BRET technology offers a straightfo

BRET technology offers a straightforward genetically encoded approach to ratiometric imaging of PPIs in cells and living subjects. Being a bioluminescence-based technique, which is excitation- and autofluorescence-free, BRET imaging rapidly extended to studies in living subjects. The ratiometric character of BRET imaging eliminates the need of introducing a second reporter for internal referencing, which is normally needed for split luciferases systems. Previous BRET systems were mainly limited to cell culture assays and s.c. tumors because of their green to yellow light emission, which is strongly absorbed by blood in the highly vascularized tissues of living subjects. Owing to their red light emission, the BRET systems presented here expand the scope of BRET techniques to imaging with high sensitivity in deep tissues of small animals. We have paired red-shifted RLuc variants as BRET donors with suitable RFPs (TagRFP or TurboFP635) based on spectral overlapping. The obtained BRET constructs showed high BRET efficiencies in cell culture and provided ratiometric BRET measurements in living mice.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เบรตเทคโนโลยีเสนอวิธีการแปลงพันธุกรรมเข้ารหัสแบบตรงไปตรงมาเพื่อ ratiometric ภาพของ PPIs ในเซลล์ และอาศัยวิชา การใช้ bioluminescence เทคนิค ซึ่งมีในการกระตุ้น และ autofluorescence- เบรตภาพอย่างรวดเร็วขยายการศึกษาในเรื่องชีวิต ตัว ratiometric ของเบรตภาพลดความจำเป็นของการแนะนำผู้สื่อข่าวที่สองสำหรับอ้างอิงภายใน ซึ่งโดยปกติจำเป็นสำหรับระบบ luciferases ที่แยก ระบบเบรตก่อนหน้าถูกจำกัดส่วนใหญ่การ assays วัฒนธรรมเซลล์เนื้องอกเอสเนื่องจากสีที่เขียวเพื่อปล่อยก๊าซแสงสีเหลือง ที่ขอการดูดซึม โดยเลือดในเนื้อเยื่อสูง vascularized เรื่องชีวิต เนื่องจากมลพิษของแสงสีแดง ระบบเบรตที่แสดงที่นี่ขยายขอบเขตเทคนิคเบรตให้ภาพ มีความไวสูงในเนื้อเยื่อลึกของสัตว์เล็ก เรามีคู่สีแดงเปลี่ยน RLuc ตัวแปรเป็นผู้บริจาคเบรตด้วย RFPs เหมาะสม (TagRFP หรือ TurboFP635) ตามสเปกตรัมที่ทับซ้อน โครงสร้างเบรตได้รับพบเบรตสูงประสิทธิภาพในการเพาะเลี้ยงเซลล์ และให้ ratiometric เบรตวัดในชีวิตหนู

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เทคโนโลยี BRET มีวิธีการตรงไปตรงมาเข้ารหัสพันธุกรรมเพื่อให้การถ่ายภาพของ ratiometric PPIs ในเซลล์และวิชาที่อยู่อาศัย เป็นเทคนิคที่ใช้ชีวิตเรืองแสงซึ่งเป็น excitation- และ Autofluorescence ฟร​​ีภาพ BRET อย่างรวดเร็วขยายการศึกษาในสาขาวิชาที่อยู่อาศัย ตัวอักษร ratiometric ของการถ่ายภาพ BRET ช่วยลดความจำเป็นของการแนะนำนักข่าวที่สองสำหรับการอ้างอิงภายในซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นตามปกติสำหรับระบบแยก luciferases ระบบ BRET ก่อนหน้าถูก จำกัด เป็นหลักในการตรวจเพาะเลี้ยงเซลล์และเนื้องอกวิทยาเพราะสีเขียวของพวกเขาที่จะปล่อยแสงสีเหลืองซึ่งจะถูกดูดซึมอย่างมากจากเลือดในเนื้อเยื่อ vascularized สูงของอาสาสมัครที่อยู่อาศัย เนื่องจากการปล่อยแสงสีแดงของพวกเขาระบบ BRET นำเสนอที่นี่ขยายขอบเขตของ BRET เทคนิคการถ่ายภาพด้วยความไวสูงในเนื้อเยื่อลึกของสัตว์ขนาดเล็ก เราได้จับคู่สีแดงขยับ RLuc สายพันธุ์เป็นผู้บริจาค BRET กับ RFPs เหมาะสม (TagRFP หรือ TurboFP635) ตามที่ทับซ้อนกันสเปกตรัม ได้สร้าง BRET แสดงให้เห็นประสิทธิภาพ BRET สูงในการเพาะเลี้ยงเซลล์และให้ ratiometric วัด BRET ในหนูที่อาศัยอยู่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เบร็ทเทคโนโลยีเสนอตรงไปตรงมาวิธีการพันธุกรรมเข้ารหัสภาพ ratiometric ของ ppis ในเซลล์และสิ่งมีชีวิต . เป็นไบโอลูมิเนสเซนเทคนิคตาม ซึ่งเป็นการกระตุ้นและ autofluorescence ฟรี , เบร็ทการถ่ายภาพอย่างรวดเร็วขยายการศึกษาในชีวิตคนตัวละคร ratiometric ของ Bret ภาพไม่ต้องแนะนำนักข่าวที่สองสำหรับการอ้างอิงภายใน ซึ่งปกติจะต้องแยก luciferases สำหรับระบบ ระบบเบรต ก่อนหน้านี้ส่วนใหญ่ถูก จำกัด หรือซี และเพาะเลี้ยงเซลล์เนื้องอกของพวกเขาสีเขียวเพื่อการเปล่งแสง สีเหลือง ที่ขอไว้ในเลือดสูง vascularized เนื้อเยื่อของสิ่งมีชีวิต .เนื่องจากของพวกเขาแดงแสงฉาย , เบรต ระบบที่นำเสนอนี้ขยายขอบเขตของ Bret เทคนิคการถ่ายภาพความไวสูงในเนื้อเยื่อลึกของสัตว์เล็ก เรามีคู่สีแดงขยับ rluc ตัวแปรเป็นผู้บริจาคเบร็ทกับ RFPs ที่เหมาะสม ( tagrfp หรือ turbofp635 ) ขึ้นอยู่กับพื้นที่ที่ทับซ้อนกันโดยเบร็ทโครงสร้างมีค่าสูงและให้ประสิทธิภาพในการเพาะเลี้ยงเซลล์เบรตเบรต ratiometric การวัดในชีวิตหนู