- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
At sufficient doses, cordycepin inh
At sufficient doses, cordycepin inhibits protein as well as
RNA synthesis (LaTorre and Perry, 1973). Preliminary experiments
were performed to compare the effects of different
cordycepin concentrations on [3H1uridine and 14C-amino-acid
incorporation into acid-precipitable material. At 20 pg/ml
* J. Ross and D. Knecht, manuscript in preparation.
there was no detectable inhibition of incorporation of labeled
amino acids during a 50-min treatment interval (Fig. IB).
After 90 min cordycepin reduced amino acid incorporation by
only 10% (Table III, columns 2 and 3). On the other hand, the
uptake of labeled uridine into RNA was inhibited by approximately
50% (Fig. IA). Therefore, cordycepin at 20 pg/ml
selectively inhibited RNA synthesis in cultured mouse fetal
liver cells.
To determine the effect of cordycepin on newly synthesized
globin mRNA sequences, MFL cells were incubated with
adenosine or cordycepin for 40 min, at which time lUH]uridine
was added. After 60 min of labeling, cells were harvested and
total cell RNA was isolated. A portion of the RNA was
incubated with unlabeled globin cDNA to determine incorporation
into 13Hlglobin mRNA sequences. A representative
experiment is shown in Table I. Incorporation into total RNA,
determined by trichloroacetic acid precipitation, was reduced
by 69% with cordycepin, and incorporation into globin-specific
sequences was reduced by 91%. Similar results were obtained
in three other experiments, using 60-min labeling periods.R
Therefore, during a l-h labeling period in the presence of
cordycepin, the newly synthesized globin mRNA sequences
were inhibited to a greater extent than were total cell RNA
sequences. The exogenous adenosine exerted no significant
effect on globin mRNA synthesis since adenosine-treated cells
(20 pg/ml or less) labeled for 60 min with [“Hluridine contained
0.2 to 0.3% 13H1globin mRNA, as did untreated cells
(Table I, line 1 and Table III, line 1). To determine whether
cordycepin reduced the recovery of steady state (unlabeled)
globin mRNA, an aliquot of RNA from adenosine- and cordycepin-
treated cells was incubated with globin 1”HlcDNA. The
rates of hybridization of both RNA samples were identical
(data not shown). Furthermore, the recoveries of total cell
RNA measured by absorbance at 260 nm were the same. These
control experiments indicated that the cordycepin effect was
not due to decreased recovery of RNA.
The results (Table I) indicated that cordycepin either inhibited
the transcription or accelerated the breakdown of
newly synthesized globin mRNA sequences. In an effort to
distinguish between these mechanisms, a similar experiment
was performed, except that cells were labeled for shorter
intervals. In preliminary experiments, cells were labeled for
10 min without cordycepin, and the RNA was analyzed by
electrophoresis in a formamide-containing polyacrylamide gel;
greater than 90% of the globin mRNA nucleotide sequences
was in precursor molecules larger than 10 S4 Based on these
data, a labeling time of 6 min was chosen for some of the
cordycepin experiments so that most of the radioactive globin
mRNA sequences would be in precursor molecules. If cordycepin
caused increased (but not instantaneous) breakdown of
newly synthesized molecules, the percentage reduction of
radioactive globin mRNA sequences should increase with
longer labeling times. As shown in Table II, the per cent
inhibition of radioactive, globin-specific sequences was greater
than that of total RNA, confirming the results of Table I, and
was essentially the same with labeling times of 6 or 30 min.
This result strongly indicates, but does not prove, that cordycepin
inhibits transcription of globin mRNA sequences. It does
not exclude the possibility that cordycepin causes breakdown
during or immediately after transcription. We are unable to
speculate further on this matter since the rate of synthesis of
the globin mRNA precursor is unknown. The important point
3 L. R. Beach, unpublished data.
’ J. Ross, manuscript in preparation.
RNA synthesis (LaTorre and Perry, 1973). Preliminary experiments
were performed to compare the effects of different
cordycepin concentrations on [3H1uridine and 14C-amino-acid
incorporation into acid-precipitable material. At 20 pg/ml
* J. Ross and D. Knecht, manuscript in preparation.
there was no detectable inhibition of incorporation of labeled
amino acids during a 50-min treatment interval (Fig. IB).
After 90 min cordycepin reduced amino acid incorporation by
only 10% (Table III, columns 2 and 3). On the other hand, the
uptake of labeled uridine into RNA was inhibited by approximately
50% (Fig. IA). Therefore, cordycepin at 20 pg/ml
selectively inhibited RNA synthesis in cultured mouse fetal
liver cells.
To determine the effect of cordycepin on newly synthesized
globin mRNA sequences, MFL cells were incubated with
adenosine or cordycepin for 40 min, at which time lUH]uridine
was added. After 60 min of labeling, cells were harvested and
total cell RNA was isolated. A portion of the RNA was
incubated with unlabeled globin cDNA to determine incorporation
into 13Hlglobin mRNA sequences. A representative
experiment is shown in Table I. Incorporation into total RNA,
determined by trichloroacetic acid precipitation, was reduced
by 69% with cordycepin, and incorporation into globin-specific
sequences was reduced by 91%. Similar results were obtained
in three other experiments, using 60-min labeling periods.R
Therefore, during a l-h labeling period in the presence of
cordycepin, the newly synthesized globin mRNA sequences
were inhibited to a greater extent than were total cell RNA
sequences. The exogenous adenosine exerted no significant
effect on globin mRNA synthesis since adenosine-treated cells
(20 pg/ml or less) labeled for 60 min with [“Hluridine contained
0.2 to 0.3% 13H1globin mRNA, as did untreated cells
(Table I, line 1 and Table III, line 1). To determine whether
cordycepin reduced the recovery of steady state (unlabeled)
globin mRNA, an aliquot of RNA from adenosine- and cordycepin-
treated cells was incubated with globin 1”HlcDNA. The
rates of hybridization of both RNA samples were identical
(data not shown). Furthermore, the recoveries of total cell
RNA measured by absorbance at 260 nm were the same. These
control experiments indicated that the cordycepin effect was
not due to decreased recovery of RNA.
The results (Table I) indicated that cordycepin either inhibited
the transcription or accelerated the breakdown of
newly synthesized globin mRNA sequences. In an effort to
distinguish between these mechanisms, a similar experiment
was performed, except that cells were labeled for shorter
intervals. In preliminary experiments, cells were labeled for
10 min without cordycepin, and the RNA was analyzed by
electrophoresis in a formamide-containing polyacrylamide gel;
greater than 90% of the globin mRNA nucleotide sequences
was in precursor molecules larger than 10 S4 Based on these
data, a labeling time of 6 min was chosen for some of the
cordycepin experiments so that most of the radioactive globin
mRNA sequences would be in precursor molecules. If cordycepin
caused increased (but not instantaneous) breakdown of
newly synthesized molecules, the percentage reduction of
radioactive globin mRNA sequences should increase with
longer labeling times. As shown in Table II, the per cent
inhibition of radioactive, globin-specific sequences was greater
than that of total RNA, confirming the results of Table I, and
was essentially the same with labeling times of 6 or 30 min.
This result strongly indicates, but does not prove, that cordycepin
inhibits transcription of globin mRNA sequences. It does
not exclude the possibility that cordycepin causes breakdown
during or immediately after transcription. We are unable to
speculate further on this matter since the rate of synthesis of
the globin mRNA precursor is unknown. The important point
3 L. R. Beach, unpublished data.
’ J. Ross, manuscript in preparation.
0/5000
ในปริมาณที่เพียงพอ cordycepin ยับยั้งโปรตีนเป็น
สังเคราะห์อาร์เอ็นเอ (LaTorre และเพอร์รี 1973) เบื้องต้นทดลอง
ดำเนินการเปรียบเทียบผลของการแตกต่าง
cordycepin ความเข้มข้นใน [3H1uridine และ 14C อะมิโนกรด
ประสานเป็นกรด precipitable วัสดุ ที่ 20 pg/ml
* J. Ross และ D. Knecht ฉบับเตรียม
มีการยับยั้งไม่สามารถประสานติดป้าย
กรดอะมิโนในระหว่างช่วงเวลา 50 นาทีรักษา (ฟิก IB) .
หลังจาก 90 นาที cordycepin ลดกรดอะมิโนประสานโดย
เพียง 10% (ตาราง III คอลัมน์ 2 และ 3) บนมืออื่น ๆ การ
ป้าย uridine เป็นอาร์เอ็นเอของถูกห้ามโดยประมาณ
50% (ฟิก IA) ดังนั้น cordycepin ที่ 20 pg/ml
ห้ามการสังเคราะห์อาร์เอ็นเอในครรภ์อ่างเมาส์เลือก
เซลล์ตับ
เพื่อดูผลของ cordycepin ในใหม่สังเคราะห์
globin mRNA ลำดับ เซลล์ MFL ได้ incubated กับ
อะดีหรือ cordycepin ใน 40 นาที ที่ซึ่งเวลา lUH] uridine
เพิ่ม หลังจาก 60 นาทีของการติดฉลาก เซลล์ถูกเก็บเกี่ยว และ
รวมเซลล์อาร์เอ็นเอที่แยก ส่วนของอาร์เอ็นเอถูก
incubated กับ cDNA globin ไม่กำหนดประสาน
13Hlglobin mRNA เป็นลำดับ ตัวแทน
ทดลองแสดงในตาราง I. ประสานเป็นอาร์เอ็นเอรวม,
ตามฝนกรด trichloroacetic ถูกลด
69% cordycepin และจดทะเบียนเป็น globin เฉพาะ
ลำดับถูกลดลง 91% ได้รับผลลัพธ์ที่คล้าย
ในการทดลองอื่น ๆ 3 ใช้ 60 นาทีระยะเวลาการติดฉลากR
ดังนั้น ในระหว่างรอบระยะเวลาการติดฉลาก l h หน้า
cordycepin การสังเคราะห์ใหม่ globin mRNA ลำดับ
ถูกห้ามไปขอบเขตยิ่งกว่ามีอาร์เอ็นเอของเซลล์รวม
ลำดับนั้น อะดีบ่อยนั่นเองไม่สำคัญ
ผล globin mRNA สังเคราะห์ตั้งแต่เซลล์รักษาอะดี
(20 pg/ml หรือน้อยกว่า) ป้ายสำหรับ 60 นาทีด้วย [" Hluridine อยู่
02 ให้ 0.3% 13H1globin mRNA เป็นได้ไม่ถูกรักษาเซลล์
(ฉัน บรรทัดที่ 1 และตาราง III สาย 1 ตาราง) การตรวจสอบว่า
cordycepin ลดการฟื้นตัวของท่อน (ไม่)
globin mRNA ส่วนลงตัวของอาร์เอ็นเอจากอะดี -และ cordycepin-
เซลล์บำบัดถูก incubated กับ globin 1 " HlcDNA ใน
อัตรา hybridization อย่างอาร์เอ็นเอทั้งสองมีเหมือนกัน
(data not shown) นอกจากนี้ recoveries ของเซลล์รวม
วัดอาร์เอ็นเอ โดย absorbance ที่ 260 nm ได้เหมือนกัน เหล่านี้
ทดลองควบคุมแสดงผล cordycepin ถูก
ไม่ครบกำหนดเพื่อลดการกู้คืนของอาร์เอ็นเอ
ผล (ตารางผม) ระบุ cordycepin ที่อาจห้าม
ใน หรือเร่งของ
สังเคราะห์ globin mRNA ลำดับใหม่ การพยายาม
แยกระหว่างกลไกเหล่านี้ ทดลองคล้าย
ทำ ยกเว้นว่ามีป้ายเซลล์สำหรับสั้น
ช่วง ในการทดลองเบื้องต้น เซลล์ถูกป้ายสำหรับ
10 นาที โดย cordycepin อาร์เอ็นเอถูกวิเคราะห์โดย
electrophoresis ในเจ polyacrylamide ประกอบด้วย formamide;
มากกว่า 90% ของ globin mRNA นิวคลีโอไทด์ลำดับ
ในโมเลกุลสารตั้งต้นที่มีขนาดใหญ่กว่า 10 S4 ตามเหล่านี้
ข้อมูล เลือกเวลาการติดฉลาก 6 นาทีสำหรับบาง
cordycepin ทดลองมากที่สุดของ globin กัมมันตรังสี
mRNA ลำดับจะโมเลกุลสารตั้งต้น ถ้า cordycepin
แบ่งเพิ่มขึ้น (แต่ไม่กำลัง) สาเหตุของ
สังเคราะห์โมเลกุล การลดเปอร์เซ็นต์ของใหม่
กัมมันตรังสี globin mRNA ลำดับควรเพิ่มด้วย
ยาวติดฉลากครั้ง ดังแสดงในตาราง II ร้อยละ
ยับยั้งกัมมันตภาพ globin เฉพาะลำดับมากกว่า
กว่าของอาร์เอ็นเอรวม การยืนยันผลลัพธ์ของตาราง และ
ถูกหลักเดียวกันกับการติดฉลากของ 6 หรือ 30 นาที
ผลลัพธ์นี้ขอบ่งชี้ แต่ไม่ได้ พิสูจน์ cordycepin ที่
ยับยั้ง transcription ของ globin mRNA ลำดับนั้น ไม่
ไม่แยกความ cordycepin ซึ่งทำให้แบ่ง
ในระหว่าง หรือ หลัง transcription ทันที เราไม่สามารถ
คาดการณ์เพิ่มเติมในเรื่องนี้เนื่องจากอัตราการสังเคราะห์
globin mRNA สารตั้งต้นไม่ทราบ จุดสำคัญ
3 L. R. บีช ยกเลิกประกาศข้อมูล
' J. Ross ฉบับในการเตรียมการ
สังเคราะห์อาร์เอ็นเอ (LaTorre และเพอร์รี 1973) เบื้องต้นทดลอง
ดำเนินการเปรียบเทียบผลของการแตกต่าง
cordycepin ความเข้มข้นใน [3H1uridine และ 14C อะมิโนกรด
ประสานเป็นกรด precipitable วัสดุ ที่ 20 pg/ml
* J. Ross และ D. Knecht ฉบับเตรียม
มีการยับยั้งไม่สามารถประสานติดป้าย
กรดอะมิโนในระหว่างช่วงเวลา 50 นาทีรักษา (ฟิก IB) .
หลังจาก 90 นาที cordycepin ลดกรดอะมิโนประสานโดย
เพียง 10% (ตาราง III คอลัมน์ 2 และ 3) บนมืออื่น ๆ การ
ป้าย uridine เป็นอาร์เอ็นเอของถูกห้ามโดยประมาณ
50% (ฟิก IA) ดังนั้น cordycepin ที่ 20 pg/ml
ห้ามการสังเคราะห์อาร์เอ็นเอในครรภ์อ่างเมาส์เลือก
เซลล์ตับ
เพื่อดูผลของ cordycepin ในใหม่สังเคราะห์
globin mRNA ลำดับ เซลล์ MFL ได้ incubated กับ
อะดีหรือ cordycepin ใน 40 นาที ที่ซึ่งเวลา lUH] uridine
เพิ่ม หลังจาก 60 นาทีของการติดฉลาก เซลล์ถูกเก็บเกี่ยว และ
รวมเซลล์อาร์เอ็นเอที่แยก ส่วนของอาร์เอ็นเอถูก
incubated กับ cDNA globin ไม่กำหนดประสาน
13Hlglobin mRNA เป็นลำดับ ตัวแทน
ทดลองแสดงในตาราง I. ประสานเป็นอาร์เอ็นเอรวม,
ตามฝนกรด trichloroacetic ถูกลด
69% cordycepin และจดทะเบียนเป็น globin เฉพาะ
ลำดับถูกลดลง 91% ได้รับผลลัพธ์ที่คล้าย
ในการทดลองอื่น ๆ 3 ใช้ 60 นาทีระยะเวลาการติดฉลากR
ดังนั้น ในระหว่างรอบระยะเวลาการติดฉลาก l h หน้า
cordycepin การสังเคราะห์ใหม่ globin mRNA ลำดับ
ถูกห้ามไปขอบเขตยิ่งกว่ามีอาร์เอ็นเอของเซลล์รวม
ลำดับนั้น อะดีบ่อยนั่นเองไม่สำคัญ
ผล globin mRNA สังเคราะห์ตั้งแต่เซลล์รักษาอะดี
(20 pg/ml หรือน้อยกว่า) ป้ายสำหรับ 60 นาทีด้วย [" Hluridine อยู่
02 ให้ 0.3% 13H1globin mRNA เป็นได้ไม่ถูกรักษาเซลล์
(ฉัน บรรทัดที่ 1 และตาราง III สาย 1 ตาราง) การตรวจสอบว่า
cordycepin ลดการฟื้นตัวของท่อน (ไม่)
globin mRNA ส่วนลงตัวของอาร์เอ็นเอจากอะดี -และ cordycepin-
เซลล์บำบัดถูก incubated กับ globin 1 " HlcDNA ใน
อัตรา hybridization อย่างอาร์เอ็นเอทั้งสองมีเหมือนกัน
(data not shown) นอกจากนี้ recoveries ของเซลล์รวม
วัดอาร์เอ็นเอ โดย absorbance ที่ 260 nm ได้เหมือนกัน เหล่านี้
ทดลองควบคุมแสดงผล cordycepin ถูก
ไม่ครบกำหนดเพื่อลดการกู้คืนของอาร์เอ็นเอ
ผล (ตารางผม) ระบุ cordycepin ที่อาจห้าม
ใน หรือเร่งของ
สังเคราะห์ globin mRNA ลำดับใหม่ การพยายาม
แยกระหว่างกลไกเหล่านี้ ทดลองคล้าย
ทำ ยกเว้นว่ามีป้ายเซลล์สำหรับสั้น
ช่วง ในการทดลองเบื้องต้น เซลล์ถูกป้ายสำหรับ
10 นาที โดย cordycepin อาร์เอ็นเอถูกวิเคราะห์โดย
electrophoresis ในเจ polyacrylamide ประกอบด้วย formamide;
มากกว่า 90% ของ globin mRNA นิวคลีโอไทด์ลำดับ
ในโมเลกุลสารตั้งต้นที่มีขนาดใหญ่กว่า 10 S4 ตามเหล่านี้
ข้อมูล เลือกเวลาการติดฉลาก 6 นาทีสำหรับบาง
cordycepin ทดลองมากที่สุดของ globin กัมมันตรังสี
mRNA ลำดับจะโมเลกุลสารตั้งต้น ถ้า cordycepin
แบ่งเพิ่มขึ้น (แต่ไม่กำลัง) สาเหตุของ
สังเคราะห์โมเลกุล การลดเปอร์เซ็นต์ของใหม่
กัมมันตรังสี globin mRNA ลำดับควรเพิ่มด้วย
ยาวติดฉลากครั้ง ดังแสดงในตาราง II ร้อยละ
ยับยั้งกัมมันตภาพ globin เฉพาะลำดับมากกว่า
กว่าของอาร์เอ็นเอรวม การยืนยันผลลัพธ์ของตาราง และ
ถูกหลักเดียวกันกับการติดฉลากของ 6 หรือ 30 นาที
ผลลัพธ์นี้ขอบ่งชี้ แต่ไม่ได้ พิสูจน์ cordycepin ที่
ยับยั้ง transcription ของ globin mRNA ลำดับนั้น ไม่
ไม่แยกความ cordycepin ซึ่งทำให้แบ่ง
ในระหว่าง หรือ หลัง transcription ทันที เราไม่สามารถ
คาดการณ์เพิ่มเติมในเรื่องนี้เนื่องจากอัตราการสังเคราะห์
globin mRNA สารตั้งต้นไม่ทราบ จุดสำคัญ
3 L. R. บีช ยกเลิกประกาศข้อมูล
' J. Ross ฉบับในการเตรียมการ
การแปล กรุณารอสักครู่..
ในปริมาณเพียงพอ cordycepin ยับยั้งโปรตีนรวมทั้ง
การสังเคราะห์อาร์เอ็นเอ (LaTorre และเพอร์รี่, 1973) การทดลองเบื้องต้น
ได้ดำเนินการเพื่อเปรียบเทียบผลกระทบที่แตกต่างกันของ
ความเข้มข้นใน cordycepin [3H1uridine และ 14C-กรดอะมิโน
รวมตัวกันเป็นวัสดุกรด precipitable 20 พิโคกรัม / มล.
* เจรอสส์และ D Knecht ต้นฉบับในการเตรียมความพร้อม
ไม่มีการตรวจพบการยับยั้งการรวมตัวกันของของป้าย
กรดอะมิโนในระหว่างช่วงเวลาการรักษา 50 นาที (รูปที่ IB)
หลังจาก 90 นาที cordycepin ลดกรดอะมิโนที่รวมตัวกัน โดย
เพียง 10% (ตารางที่สามคอลัมน์ที่ 2 และ 3) ในขณะที่การ
ดูดซึมของ uridine ระบุว่าเป็นอาร์เอ็นเอถูกยับยั้งโดยประมาณ
50% (รูป IA) ดังนั้น cordycepin ที่ 20 พิโคกรัม / ml
การสังเคราะห์อาร์เอ็นเอยับยั้งการคัดเลือกในเมาส์เลี้ยงทารกในครรภ์
เซลล์ตับ
เพื่อตรวจสอบผลกระทบของ cordycepin ที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่
ลำดับ globin mRNA เซลล์ MFL บ่มด้วย
อะดีโนซีนหรือ cordycepin 40 นาทีเวลาที่ Luh] uridine
ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจาก 60 นาทีของการติดฉลากเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวและ
อาร์เอ็นเอของเซลล์รวมแยก เป็นส่วนหนึ่งของอาร์เอ็นเอที่ได้รับการ
บ่มด้วยยีน globin ไม่มีชื่อกำกับเพื่อตรวจสอบการรวมตัวกัน
เป็นลำดับ 13Hlglobin mRNA ตัวแทน
การทดลองแสดงในตารางที่ I. จดทะเบียนเป็นอาร์เอ็นเอทั้งหมด
ที่กำหนดโดยฝนกรดไตรคลอโรได้รับการลดลง
โดย 69% ด้วย cordycepin และการรวมตัวกันเป็น globin เฉพาะ
ลำดับลดลง 91% ผลที่คล้ายกันที่ได้รับ
ในการทดลองสามอื่น ๆ โดยใช้ 60 นาทีการติดฉลาก periods.R
ดังนั้นในช่วงระยะเวลาการติดฉลาก lh ในการปรากฏตัวของ
cordycepin, สังเคราะห์ใหม่ลำดับ globin mRNA
ถูกยับยั้งในระดับสูงกว่าที่เป็นอาร์เอ็นเอของเซลล์รวม
ลำดับ adenosine ภายนอกกระทำอย่างมีนัยสำคัญไม่มี
ผลกระทบต่อ globin สังเคราะห์ mRNA ตั้งแต่เซลล์ adenosine รับการรักษา
(20 พิโคกรัม / มล. หรือน้อยกว่า) ที่มีข้อความเป็นเวลา 60 นาทีด้วย ["Hluridine มี
0.2-0.3% 13H1globin mRNA ขณะที่เซลล์ได้รับการรักษา
(ตารางที่ฉันสาย 1 และตารางที่สามสาย 1) เพื่อตรวจสอบว่า
cordycepin ลดลงการฟื้นตัวของรัฐอย่างต่อเนื่อง (ไม่มีชื่อ)
globin mRNA, หารของอาร์เอ็นเอจาก adenosine และ cordycepin-
เซลล์ได้รับการรักษาได้รับการบ่มด้วย globin 1 "HlcDNA
อัตราการผสมของทั้งสองตัวอย่าง RNA เหมือนกัน
(ไม่ได้แสดงข้อมูล) นอกจากนี้การกลับคืนของเซลล์รวม
อาร์เอ็นเอโดยวัดจากการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรได้เหมือนกัน เหล่านี้
การควบคุมการทดลองแสดงให้เห็นว่าผลกระทบที่เกิด cordycepin ก็
ไม่ได้เกิดจากการลดลงการฟื้นตัวของ RNA
ผล (ตารางที่ I) ชี้ให้เห็นว่า cordycepin ทั้งยับยั้ง
การถอดความหรือเร่งการสลาย
สังเคราะห์ใหม่ลำดับ globin mRNA ในความพยายามที่จะ
แยกความแตกต่างระหว่างกลไกเหล่านี้การทดลองที่คล้ายกัน
ได้รับการดำเนินการยกเว้นว่าเซลล์ที่ได้รับการติดฉลากสำหรับสั้น
ช่วง ในการทดลองเบื้องต้นเซลล์ถูกติดฉลากสำหรับ
10 นาทีโดยไม่ต้อง cordycepin และอาร์เอ็นเอที่ถูกวิเคราะห์โดย
ข่าวคราวในเจล polyacrylamide formamide ที่มี;
มากกว่า 90% ของลำดับเบส globin mRNA
เป็นปูชนียบุคคลในโมเลกุลมีขนาดใหญ่กว่า 10 S4 เหล่านี้บนพื้นฐานของ
ข้อมูล เวลาการติดฉลากจาก 6 นาทีเป็นทางเลือกสำหรับบางส่วนของ
การทดลองเพื่อ cordycepin ว่าส่วนใหญ่ของ globin กัมมันตรังสี
ลำดับ mRNA จะอยู่ในโมเลกุลของสารตั้งต้น หาก cordycepin
เกิดที่เพิ่มขึ้น (แต่ไม่ทันที) รายละเอียดของ
โมเลกุลที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ลดลงร้อยละของ
กัมมันตรังสีลำดับ mRNA globin ควรเพิ่มขึ้นด้วย
การติดฉลากอีกครั้ง ดังแสดงในตารางที่สองที่ร้อยละ
ยับยั้งกัมมันตรังสีลำดับ globin เฉพาะเป็นมากขึ้น
กว่าที่ของอาร์เอ็นเอทั้งหมดยืนยันผลของตารางที่ผมและ
เป็นหลักเช่นเดียวกับฉลากครั้งจาก 6 หรือ 30 นาที
ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นอย่างมาก แต่ไม่ได้พิสูจน์ cordycepin ที่
ยับยั้งการถอดความของ globin ลำดับ mRNA มันไม่
ได้รวมเป็นไปได้ที่ทำให้เกิดการสลาย cordycepin
ในระหว่างหรือทันทีหลังจากที่การถอดความ เราไม่สามารถที่จะ
คาดการณ์เพิ่มเติมเกี่ยวกับเรื่องนี้ตั้งแต่อัตราการสังเคราะห์
สารตั้งต้น globin mRNA ไม่เป็นที่รู้จัก ที่สำคัญจุด
ที่ 3 LR หาดข้อมูลไม่ได้
' เจรอสส์ที่เขียนด้วยลายมือในการเตรียม
การสังเคราะห์อาร์เอ็นเอ (LaTorre และเพอร์รี่, 1973) การทดลองเบื้องต้น
ได้ดำเนินการเพื่อเปรียบเทียบผลกระทบที่แตกต่างกันของ
ความเข้มข้นใน cordycepin [3H1uridine และ 14C-กรดอะมิโน
รวมตัวกันเป็นวัสดุกรด precipitable 20 พิโคกรัม / มล.
* เจรอสส์และ D Knecht ต้นฉบับในการเตรียมความพร้อม
ไม่มีการตรวจพบการยับยั้งการรวมตัวกันของของป้าย
กรดอะมิโนในระหว่างช่วงเวลาการรักษา 50 นาที (รูปที่ IB)
หลังจาก 90 นาที cordycepin ลดกรดอะมิโนที่รวมตัวกัน โดย
เพียง 10% (ตารางที่สามคอลัมน์ที่ 2 และ 3) ในขณะที่การ
ดูดซึมของ uridine ระบุว่าเป็นอาร์เอ็นเอถูกยับยั้งโดยประมาณ
50% (รูป IA) ดังนั้น cordycepin ที่ 20 พิโคกรัม / ml
การสังเคราะห์อาร์เอ็นเอยับยั้งการคัดเลือกในเมาส์เลี้ยงทารกในครรภ์
เซลล์ตับ
เพื่อตรวจสอบผลกระทบของ cordycepin ที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่
ลำดับ globin mRNA เซลล์ MFL บ่มด้วย
อะดีโนซีนหรือ cordycepin 40 นาทีเวลาที่ Luh] uridine
ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจาก 60 นาทีของการติดฉลากเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวและ
อาร์เอ็นเอของเซลล์รวมแยก เป็นส่วนหนึ่งของอาร์เอ็นเอที่ได้รับการ
บ่มด้วยยีน globin ไม่มีชื่อกำกับเพื่อตรวจสอบการรวมตัวกัน
เป็นลำดับ 13Hlglobin mRNA ตัวแทน
การทดลองแสดงในตารางที่ I. จดทะเบียนเป็นอาร์เอ็นเอทั้งหมด
ที่กำหนดโดยฝนกรดไตรคลอโรได้รับการลดลง
โดย 69% ด้วย cordycepin และการรวมตัวกันเป็น globin เฉพาะ
ลำดับลดลง 91% ผลที่คล้ายกันที่ได้รับ
ในการทดลองสามอื่น ๆ โดยใช้ 60 นาทีการติดฉลาก periods.R
ดังนั้นในช่วงระยะเวลาการติดฉลาก lh ในการปรากฏตัวของ
cordycepin, สังเคราะห์ใหม่ลำดับ globin mRNA
ถูกยับยั้งในระดับสูงกว่าที่เป็นอาร์เอ็นเอของเซลล์รวม
ลำดับ adenosine ภายนอกกระทำอย่างมีนัยสำคัญไม่มี
ผลกระทบต่อ globin สังเคราะห์ mRNA ตั้งแต่เซลล์ adenosine รับการรักษา
(20 พิโคกรัม / มล. หรือน้อยกว่า) ที่มีข้อความเป็นเวลา 60 นาทีด้วย ["Hluridine มี
0.2-0.3% 13H1globin mRNA ขณะที่เซลล์ได้รับการรักษา
(ตารางที่ฉันสาย 1 และตารางที่สามสาย 1) เพื่อตรวจสอบว่า
cordycepin ลดลงการฟื้นตัวของรัฐอย่างต่อเนื่อง (ไม่มีชื่อ)
globin mRNA, หารของอาร์เอ็นเอจาก adenosine และ cordycepin-
เซลล์ได้รับการรักษาได้รับการบ่มด้วย globin 1 "HlcDNA
อัตราการผสมของทั้งสองตัวอย่าง RNA เหมือนกัน
(ไม่ได้แสดงข้อมูล) นอกจากนี้การกลับคืนของเซลล์รวม
อาร์เอ็นเอโดยวัดจากการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรได้เหมือนกัน เหล่านี้
การควบคุมการทดลองแสดงให้เห็นว่าผลกระทบที่เกิด cordycepin ก็
ไม่ได้เกิดจากการลดลงการฟื้นตัวของ RNA
ผล (ตารางที่ I) ชี้ให้เห็นว่า cordycepin ทั้งยับยั้ง
การถอดความหรือเร่งการสลาย
สังเคราะห์ใหม่ลำดับ globin mRNA ในความพยายามที่จะ
แยกความแตกต่างระหว่างกลไกเหล่านี้การทดลองที่คล้ายกัน
ได้รับการดำเนินการยกเว้นว่าเซลล์ที่ได้รับการติดฉลากสำหรับสั้น
ช่วง ในการทดลองเบื้องต้นเซลล์ถูกติดฉลากสำหรับ
10 นาทีโดยไม่ต้อง cordycepin และอาร์เอ็นเอที่ถูกวิเคราะห์โดย
ข่าวคราวในเจล polyacrylamide formamide ที่มี;
มากกว่า 90% ของลำดับเบส globin mRNA
เป็นปูชนียบุคคลในโมเลกุลมีขนาดใหญ่กว่า 10 S4 เหล่านี้บนพื้นฐานของ
ข้อมูล เวลาการติดฉลากจาก 6 นาทีเป็นทางเลือกสำหรับบางส่วนของ
การทดลองเพื่อ cordycepin ว่าส่วนใหญ่ของ globin กัมมันตรังสี
ลำดับ mRNA จะอยู่ในโมเลกุลของสารตั้งต้น หาก cordycepin
เกิดที่เพิ่มขึ้น (แต่ไม่ทันที) รายละเอียดของ
โมเลกุลที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ลดลงร้อยละของ
กัมมันตรังสีลำดับ mRNA globin ควรเพิ่มขึ้นด้วย
การติดฉลากอีกครั้ง ดังแสดงในตารางที่สองที่ร้อยละ
ยับยั้งกัมมันตรังสีลำดับ globin เฉพาะเป็นมากขึ้น
กว่าที่ของอาร์เอ็นเอทั้งหมดยืนยันผลของตารางที่ผมและ
เป็นหลักเช่นเดียวกับฉลากครั้งจาก 6 หรือ 30 นาที
ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นอย่างมาก แต่ไม่ได้พิสูจน์ cordycepin ที่
ยับยั้งการถอดความของ globin ลำดับ mRNA มันไม่
ได้รวมเป็นไปได้ที่ทำให้เกิดการสลาย cordycepin
ในระหว่างหรือทันทีหลังจากที่การถอดความ เราไม่สามารถที่จะ
คาดการณ์เพิ่มเติมเกี่ยวกับเรื่องนี้ตั้งแต่อัตราการสังเคราะห์
สารตั้งต้น globin mRNA ไม่เป็นที่รู้จัก ที่สำคัญจุด
ที่ 3 LR หาดข้อมูลไม่ได้
' เจรอสส์ที่เขียนด้วยลายมือในการเตรียม
การแปล กรุณารอสักครู่..
ที่ปริมาณที่เพียงพอ คอร์ไดเซพินยับยั้งโปรตีนเช่นเดียวกับ
การสังเคราะห์ RNA ( Latorre และเพอร์รี่ , 1973 ) การทดลองเบื้องต้น
) มีการเปรียบเทียบผลของความเข้มข้น คอร์ไดเซพินแตกต่างกัน
บน [ 3h1uridine 14c กรดอะมิโนและกรด precipitable
เข้าไปในวัสดุ ที่ 20 pg / ml
* J . Ross และ เน็กต์ , เลข
ในการเตรียมไม่มีการตรวจพบการยับยั้งการติดป้าย
กรดอะมิโนระหว่างการรักษาช่วง 50 นาที ( รูปที่ 2A ) .
หลังจาก 90 นาที คอร์ไดเซพินลดกรดอะมิโนรวมตัวกันโดย
เพียง 10% ( คอลัมน์ตารางที่ 1 , 2 และ 3 ) บนมืออื่น ๆ ,
การติดป้ายยูริดีนเป็น RNA ถูกยับยั้งโดยประมาณ 50 %
( รูปที่ IA ) ดังนั้น คอร์ไดเซพิน 20 pg / ml
เลือกยับยั้งการสังเคราะห์ RNA ในเซลล์เพาะเลี้ยงของตับเมาส์
.
เพื่อตรวจสอบผลของการสังเคราะห์โกลบินยีนคอร์ไดเซพินบน
ใหม่ดับ MFL เซลล์มีการแยก
อะดีโนซีน หรือคอร์ไดเซพิน 40 นาที ซึ่งเป็นเวลาที่ ลุ้ฮ์ ] ยูริดีน
ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจาก 60 นาทีของการติดฉลากเซลล์เก็บ
RNA เซลล์รวมแยก ส่วนใน RNA คือ
โกลบินยีนแยกใกล้เคียงเพื่อตรวจสอบการ 13hlglobin mRNA
เป็นลำดับ ตัวแทน
ทดลองแสดงดังตารางที่ผมเข้าไปในอาร์เอ็นเอรวม
กำหนดโดยกรดไตรคลอโรอะซิติกตกตะกอนลดลง
69 % กับ คอร์ไดเซพินและรวมเข้าไว้ในลำดับเฉพาะ
โกลบินลดลง 91% ผลที่คล้ายกันได้รับ
3 การทดลองอื่น ๆการใช้ฉลากระยะเวลา 60 นาที R
ดังนั้นในช่วงระยะเวลา l-h ฉลากต่อหน้า
คอร์ไดเซพิน , โกลบินยีนสังเคราะห์ใหม่ลำดับ
ถูกยับยั้งในขอบเขตที่มากกว่าเป็นลำดับเซลล์อาร์เอ็นเอ
รวม และอะดีโนซีนจากภายนอกนั่นเอง ไม่พบผลการสังเคราะห์ mRNA ในโกลบินตั้งแต่อะดีโนซีนรักษาเซลล์
( 20 pg / ml หรือน้อยกว่า ) ป้าย 60 นาที [ " hluridine ที่มีอยู่
01 0.3% 13h1globin mRNA ที่ได้รักษาเซลล์
( โต๊ะผม สาย 1 และ ตารางที่ 3 บรรทัดที่ 1 ) เพื่อตรวจสอบว่า
คอร์ไดเซพินลดการกู้คืนสถานะคงตัว ( ใกล้เคียงกัน )
โกลบินยีนเป็นส่วนลงตัวของ RNA จากอะดีโนซีน - คอร์ไดเซพิน -
ถือว่าเซลล์ถูกบ่มกับโกลบิน 1 " hlcdna .
ราคาของลูกผสมของ RNA จำนวนเหมือนกัน
( ข้อมูลไม่แสดง ) นอกจากนี้การรวมเซลล์เมื่อวัดด้วยค่า
RNA ที่ 260 nm อยู่เหมือนกัน การทดลอง
ควบคุมเหล่านี้พบว่า คอร์ไดเซพินผลคือ
ไม่ได้เกิดจากการฟื้นตัวของ RNA ลดลง .
ผลลัพธ์ ( โต๊ะผม ) พบว่า คอร์ไดเซพินเหมือนกันยับยั้ง
ถอดความหรือเร่งการสลายของโกลบินยีน
สังเคราะห์ขึ้นใหม่ดังนี้ ในความพยายามที่จะ
แยกแยะระหว่างกลไกเหล่านี้มีการทดลองที่คล้ายกัน
ได้ดําเนินการ ยกเว้นที่เซลล์มีการติดป้ายให้สั้น
ในการทดลองเบื้องต้น เซลล์เป็นข้อความสำหรับ
10 นาทีโดยไม่คอร์ไดเซพินและ RNA โดยใช้
electrophoresis ใน Formamide มีอะคริลาไมด์เจล ;
มากกว่า 90% ของโกลบินยีน mRNA ลำดับ
เป็นสารตั้งต้นโมเลกุลขนาดใหญ่กว่า 10 S4 ตามข้อมูลเหล่านี้
,เป็นฉลากเวลา 6 นาที ถูกเลือกมาบางส่วนของการทดลองเพื่อให้มากที่สุดของคอร์ไดเซพิน
ลำดับยีนโกลบินกัมมันตรังสีจะเป็นสารโมเลกุล ถ้า คอร์ไดเซพิน
ทำให้เพิ่มขึ้น ( แต่ไม่ใช่ทันที ) การสลาย
สังเคราะห์โมเลกุลใหม่ , ร้อยละการลดลงของสารกัมมันตรังสีโกลบ mRNA ลำดับควรเพิ่ม
ยาวด้วยการติดฉลากครั้ง ดังแสดงในตารางที่ 2โดยร้อยละ
การยับยั้งกัมมันตรังสีลำดับเฉพาะโกลบินได้มากขึ้น
กว่าของอาร์เอ็นเอทั้งหมด ยืนยันผลของโต๊ะผมและ
เป็นหลักเดียวกันกับการติดฉลากครั้งที่ 6 หรือ 30 นาที
ผลนี้ชี้ให้เห็นอย่างชัดเจนถึง แต่ไม่ได้พิสูจน์ว่า คอร์ไดเซพินยับยั้งการถอดรหัสจาก mRNA
: ลำดับ มันไม่ได้ตัดความเป็นไปได้ว่า คอร์ไดเซพิน
สาเหตุ รายละเอียดในระหว่างหรือทันทีหลังจากการ transcription เราไม่สามารถคาดการณ์ต่อไป
เรื่องนี้ตั้งแต่อัตราการสังเคราะห์โกลบินยีน
สารตั้งต้นคือ ไม่รู้จัก สิ่งสำคัญ
3 L . R . ชายหาด , ข้อมูลเผยแพร่ .
' J . Ross , เลขในการเตรียม
การสังเคราะห์ RNA ( Latorre และเพอร์รี่ , 1973 ) การทดลองเบื้องต้น
) มีการเปรียบเทียบผลของความเข้มข้น คอร์ไดเซพินแตกต่างกัน
บน [ 3h1uridine 14c กรดอะมิโนและกรด precipitable
เข้าไปในวัสดุ ที่ 20 pg / ml
* J . Ross และ เน็กต์ , เลข
ในการเตรียมไม่มีการตรวจพบการยับยั้งการติดป้าย
กรดอะมิโนระหว่างการรักษาช่วง 50 นาที ( รูปที่ 2A ) .
หลังจาก 90 นาที คอร์ไดเซพินลดกรดอะมิโนรวมตัวกันโดย
เพียง 10% ( คอลัมน์ตารางที่ 1 , 2 และ 3 ) บนมืออื่น ๆ ,
การติดป้ายยูริดีนเป็น RNA ถูกยับยั้งโดยประมาณ 50 %
( รูปที่ IA ) ดังนั้น คอร์ไดเซพิน 20 pg / ml
เลือกยับยั้งการสังเคราะห์ RNA ในเซลล์เพาะเลี้ยงของตับเมาส์
.
เพื่อตรวจสอบผลของการสังเคราะห์โกลบินยีนคอร์ไดเซพินบน
ใหม่ดับ MFL เซลล์มีการแยก
อะดีโนซีน หรือคอร์ไดเซพิน 40 นาที ซึ่งเป็นเวลาที่ ลุ้ฮ์ ] ยูริดีน
ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจาก 60 นาทีของการติดฉลากเซลล์เก็บ
RNA เซลล์รวมแยก ส่วนใน RNA คือ
โกลบินยีนแยกใกล้เคียงเพื่อตรวจสอบการ 13hlglobin mRNA
เป็นลำดับ ตัวแทน
ทดลองแสดงดังตารางที่ผมเข้าไปในอาร์เอ็นเอรวม
กำหนดโดยกรดไตรคลอโรอะซิติกตกตะกอนลดลง
69 % กับ คอร์ไดเซพินและรวมเข้าไว้ในลำดับเฉพาะ
โกลบินลดลง 91% ผลที่คล้ายกันได้รับ
3 การทดลองอื่น ๆการใช้ฉลากระยะเวลา 60 นาที R
ดังนั้นในช่วงระยะเวลา l-h ฉลากต่อหน้า
คอร์ไดเซพิน , โกลบินยีนสังเคราะห์ใหม่ลำดับ
ถูกยับยั้งในขอบเขตที่มากกว่าเป็นลำดับเซลล์อาร์เอ็นเอ
รวม และอะดีโนซีนจากภายนอกนั่นเอง ไม่พบผลการสังเคราะห์ mRNA ในโกลบินตั้งแต่อะดีโนซีนรักษาเซลล์
( 20 pg / ml หรือน้อยกว่า ) ป้าย 60 นาที [ " hluridine ที่มีอยู่
01 0.3% 13h1globin mRNA ที่ได้รักษาเซลล์
( โต๊ะผม สาย 1 และ ตารางที่ 3 บรรทัดที่ 1 ) เพื่อตรวจสอบว่า
คอร์ไดเซพินลดการกู้คืนสถานะคงตัว ( ใกล้เคียงกัน )
โกลบินยีนเป็นส่วนลงตัวของ RNA จากอะดีโนซีน - คอร์ไดเซพิน -
ถือว่าเซลล์ถูกบ่มกับโกลบิน 1 " hlcdna .
ราคาของลูกผสมของ RNA จำนวนเหมือนกัน
( ข้อมูลไม่แสดง ) นอกจากนี้การรวมเซลล์เมื่อวัดด้วยค่า
RNA ที่ 260 nm อยู่เหมือนกัน การทดลอง
ควบคุมเหล่านี้พบว่า คอร์ไดเซพินผลคือ
ไม่ได้เกิดจากการฟื้นตัวของ RNA ลดลง .
ผลลัพธ์ ( โต๊ะผม ) พบว่า คอร์ไดเซพินเหมือนกันยับยั้ง
ถอดความหรือเร่งการสลายของโกลบินยีน
สังเคราะห์ขึ้นใหม่ดังนี้ ในความพยายามที่จะ
แยกแยะระหว่างกลไกเหล่านี้มีการทดลองที่คล้ายกัน
ได้ดําเนินการ ยกเว้นที่เซลล์มีการติดป้ายให้สั้น
ในการทดลองเบื้องต้น เซลล์เป็นข้อความสำหรับ
10 นาทีโดยไม่คอร์ไดเซพินและ RNA โดยใช้
electrophoresis ใน Formamide มีอะคริลาไมด์เจล ;
มากกว่า 90% ของโกลบินยีน mRNA ลำดับ
เป็นสารตั้งต้นโมเลกุลขนาดใหญ่กว่า 10 S4 ตามข้อมูลเหล่านี้
,เป็นฉลากเวลา 6 นาที ถูกเลือกมาบางส่วนของการทดลองเพื่อให้มากที่สุดของคอร์ไดเซพิน
ลำดับยีนโกลบินกัมมันตรังสีจะเป็นสารโมเลกุล ถ้า คอร์ไดเซพิน
ทำให้เพิ่มขึ้น ( แต่ไม่ใช่ทันที ) การสลาย
สังเคราะห์โมเลกุลใหม่ , ร้อยละการลดลงของสารกัมมันตรังสีโกลบ mRNA ลำดับควรเพิ่ม
ยาวด้วยการติดฉลากครั้ง ดังแสดงในตารางที่ 2โดยร้อยละ
การยับยั้งกัมมันตรังสีลำดับเฉพาะโกลบินได้มากขึ้น
กว่าของอาร์เอ็นเอทั้งหมด ยืนยันผลของโต๊ะผมและ
เป็นหลักเดียวกันกับการติดฉลากครั้งที่ 6 หรือ 30 นาที
ผลนี้ชี้ให้เห็นอย่างชัดเจนถึง แต่ไม่ได้พิสูจน์ว่า คอร์ไดเซพินยับยั้งการถอดรหัสจาก mRNA
: ลำดับ มันไม่ได้ตัดความเป็นไปได้ว่า คอร์ไดเซพิน
สาเหตุ รายละเอียดในระหว่างหรือทันทีหลังจากการ transcription เราไม่สามารถคาดการณ์ต่อไป
เรื่องนี้ตั้งแต่อัตราการสังเคราะห์โกลบินยีน
สารตั้งต้นคือ ไม่รู้จัก สิ่งสำคัญ
3 L . R . ชายหาด , ข้อมูลเผยแพร่ .
' J . Ross , เลขในการเตรียม
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- reasoning
- คำศัพท์
- สถานที่ที่ผาเสวย
- มัน ยาก จังIt is hard to take.
- ไม่ก้าวหน้าในอาชีพ
- The company's portable music machine App
- 'I have never seen a black tulip,' Isaac
- เธอต้องทำงานรึป่าว
- failure
- ฉันคงจะต้องไปแล้ว ลาก่อนไดอารี่ของฉัน
- just dont message him
- i have math learning disability
- ฝึกฝนทักษะการเรียน
- สาเหตุการเกิดโรคหัวใจมาจากเศรษฐกิจที่เจร
- Forex CFD Commodities Futures/Options Bo
- สงสัยไม่มีใครอยู่
- If I rich,I will buy everything at to li
- bye take
- แกงส้ม ทำมาจากเครื่องแกงส้มผสมกับปลาช่อน
- I think you havent to be sorry
- คุณพอมีเวลาว่างไหม
- ดูเหมือนเธอเป็นคนโรแมนติก
- Starving! I made a sandwich to eat for l
- คุณเลิกงานหรือยัง?
