To induce random mitochondrial muta

To induce random mitochondrial mutagenesis yeast, resulting in respiration deficiency, ethidium bromide (EtBr) was used. As show in fig.1, and overnight culture of S.cerevisiae 7982 was transferred to fresh medium, and the initial cell density was adjusted to OD600 = 0.2 when the cell density reached at 1.0 of OD600, 0.5 ug/ml EtBr was added to the culture. then, 100 ul of inoculum was spread onto plates and incubated at 42 C, After an initial screening of thermotolerant mutant mutants according to larger colony size at 42 C, a spot assay was used to screen thermotolerant mutants. Briefly, 4-ul aliquots of mutants and control cells grown to OD600 = 1.0 were 10-fold serially diluted, and spotted onto the plates. the plates were then incubated at 30 C and 42 C for 1-2 days.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชวน mutagenesis สุ่ม mitochondrial ยีสต์ เกิดหายใจขาด มีใช้ ethidium โบรไมด์ (EtBr) ตามแสดงในภาพ ค้างคืนวัฒนธรรม S.cerevisiae 7982 ถูกถ่ายโอนไปสดกลาง และความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้นถูกปรับ OD600 = 0.2 เมื่อมีเพิ่มความหนาแน่นของเซลล์ถึง 1.0 ของ OD600 ยูจี 0.5 ml EtBr กับวัฒนธรรม แล้ว 100 ul ของ inoculum กระจายลงบนแผ่น และ incubated ที่ 42 C หลังจากตรวจการเริ่มต้นของสายพันธุ์กลายพันธุ์ thermotolerant ตามขนาดฝูงใหญ่ 42 C วิเคราะห์จุดใช้จอสายพันธุ์ thermotolerant สั้น ๆ aliquots 4 ul สายพันธุ์และควบคุมเซลล์โต OD600 = 1.0 ถูก 10-fold serially diluted และด่างลงบนแผ่น แล้วแผ่นก็ incubated ที่ 30 C และ 42 C 1-2 วัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อก่อให้เกิดการกลายพันธุ์ยีสต์ยลสุ่มส่งผลให้ขาดหายใจ ethidium bromide (EtBr) ถูกนำมาใช้ ในฐานะที่แสดงในรูปที่ 1 และวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของ S.cerevisiae 7982 ถูกย้ายไปอยู่กลางสดและความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้นปรับ OD600 = 0.2 เมื่อความหนาแน่นของเซลล์ถึงที่ 1.0 OD600, 0.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร EtBr ถูกบันทึกอยู่ใน วัฒนธรรม. แล้ว 100 ยูของเชื้อกระจายลงบนจานและบ่มที่ 42 องศาเซลเซียสหลังจากที่คัดกรองเบื้องต้นของการกลายพันธุ์ที่กลายพันธุ์ทนร้อนตามขนาดอาณานิคมขนาดใหญ่ที่ 42 C, การวิเคราะห์จุดถูกใช้ในการคัดกรองการกลายพันธุ์ทนร้อน สั้น ๆ 4 ยู aliquots ของการกลายพันธุ์และเซลล์ควบคุมการเติบโตที่จะ OD600 = 1.0 ถูก 10 เท่าปรับลดลำดับและพบบนแผ่นเปลือกโลก แผ่นถูกบ่มจากนั้นวันที่ 30 C และ 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1-2 วัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อก่อให้เกิดการสุ่มของยีสต์ ทำให้ขาดการหายใจ ทิเดียมโบรไมด์ ( etbr ) คือใช้ ตามที่แสดงในชั่วข้ามคืน” และวัฒนธรรมของ s.cerevisiae 7982 ย้ายไปกลาง สด และความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้นปรับ od600 = 0.2 เมื่อความหนาแน่นเซลล์อยู่ที่ 1.0 ของ od600 0.5 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร etbr ถูกเพิ่มให้กับวัฒนธรรม จากนั้น100 UL ของเชื้อได้แพร่กระจายไปยังจานและบ่มที่อุณหภูมิ 42 องศาเซลเซียส หลังจากคัดกรองเบื้องต้นของสายพันธุ์กลายพันธุ์ สารตามอาณานิคมขนาดใหญ่ขนาด 42 องศาเซลเซียส จุด ( ใช้จอทนพวกกลายพันธุ์ สั้น ๆ , 4-ul เฉยๆของมนุษย์กลายพันธุ์และควบคุมเซลล์โต od600 = 1.0 เป็น 10 เท่าเป็นด่างเจือจาง และลงบนจานจาน แล้วบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสและ 42 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1-2 วัน