2.1. Direct peptide synthesis versu

2.1. Direct peptide synthesis versus recombinant protein synthesis
2.2. Protein engineering strategies for designing eECM
As protein technologies continue to evolve, there are now several
toolkits available to achieve reproducible and tunable eECM
with virtually limitless possibilities. To design a multifunctional
eECM, the first step is the selection of primary amino acid sequences
with desirable structural, gelation, degradation or bioactive
roles. Once the desired amino acid sequence has been
designed, two common techniques can be used to synthesize the
eECM: direct chemical synthesis of small peptide building blocks
or recombinant biochemical synthesis of large proteins (Fig. 1). Direct
peptide synthesis is usually realized through solid-phase peptide
synthesis (SPPS) using a peptide synthesizer. The advent of
peptide synthesizers allows for automatic and efficient production
of up to 30–50 amino acid residues in sub-gram quantities at reasonable
cost [49]. These small peptides can be ligated together to
create much longer sequences of up to 150 amino acids [50]. SPPS
ensures precise chemical structures and enables the addition of
modifications to the functional groups of individual amino acids
during synthesis. Liquid-phase peptide synthesis (LPPS) is a classical
method that requires sequential incorporation of amino acids
followed by removal of protecting groups [51]. LPPS is still commonly
used for large-scale production of gram-scale quantities of
a given peptide, although this synthetic route is much slower
and more labor intensive than SPPS.
Recombinant protein synthesis can produce much larger proteins
with more complex structural features, resulting in more
complex functionalities. This biochemical synthesis strategy requires
several genetic engineering steps, each of which may require
optimization to achieve efficient yields of functional
protein. First, a DNA template that encodes the target amino acid
sequence is designed and chemically synthesized. This engineered
gene is then inserted into a plasmid vector that enables gene replication
and transcription. The vector is transformed into a host
organism that expresses the target protein. The target protein is
then harvested and purified from other endogenous proteins and
contaminants. This templated synthesis offers precise control of
long protein sequences with multiple functional modules each presented
at a specific location, facilitating independent tuning of
mechanical properties and bioactivity within the final biomaterial.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 การสังเคราะห์เพปไทด์โดยตรงกับการสังเคราะห์โปรตีน recombinant2.2 การกลยุทธ์การออกแบบ eECM วิศวกรรมโปรตีนเป็นโปรตีนเทคโนโลยียังพัฒนา ขณะนี้มีหลายข่าวว่างเพื่อจำลอง และ tunable eECMมีแทบขีด การออกแบบโดยการเลือกลำดับของกรดอะมิโนหลักคือ eECM ขั้นตอนแรกโครงสร้างต้อง gelation สลายตัว หรือกรรมการกบทบาทการ เมื่อลำดับกรดอะมิโนที่ต้องได้รับออกแบบ เทคนิคทั่วไปที่สองสามารถใช้สังเคราะห์eECM: ตรงเคมีสังเคราะห์เพปไทด์ขนาดเล็กประกอบหรือสังเคราะห์ recombinant ชีวเคมีของโปรตีนขนาดใหญ่ (Fig. 1) โดยตรงมักจะมีการรับรู้การสังเคราะห์เพปไทด์ผ่านเพปไทด์เฟสของแข็งการสังเคราะห์ (SPPS) โดยใช้เครื่องสังเคราะห์เสียงเป็นเพปไทด์ มายเพปไทด์นทิไซเซอร์ช่วยให้การผลิตอัตโนมัติ และมีประสิทธิภาพของถึงตกกรดอะมิโน 30 – 50 กรัมย่อยปริมาณที่เหมาะสมต้นทุน [49] เปปไทด์ขนาดเล็กเหล่านี้สามารถจะ ligated กันไปสร้างลำดับมากยาวของกรดอะมิโนถึง 150 [50] SPPSเราช่วยให้โครงสร้างทางเคมีที่แน่นอน และช่วยให้การเพิ่มปรับเปลี่ยนกลุ่ม functional ของกรดอะมิโนแต่ละตัวในระหว่างการสังเคราะห์ทาง การสังเคราะห์เพปไทด์เฟสของเหลว (LPPS) เป็นแบบคลาสสิกวิธีการที่ต้องจดทะเบียนตามลำดับของกรดอะมิโนตาม ด้วยการกำจัดป้องกันกลุ่ม [51] LPPS โดยทั่วไปยังใช้สำหรับการผลิตปริมาณกรัมขนาดใหญ่การกำหนดเพปไทด์ แม้ว่ากระบวนการผลิตสังเคราะห์นี้จะช้าลงมากและแรงงานมากขึ้นกว่า SPPSสังเคราะห์ recombinant โปรตีนสามารถผลิตโปรตีนที่มีขนาดใหญ่มากมีลักษณะโครงสร้างซับซ้อนมากขึ้น เกิดขึ้นฟังก์ชันการทำงานซับซ้อน ชีวเคมีสังเคราะห์กลยุทธ์นี้ต้องขั้นตอนพันธุวิศวกรรมต่าง ๆ ซึ่งอาจปรับให้เหมาะสมเพื่อให้ได้ผลผลิตที่มีประสิทธิภาพของงานโปรตีน แรก แม่แบบดีเอ็นเอเมจแมปกรดอะมิโนเป้าหมายที่ลำดับออก และสารเคมีสังเคราะห์ นี้ได้วางแผนยีนจะถูกแทรกลงในเวกเตอร์ plasmid ที่เปิดใช้งานการจำลองแบบยีนและ transcription เวกเตอร์มีแก่นเรื่องโฮสต์สิ่งมีชีวิตที่แสดงโปรตีนเป้าหมาย โปรตีนเป้าหมายเป็นเก็บเกี่ยวผลผลิตแล้ว และบริสุทธิ์จากโปรตีนอื่น ๆ endogenous และสารปนเปื้อน สังเคราะห์ templated นี้มีควบคุมแม่นยำลำดับโปรตีนยาว มีหลายหน้าที่โมดูลแต่ละแสดงที่ตั้งเฉพาะ อำนวยความสะดวกในการปรับแต่งอิสระของคุณสมบัติทางกลและทางชีวภาพภายใน biomaterial ขั้นสุดท้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 การสังเคราะห์เปปไทด์โดยตรงกับการสังเคราะห์โปรตีน
2.2 กลยุทธ์วิศวกรรมโปรตีนสำหรับการออกแบบ eECM
เป็นเทคโนโลยีโปรตีนยังคงมีวิวัฒนาการขณะนี้มีหลาย
ชุดเครื่องมือที่มีอยู่เพื่อให้เกิดการทำซ้ำและพริ้ง eECM
กับความเป็นไปแทบไร้ขีด จำกัด การออกแบบมัลติฟังก์ชั่
eECM ขั้นตอนแรกคือการเลือกลำดับของกรดอะมิโนหลัก
ที่น่าพอใจกับโครงสร้างเจย่อยสลายหรือออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่
มีบทบาทสำคัญ เมื่อลำดับกรดอะมิโนที่ต้องการได้รับการ
ออกแบบทั้งสองเทคนิคทั่วไปสามารถใช้ในการสังเคราะห์
eECM: การสังเคราะห์สารเคมีโดยตรงของการก่อสร้างตึกเปปไทด์ขนาดเล็ก
(. รูปที่ 1) หรือการสังเคราะห์ recombinant ทางชีวเคมีของโปรตีนที่มีขนาดใหญ่ โดยตรง
การสังเคราะห์เปปไทด์มักจะตระหนักถึงเปปไทด์เฟสของแข็ง
สังเคราะห์ (SPPS) โดยใช้การสังเคราะห์เปปไทด์ การมาถึงของ
การสังเคราะห์เปปไทด์ช่วยให้การผลิตอัตโนมัติและมีประสิทธิภาพ
สูงถึง 30-50 กรดอะมิโนตกค้างในปริมาณที่ย่อยกรัมที่เหมาะสม
ค่าใช้จ่าย [49] เหล่านี้เปปไทด์ขนาดเล็กสามารถเชื่อมแล้วร่วมกันเพื่อ
สร้างลำดับนานถึง 150 กรดอะมิโน [50] SPPS
ทำให้โครงสร้างทางเคมีที่แม่นยำและช่วยให้การเพิ่มขึ้นของ
การปรับเปลี่ยนกลุ่มการทำงานของกรดอะมิโนแต่ละคน
ในระหว่างการสังเคราะห์ ของเหลวเฟสเปปไทด์สังเคราะห์ (LPPS) เป็นคลาสสิก
วิธีการที่ต้องมีการจัดตั้งขึ้นในลำดับของกรดอะมิโน
ตามด้วยการกำจัดของกลุ่มปกป้อง [51] LPPS ยังคงเป็นที่นิยม
ใช้สำหรับการผลิตขนาดใหญ่ของปริมาณแกรมขนาดของ
เปปไทด์ที่ได้รับแม้ว่าเส้นทางสังเคราะห์นี้จะช้ามาก
และแรงงานอย่างเข้มข้นมากขึ้นกว่า SPPS
การสังเคราะห์โปรตีน Recombinant สามารถผลิตโปรตีนที่มีขนาดใหญ่มาก
ด้วยคุณสมบัติที่ซับซ้อนมากขึ้นของโครงสร้างที่มีผลใน เพิ่มเติม
ฟังก์ชันการทำงานที่ซับซ้อน กลยุทธ์การสังเคราะห์นี้ทางชีวเคมีต้องมี
หลายขั้นตอนพันธุวิศวกรรมแต่ละซึ่งอาจต้องมี
การเพิ่มประสิทธิภาพเพื่อให้บรรลุผลตอบแทนที่มีประสิทธิภาพของการทำงาน
ของโปรตีน ครั้งแรกที่แม่ดีเอ็นเอที่ encodes เป้าหมายกรดอะมิโน
ลำดับได้รับการออกแบบและสังเคราะห์ทางเคมี นี้ออกแบบ
ยีนถูกแทรกเข้าไปในเวกเตอร์พลาสมิดที่ช่วยให้การจำลองแบบของยีน
และการถอดรหัส เวกเตอร์จะกลายเป็นเจ้าภาพ
สิ่งมีชีวิตที่แสดงออกถึงโปรตีนเป้าหมาย โปรตีนเป้าหมายคือ
การเก็บเกี่ยวแล้วและโปรตีนบริสุทธิ์จากภายนอกอื่น ๆ และ
สารปนเปื้อน นี้สังเคราะห์ templated ให้การควบคุมที่แม่นยำของ
ลำดับโปรตีนยาวกับโมดูลการทำงานหลายแต่ละที่นำเสนอ
ในสถานที่ที่เฉพาะเจาะจงอำนวยความสะดวกในการปรับจูนเป็นอิสระจาก
คุณสมบัติทางกลและทางชีวภาพภายในของวัสดุขั้นสุดท้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . การสังเคราะห์เปปไทด์และโปรตีนโดยการสังเคราะห์โปรตีน
2.2 . กลยุทธ์วิศวกรรมโปรตีนสำหรับการออกแบบ eecm
เป็นเทคโนโลยีโปรตีนยังคงคาย ขณะนี้มี toolkits หลาย
ใช้ได้บรรลุการหาความต้านทาน eecm
กับความเป็นไปได้ที่แทบจะไร้ขีดจำกัด ออกแบบโดย eecm
, ขั้นตอนแรกคือการเลือกหลักลำดับกรดอะมิโน
กับพึงปรารถนาก่อสร้าง , เจลาติน , การสลายตัวหรือบทบาททางชีวภาพ

เมื่อต้องการลำดับกรดอะมิโนได้
ออกแบบทั่วไปสองเทคนิคสามารถใช้เพื่อสังเคราะห์
eecm : การสังเคราะห์ทางเคมีโดยตรงของเปปไทด์ขนาดเล็กสร้างบล็อกหรือชีวเคมีการสังเคราะห์รีคอมบิแนนท์โปรตีน
ขนาดใหญ่ ( รูปที่ 1 ) การสังเคราะห์เปปไทด์โดยตรง

มักจะรับรู้ผ่านส่วนเปปไทด์การสังเคราะห์ ( ง ) โดยใช้เปปไทด์สังเคราะห์ . การมาถึงของ
เปปไทด์สังเคราะห์ช่วยให้โดยอัตโนมัติและมีประสิทธิภาพการผลิต
ถึง 30 – 50 กรดอะมิโนย่อยกรัมปริมาณที่ตกค้าง [
ต้นทุนเหมาะสม 49 ] เปปไทด์ขนาดเล็กเหล่านี้สามารถผูกกัน

สร้างลำดับนานถึง 150 กรดอะมิโน [ 50 ] งให้ชัดเจนขึ้น และช่วยให้โครงสร้างทางเคมี

เพิ่มของเพื่อปรับเปลี่ยนหมู่ฟังก์ชันของแต่ละกรดอะมิโน
ระหว่างการสังเคราะห์ เฟสของเหลวและเปปไทด์สังเคราะห์ ( lpps ) เป็นวิธีที่ต้องการการคลาสสิก

ตามด้วยลำดับของกรดอะมิโนการปกป้องกลุ่ม [ 51 ] lpps โดยทั่วไปยังคง
ใช้สำหรับการผลิตขนาดใหญ่ของกรัมขนาดปริมาณ
ให้เปปไทด์ แม้ว่าเส้นทางนี้สังเคราะห์มากช้าลง
และแรงงานที่เข้มข้นกว่า ง .
การสังเคราะห์โปรตีนรีคอมบิแนนท์โปรตีนสามารถผลิตขนาดใหญ่มาก
กับมีโครงสร้างที่ซับซ้อนมากขึ้น ส่งผลให้มากขึ้น
เชิงซ้อนฟังก์ชัน . นี้ทางชีวเคมีสังเคราะห์กลยุทธ์ต้อง
พันธุวิศวกรรมหลายขั้นตอน ซึ่งอาจต้องมีการเพิ่มประสิทธิภาพเพื่อให้บรรลุประสิทธิภาพผลผลิต
โปรตีนการทำงาน

ครั้งแรกดีเอ็นเอแม่แบบที่ encodes เป้าหมายลำดับกรดอะมิโน
ออกแบบและสังเคราะห์ทางเคมี . นี้ออกแบบ
ยีนแล้วแทรกเข้าไปใน plasmid เวกเตอร์ที่ช่วยให้
ซ้ำของยีนและการ transcription เวกเตอร์ฟรีเกี่ยวกับแปรสภาพเป็นเจ้าภาพ
สิ่งมีชีวิตที่แสดงโปรตีนเป้าหมาย โปรตีนเป้าหมาย
แล้วเกี่ยวและโปรตีนบริสุทธิ์จากภายนอกและสารปนเปื้อนอื่น ๆ
.นี้ templated การสังเคราะห์มีการควบคุมที่แม่นยำของลำดับโปรตีนกับโมดูลการทำงานนาน

แต่ละเสนอหลายที่สถานที่เฉพาะของการส่งเสริมอิสระ
คุณสมบัติทางกลและการภายในินครั้งสุดท้าย