2.3.2. PCR reaction to amplify the

2.3.2. PCR reaction to amplify the aflD gene of aflatoxin-producing
moulds
A FAM labelled Nor-1 probe (QuantiFast pathogen PCR þ IC kit,
Qiagen, Whitehead Scientific) was used for PCR as suggested by the
manufacturer (Whitehead Scientific). Individual reactions had
2.5 ml of DNA sample solution hich was mixed with 5 ml master mix
(Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2 and reaction buffers at optimal
concentrations for efficient amplication of DNA templates by PCR),
3.5 ml of the primers i.e nortaq-1 (1.75 ml), nortaq-2 (1.75 ml) each,
0.5 ml probe (0.5 nM) and 13.5 ml nuclease free water to make up a
reaction volume of 25 ml. The PCR was performed in eppendorf
tubes placed in 36-well rack of the GeneAmp 5700R Sequence
Detection RT-PCR System. Incubation proceeded for 2 min at 50 C
to allow for cleavage of uracil-Nglycosylase. AmpliTaq Gold acti-
vation was done by incubating for 10 min at 95 C. The following
temperature range of 95 C for 20 s, 55 C for 20 s and 72 C for 30 s
were used for the 35 PCR cycles.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3.2 ปฏิกิริยา PCR ขยายยีน aflD ของผลิต aflatoxinแม่พิมพ์ FAM ที่มันโพรบ หรือ-1 (QuantiFast ศึกษา PCR þ IC ชุดQiagen, Whitehead Scientific) ใช้สำหรับ PCR แนะนำโดยผู้ผลิต (Whitehead Scientific) แต่ละปฏิกิริยาได้2.5 ml ของดีเอ็นเอตัวอย่างโซลูชันใดถูกผสมกับส่วนผสมหลัก 5 ml(Taq DNA พอลิเมอเรส dNTPs, MgCl2 และปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมความเข้มข้นสำหรับ efficient amplication ของดีเอ็นเอแม่แบบโดย PCR),3.5 ml ของไพรเมอร์อาทิ nortaq-1 (1.75 มล), nortaq-2 (1.75 มล.) ละโพรบ 0.5 ml (0.5 nM) และ nuclease 13.5 ml ฟรีน้ำทำเป็นปริมาตรปฏิกิริยาของ 25 ml ทำ PCR ที่ใน eppendorfท่อที่วางในชั้นดี 36 ลำดับ 5700R GeneAmpระบบตรวจสอบ RT-PCR คณะทันตแพทยศาสตร์ครอบครัวสำหรับ 2 นาทีที่ 50 Cเพื่อให้ปริ uracil Nglycosylase Acti AmpliTaq ทอง-ทำ โดย incubating ใน 10 นาทีที่ 95 C. vation ต่อไปนี้ช่วงอุณหภูมิ 95 C สำหรับ 20 s, 55 C s และ 72 C 20 สำหรับ 30 sใช้สำหรับวงจร PCR 35

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3.2 ปฏิกิริยา PCR เพื่อขยายชั้น D ยีนชั้น atoxin ผลิต
แม่พิมพ์
FAM ป้าย Nor-1 สอบสวน (QuantiFast PCR เชื้อโรคþชุด IC,
Qiagen สิว scienti Fi ค) ที่ใช้สำหรับ PCR ตามข้อเสนอแนะ
ของผู้ผลิต (เฮด scienti Fi ค) ปฏิกิริยาของแต่ละบุคคลมี
2.5 มล. ของการแก้ปัญหาตัวอย่างดีเอ็นเอ hich ผสมกับ 5 ml ผสมต้นแบบ
(Taq polymerase ดีเอ็นเอ dNTPs, MgCl2 และบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่ดีที่สุด
เข้มข้นสำหรับความ EF เพียงพอ amplication ของแม่แบบดีเอ็นเอโดยวิธี PCR)
3.5 มิลลิลิตรของไพรเมอร์คือ nortaq-1 (1.75 มล.) nortaq-2 (1.75 ml) แต่ละ
0.5 มลสอบสวน (0.5 เมตร) และ 13.5 มล nuclease น้ำฟรีที่จะทำให้
ปริมาณการเกิดปฏิกิริยาของ 25 มล PCR ได้รับการดำเนินการใน Eppendorf
หลอดวางอยู่ในชั้น 36 ดี GeneAmp 5700R ลำดับ
ตรวจ RT-PCR ระบบ บ่มเพาะเดิน 2 นาทีที่ 50 C
เพื่อให้ความแตกแยกของ uracil-Nglycosylase AmpliTaq acti- ทอง
vation ทำโดยการบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสต่อไปนี้
ช่วงอุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 วินาที, 55 C เป็นเวลา 20 และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที
ถูกนำมาใช้สำหรับ 35 รอบ PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3.2 . ปฏิกิริยา PCR เพื่อขยายเป็นfl D ยีนของflลาท ซิน

เป็นครอบครัวที่มีการผลิตแม่พิมพ์ nor-1 โพรบ ( quantifast เชื้อโรค PCR þ IC ชุดเพิ่มสิวจึง scienti
, C ) ใช้วิธีตามที่แนะนำโดย
ผู้ผลิต ( ไวท์เฮด scienti จึง C ) ปฏิกิริยาของแต่ละบุคคลมี
2.5 มล. ของ DNA ที่ถูกผสมกับสารละลาย hich
ต้นแบบผสม 5 ml ( polymerase dntps ชุดดีเอ็นเอได้ดี , และปฏิกิริยาที่เหมาะสม
บัฟเฟอร์เข้มข้นสำหรับ EF จึง amplication cient ดีเอ็นเอแม่แบบโดยวิธี PCR ) ,
3.5 มิลลิลิตร ไพรเมอร์ คือ nortaq-1 ( 1.75 มล. ) , nortaq-2 ( 1.75 มล. ) แต่ละ
0.5 ml โพรบ ( 0.5 nm ) และ 13.5 กรัมนิวเคลียสฟรีน้ำชดเชยปริมาณ 25 ml
ปฏิกิริยา PCR ในการปฏิบัติ
เพนดอร์ฟท่อที่วางอยู่ในชั้นเยี่ยมของ geneamp 5700r ตรวจหาลำดับ
4 ระบบ บ่มเพาะตลอด 2 นาทีที่ 50 C
เพื่อให้ตัวของยูราซิล nglycosylase . amplitaq Gold แอคทิ -
สังเกตได้โดยการแช่ 10 นาทีที่ 95 C . ต่อไปนี้
ช่วงอุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 S 55 C 20 และ 72 C 30 S
ถูกใช้เพื่อตรวจ
35 ครั้ง