2.6. In vitro bioadhesion of mucin

2.6. In vitro bioadhesion of mucin to chitosan and the three chitosan conjugates
2.6.1. Mucin determination by the periodic acid Schiff (PAS)method The periodic acid Schiff (PAS) colorimetric method was used to measure the concentration of free mucin. The Schiff reagent was prepared as previously reported (Kafedjiiski, Kraul and, H offer, & Bernkop-Schnourch, 2005). To 100 mL of 1% (w/v) basic fuchsin (pararosaniline) in deionized water was added 20 mL of 1 M HCland 1.67% (w/v) sodium metabisufite and incubated at 37◦C until pale yellow. The periodic acid reagent was freshly prepared by the addition of 10 L of 50% (v/v) periodic acid in water to 7 mL of 7%(v/v) acetic acid solution. Standard calibration curves of mucin were prepared from mucin standard solutions in the range of 0.2–1.0 mg/mL. First, 100 L of periodic acid reagent was added to 20 L of sample solution and then incubated at 37◦C for 2 h before 100 L of Schiff reagent was added and incubated at RT for 30 min. Finally, the absorbance was measured at a wavelength of 555 nm. The mucin content was then calculated by reference to the standard calibration curve.
2.6.2. Adsorption of mucin on chitosan and the three chitosan conjugates Mucin was prepared in 0.1 M phosphate buffer pH 1.2, pH 4.0 and pH 6.4 at 0.5% (w/v). Suspensions of sample stock solution were mixed with type II mucin (1 mg/mL), vortexed, and incubated at 37◦C for 2 h. After that the dispersions were centrifuged at 12,000 rpm for 2 min and the residual free mucin was measured in the supernatant using the PAS assay. The mucin concentration was calculated by reference to the calibration curve and the amount of mucin adsorbed to the polymer was calculated as the difference between the total amount of mucin added and the free mucin content in the supernatant

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การ bioadhesion เพาะเลี้ยงของ mucin ไคโตซานและไคโตซาน 3 conjugates 2.6.1. mucin กำหนด ด้วยกรดธาตุวิธีองท์ชิฟฟ์ (PAS) กรดธาตุองท์ชิฟฟ์ (PAS) เหมือนวิธีที่ใช้วัดความเข้มข้นของ mucin ฟรี รีเอเจนต์องท์ชิฟฟ์ได้เตรียมรายงานว่า ก่อนหน้านี้ (Kafedjiiski, Kraul, H ข้อเสนอ และ Bernkop-Schnourch, 2005) กับ 100 มล 1% (w/v) พื้นฐาน fuchsin (pararosaniline) ในน้ำ deionized ได้เพิ่ม 20 mL ของ 1 M HCland 1.67% (w/v) โซเดียม metabisufite และ incubated ที่ 37◦C จนถึงสีเหลืองอ่อน รีเอเจนต์ธาตุกรดถูกสดเตรียมไว้ด้านนอก L 10 ของ 50% (v/v) ธาตุกรดในน้ำ 7 mL ของกรดน้ำส้ม 7%(v/v) เส้นโค้งการปรับเทียบมาตรฐานของ mucin ถูกเตรียมจากโซลูชั่นมาตรฐาน mucin ในช่วง 0.2-1.0 mg/mL ครั้งแรก L 100 ของรีเอเจนต์ธาตุกรดถูกเพิ่ม 20 L ของตัวอย่างแล้ว incubated ที่ 37◦C สำหรับ 2 h L 100 ของรีเอเจนต์องท์ชิฟฟ์ได้เพิ่ม และ incubated ที่ RT สำหรับ 30 นาที ในที่สุด มีวัด absorbance ที่ที่ความยาวคลื่นของ 555 nm เนื้อหา mucin แล้วคำนวณ โดยอ้างอิงกับเส้นโค้งการปรับเทียบมาตรฐาน 2.6.2 การดูดซับของ mucin บนไคโตซานและ conjugates ไคโตซาน 3 ที่ Mucin ถูกเตรียมใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 1.2, pH 4.0 และ pH 6.4 ที่ 0.5% (w/v) บริการโซลูชันหุ้นอย่างถูกผสมกับชนิด II mucin (1 mg/mL), vortexed และ incubated ที่ 37◦C สำหรับ 2 h หลังจากที่ dispersions ที่ถูก centrifuged ที่ 12000 rpm สำหรับ 2 นาที และ mucin ฟรีเหลือถูกวัดใน supernatant ที่ใช้ทดสอบ PAS ความเข้มข้น mucin ถูกคำนวณ โดยการอ้างอิงการเทียบเส้นโค้ง และมีคำนวณจำนวน mucin adsorbed พอลิเมอร์ที่เป็นผลต่างระหว่างยอดรวมของ mucin เพิ่มเนื้อหาฟรี mucin ใน supernatant

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ในหลอดทดลองของ bioadhesion mucin เพื่อไคโตซานและสาม conjugates ไคโตซาน
2.6.1 mucin ความมุ่งมั่นโดยชิฟฟ์กรดเป็นระยะ (PAS) วิธีกรดระยะชิฟฟ์ (PAS) วิธีการสีที่ใช้ในการวัดความเข้มข้นของ mucin ฟรี น้ำยาชิฟฟ์ถูกจัดทำขึ้นตามที่รายงานก่อนหน้านี้ (Kafedjiiski, Kraul และข้อเสนอ H & Bernkop-Schnourch 2005) 100 มิลลิลิตร 1% (w / v) ฟุระดับล่าง (pararosaniline) ในน้ำปราศจากไอออนถูกเพิ่มเข้ามา 20 มล 1 M HCland 1.67% (w / v) metabisufite โซเดียมและบ่มที่37◦Cจนถึงสีเหลืองอ่อน น้ำยากรดเป็นระยะ ๆ ได้รับการปรุงสดใหม่โดยการเพิ่มของ 10 ลิตร 50% (v / v) กรดในน้ำเป็นระยะ ๆ ถึง 7 มล 7% (v / v) สารละลายกรดอะซิติก เส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐาน mucin ที่เตรียมจาก mucin สารละลายมาตรฐานในช่วง 0.2-1.0 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ครั้งแรกที่ 100 ลิตรน้ำยากรดระยะถูกบันทึกอยู่ใน 20 L ตัวอย่างของการแก้ปัญหาและบ่มแล้ว37◦Cเป็นเวลา 2 ชั่วโมงก่อนที่ 100 ลิตรน้ำยาชิฟฟ์ได้รับการเพิ่มและบ่มที่ RT เป็นเวลา 30 นาที ในที่สุดการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ความยาวคลื่น 555 นาโนเมตร เนื้อหา mucin ที่คำนวณโดยอ้างอิงถึงการสอบเทียบมาตรฐานโค้ง.
2.6.2 การดูดซับ mucin บนไคโตซานและสาม conjugates ไคโตซาน mucin ถูกจัดทำขึ้นใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 1.2 pH 4.0 และค่า pH 6.4 ที่ 0.5% (w / v) แขวนลอยของการแก้ปัญหาหุ้นกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการผสมกับชนิด II mucin (1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร), การ vortex และบ่มที่37◦Cเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจากที่ได้รับการกระจายหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาทีและ mucin ฟรีเหลือวัดในสารละลายโดยใช้การทดสอบ PAS ความเข้มข้น mucin ที่คำนวณโดยอ้างอิงกับเส้นโค้งการสอบเทียบและปริมาณของ mucin ดูดซับลิเมอร์ที่จะได้รับผลต่างระหว่างจำนวนเงินทั้งหมดของ mucin เพิ่มและเนื้อหา mucin ฟรีในสารละลายที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ในหลอดทดลอง bioadhesion ของเยื่อเมือกกับไคโตซานและสามสารประกอบไคโตซาน
ดูแล . เยื่อเมือกกำหนดโดย Schiff ( PAS ) กรดเป็นระยะวิธีชิฟกรดเป็นระยะ ( PAS ) พระชานุก็ใช้วัดความเข้มข้นของมิวซินฟรี ชิฟต์เตรียมตามที่รายงานก่อนหน้านี้ ( kafedjiiski kraul , และ H เสนอ & bernkop schnourch , 2005 )100 มิลลิลิตร 1 % ( w / v ) เท่าพื้นฐาน ( พาราโรซานิลีน ) คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำเพิ่ม 20 ml 1 M hcland 1.67 % ( w / v ) โซเดียม metabisufite บ่มที่ 37 ◦ C จนถึงเหลืองซีด สารเปลี่ยนเป็นกรดเป็นระยะที่สดใหม่ ปรุงโดยการ  L 50 % ( v / v ) กรดธาตุในน้ำ 7 ml 7 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) สารละลายกรดอะซิติก .มาตรฐานเส้นโค้งสอบเทียบของเยื่อเมือกที่เตรียมจากโซลูชั่นมาตรฐานเยื่อเมือกในช่วง 0.2 - 1.0 มก. / มล. 1 , 100 ลิตร  Periodic acid รีเอเจนต์ถูกเพิ่ม 20  ผมของโซลูชันตัวอย่างและบ่มที่ 37 ◦ C 2 H ก่อน 100  ลิตรชิฟฟ์รีเอเจนต์ถูกเพิ่มและบ่มที่อุณหภูมิ 30 RT สำหรับ นาที สุดท้าย ค่าวัดที่ความยาวคลื่น 555 nm .โดยเนื้อหาแล้วเยื่อเมือกคำนวณโดยอ้างอิงกับเส้นโค้งสอบเทียบมาตรฐาน
ดาวน์โหลด . การดูดซับบนไคโตซานไคโตซานและเยื่อเมือกสามเตรียมสารประกอบเยื่อเมือกใน 0.1 M phosphate buffer pH 1.2 , 4.0 และ pH 6.4 pH ที่ 0.5% ( w / v ) ช่วงล่างของ โซลูชั่น หุ้น จำนวน ผสมกับชนิดที่สองเยื่อเมือก ( 1 mg / ml ) vortexed และบ่มที่ 37 ◦ C เป็นเวลา 2 ชั่วโมงหลังจากที่การกระจายอยู่ที่ระดับที่ 12 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 2 นาที และเยื่อเมือกฟรีที่เหลือได้นำใช้ในขั้นตอนการทดสอบ และเยื่อเมือกของคำนวณโดยอ้างอิงจากรูปโค้งและปริมาณของเยื่อเมือกที่ดูดซับไปคำนวณเป็นพอลิเมอร์คือความแตกต่างระหว่างยอดรวมของเยื่อเมือกและเพิ่มเนื้อหาเยื่อเมือกในน่านฟรี