2.2. DNA extraction and PCR assaysT

2.2. DNA extraction and PCR assays
Total DNA was extracted using the QIAamp DNA Blood Mini Kit
(QIAGEN). Fleas from each cat were pooled and total DNA extracted
as previously described (Shaw et al., 2004). The DNA of blood and
pooled-flea samples were assayed in conventional PCR assays for
Bartonella spp. (Jensen et al., 2000) targeting a fragment of the
16S–23S rRNA intergenic spacer region, hemoplasma spp. (Jensen
et al., 2001) targeting a fragment of 16S rRNA gene, and Rickettsia
spp. (Shaw et al., 2004) that amplified a fragment of gltA gene.
Samples with a band of 170 base pairs (bp) were differentiated
for M. haemofelis and ‘Candidatus M. turicensis’ by DNA sequencing.
The 161-bp PCR products for B. henselae and B. koehlerae were differentiated
by assaying the DNA extracts by a B. koehlerae specific
PCR assay (unpublished data) and confirmed by DNA sequencing
(Macromolecular Resources, Colorado State University, Fort Collins,
CO). Because R. felis IFA slides to use with serology are not
commercially available in the USA, PCR alone was used in this
study. The amplified products were identified by electrophoresis
on agarose gels as described for each assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. DNA สกัดและ PCR assaysดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้ QIAamp ดีเอ็นเอเลือดมินิชุด(QIAGEN) ถูกทางถูกพู fleas จากแมวแต่ละ และสกัดดีเอ็นเอทั้งหมดเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Shaw et al., 2004) ดีเอ็นเอของเลือด และตัวอย่างนัดทางถูกพูถูก assayed ใน assays PCR ธรรมดาสำหรับโอ Bartonella (เจนและ al., 2000) ส่วนของการกำหนดเป้าหมายภูมิภาคเป็นตัวเว้นวรรค intergenic 16S – 23S rRNA โอ hemoplasma (เจนเซนและ al., 2001) การกำหนดเป้าหมายส่วนของยีน 16S rRNA, Rickettsiaโอ (Shaw et al., 2004) ที่ขยายส่วนของยีน gltAตัวอย่างกับวงคู่ฐาน 170 (bp) แตกต่างกันhaemofelis เมตรและ 'ม. Candidatus turicensis' ตามลำดับดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์ PCR 161-bp เกิด henselae และ koehlerae เกิดขึ้นแตกต่างกันโดย assaying ดีเอ็นเอแยก โดย koehlerae เกิดเฉพาะPCR assay (ยกเลิกการประกาศข้อมูล) และได้รับการยืนยัน โดยลำดับดีเอ็นเอ(Macromolecular ทรัพยากร มหาวิทยาลัยโคโลราโด ฟอร์ตคอลลินส์บริษัท) เนื่องจากภาพนิ่งใน IFA สกุลแมวอาร์ที่ใช้กับวิทยาเซรุ่มไม่ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ในสหรัฐอเมริกา PCR คนเดียวใช้ในนี้ศึกษา ระบุผลิตภัณฑ์เอาต์ โดย electrophoresisบน agarose ตามที่อธิบายไว้ในการวิเคราะห์แต่ละ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การสกัดดีเอ็นเอและการตรวจ PCR
รวมดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ดีเอ็นเอ QIAamp เลือด Mini Kit
(QIAGEN) จากแต่ละหมัดแมวถูกรวบรวมและ DNA
รวมสกัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(ชอว์ et al., 2004) ดีเอ็นเอของเลือดและตัวอย่าง pooled-หมัดถูก assayed ในการตรวจ PCR ธรรมดาสำหรับเอสพีพีBartonella (เซ่น et al., 2000) กำหนดเป้าหมายส่วนของที่16S-23S rRNA spacer intergenic ภูมิภาค, เอสพีพี hemoplasma (เซ่นet al., 2001) กำหนดเป้าหมายส่วนของยีน 16S rRNA และ Rickettsia เอสพีพี (ชอว์ et al., 2004) ที่ขยายส่วนของยีน gltA ได้. ตัวอย่างกับวงดนตรีของฐานคู่ 170 (bp) มีความแตกต่างสำหรับเอ็ม haemofelis และ 'candidatus เมตร turicensis โดยลำดับดีเอ็นเอ. 161 bp-PCR ผลิตภัณฑ์ สำหรับ henselae บีและบี koehlerae ถูกแตกต่างโดยassaying สารสกัดดีเอ็นเอโดยเฉพาะบี koehlerae ทดสอบ PCR (ข้อมูลที่ไม่ถูกเผยแพร่) และได้รับการยืนยันโดยลำดับดีเอ็นเอ(Macromolecular ทรัพยากรมหาวิทยาลัยรัฐโคโลราโด, ฟอร์ตคอลลิน, CO) เพราะอาร์แมวสไลด์ที่ปรึกษาทางการเงินที่จะใช้กับเซรุ่มวิทยาไม่ได้ในเชิงพาณิชย์ในประเทศสหรัฐอเมริกา, PCR คนเดียวที่ใช้ในการนี้การศึกษา ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการขยายระบุ electrophoresis บน agarose เจลตามที่อธิบายไว้สำหรับแต่ละการทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การสกัดดีเอ็นเอและ PCR )
รวมดีเอ็นเอโดยใช้ qiaamp ดีเอ็นเอเลือดขนาดเล็กชุด
( เพิ่ม ) หมัดจากแมวแต่ละถูก pooled และดีเอ็นเอทั้งหมดสกัด
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Shaw et al . , 2004 ) ดีเอ็นเอของเลือด และรวมอยู่ในตัวอย่างซีรั่ม
หมัดแบบ PCR ) สำหรับ
Bartonella spp . ( เจนเซ่น et al . , 2000 ) เป้าหมายส่วนของ 16S rRNA
– 23s ส่า spacer ภูมิภาคhemoplasma spp . ( เจนเซ่น
et al . , 2001 ) ส่วนของ 16S rRNA ยีนเป้าหมาย และริคเคทเซีย
spp . ( Shaw et al . , 2004 ) ที่ขยายส่วนของยีน glta .
ตัวอย่างกับวงดนตรีของ 170 คู่เบส ( BP ) แตกต่างกัน
M . haemofelis และ ' candidatus ม. turicensis ' โดย การจัดลำดับดีเอ็นเอ .
161 BP PCR ผลิตภัณฑ์ B และ B .
koehlerae henselae แตกต่างกันโดย assaying ดีเอ็นเอที่สกัดโดย B . koehlerae เฉพาะ
PCR assay ( พิมพ์ข้อมูล ) และยืนยันโดยลำดับ
DNA ( macromolecular ทรัพยากร , Colorado State University , Fort Collins
Co ) เพราะ อาร์ เฟลิส IFA ภาพนิ่งเพื่อใช้กับแปลงไม่ได้
ในเชิงพาณิชย์ในสหรัฐอเมริกา ซึ่งเป็นคนเดียวที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้

การขยายผลิตภัณฑ์กลุ่มอิเลค
ในเจล ( ตามที่อธิบายไว้ในแต่ละการทดสอบ