตรงกันข้ามกับก่อนหน้านี้
ตามขั้นตอน ทั้งนเทกิวเมนต์ฟรีของ GFP
เรืองแสงด้วย เหมือนดอกไม้ที่ตรวจพบในระยะปลาย
12 ซึ่งดีขยาย papillar เซลล์ของจุดและเคล็ดลับ
ของกลีบดอกสีขาวจะมองเห็น ( Inlay ในรูปที่ 2 , F ) การวิเคราะห์ขั้นปลาย
12 gynoecia psuc2 : GFP ของพืชยังไม่แสดง
เรืองแสงในนเทกิวเมนต์แต่แข็งแกร่ง การติดฉลาก
funicles ( รูปที่ 2B ) แสงและผ่าน
funicle แข็งแรงมาก สัญญาณในการรวมกลุ่มและหลอดเลือด
weaker สัญญาณในเซลล์ funicle ทั้งหมดสามารถตรวจพบ
( " อิเล็กทรอนิกส์วัสดุเสริม " รูปที่ s1b ) GFP ถูก
มองเห็นได้ในเซลล์ของผนังและคาว
จินนีเซียมรวมถึงเซลล์ที่ 2 ( "
อิเล็กทรอนิกส์เพิ่มเติมวัสดุ " รูปที่ s1a ) ตามยาวและสัมผัสแสง
และผ่านผู้ใหญ่ มีระยะสาย 12 ) พบ
เรือง GFP แข็งแรงในมัดท่อซึ่งสิ้นสุด
ในระหว่างขนถ่ายโดเมน ( รูปที่ 2 , F ) เกือบจะไม่มีการถูกตรวจพบในเซลล์

ติดกัน แม้ว่าความไวเพิ่มขึ้น นอกเหนือจากใช้ความเข้มของสัญญาณของ GFP
( รูปที่ 2 , F )ข้อจำกัดของ GFP ให้
vasculature พบว่า symplastic มฤคทายวันขนถ่าย
ของ GFP ในเวทีปิด มี 12 ดอกไม้
ระหว่างขนถ่ายในการพัฒนาเมล็ดพันธุ์ดอกไม้
เปิดต่อไป ระหว่างขนถูกวิเคราะห์ในขั้นตอนที่ 13 ดอกไม้
ซึ่งอายุมากกว่าเวทีสาย 12 ดอกไม้ 10 ถึง 15 ชั่วโมง .