Isoform SrtA ของ Staphylococcus หมอเทศข้างลาย sortase ลทรานสเฟอเรสรับผิดชอบแนบ covalent virulence- และ
สัมพันธ์สนามวิลเลียมเปบทิโดไกลแคนแบคทีเรีย Sortase ใช้ได้ 2, undecaprenol - pyrophosphoryl-
MurNAc (GlcNAc) -อลา - D-isoGlu-Lys (e-Gly5) - D -อลา - D -อลา (แบบแยกสาขาไขมัน II) และวิลเลียม secreted ประกอบด้วยนำสูง
ลำดับ LPXTG ใกล้เทอร์มินิของ C SrtA พร้อมแยกออกพันธบัตร Thr Gly ของโปรตีนที่ประกอบด้วย LPXTG และฟอร์ม
amide พันธบัตรใหม่ที่ มีกลุ่มอะมิโน nucleophilic ของส่วน Gly5 ของ II ไขมันแบบแยกสาขา anchoring โปรตีนนี้คีย์
ปานกลางที่ต่อ polymerized เป็นเปบทิโดไกลแคน ที่นี่เราแสดงที่รายงานกิจกรรมการชุบ fluorescence
assays สำหรับ SrtA อาจมี fluorescence เครื่องกรองภายในผลการชุบ ในไฮเพอร์โบลิก่อนกำหนดความเร็วเทียบกับ
พื้นผิวโพรไฟล์และ underestimates ของ kcat พารามิเตอร์จริงเดิม ๆ และกม.เราจึงคิดค้นที่ไม่ต่อเนื่องประสิทธิภาพสูง
เหลว chromatography (HPLC) -ใช้ทดสอบปฏิกิริยา SrtA ที่ใช้วัสดุเดียวกับที่ใช้ในการตรวจสอบการ
fluorescence ชุบทดสอบ: Gly5 และ Abz-LPETG-หลักสูตร Dap (Dnp) -NH2 Fluorescence หรือ UV ตรวจโดยใช้พื้นผิวเหล่านี้อำนวยความสะดวก
แยกวิเคราะห์ทั้งอย่างไร acylation และ transpeptidation ขั้นตอนของปฏิกิริยา เนื่องจากทำ HPLC ใช้
คอลัมน์วิเคราะห์กระแสอย่างรวดเร็ว (< รัน 8 นาที), ใช้อัตราความเร็วสูงนี้วิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์ของ SrtA พื้นผิว specificity,
กลไกเดิม ๆ และยับยั้งก็เป็นไปได้ เปิดเผยวิเคราะห์เดิม ๆ ที่ใช้วิเคราะห์ HPLC ที่พารามิเตอร์เดิม ๆ สำหรับ
SrtA กับ Abz-LPETG-หลักสูตร Dap (Dnp) -NH2 จะมม. 5.5 กิโลเมตรและ 0.27 s 1 สำหรับ kcat กำหนดให้ 140 Km สำหรับ Gly5 lM.
ค่าเหล่านี้แทนการเพิ่ม 300-fold Km สำหรับพื้นผิว LPXTG และเพิ่ม 12,000-fold ใน kcat มากกว่าเอกสารประกอบการรายงาน
ค่า แนะนำว่า SrtA เพิ่มเติมเอนไซม์แข็งแกร่งกว่าวิเคราะห์ก่อนหน้านี้ระบุ
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)