DNA Extraction and Isolation:The pr

DNA Extraction and Isolation:
The protocol reported by Doyle & Doyle CTAB method (1987) was employed with following modification: Take
50-60mg of fresh leaves of okra and grinded with liquid nitrogen, after thawing ground the sample in mortar with a
preheated CTAB extraction buffer (1.5ml/sample) with 0.2% 2-betamercaptoehanol (Table 1). Incubate at 650C for
1 hour, after that add 1.5μL of RNase and incubate at 370C for 20 min. Centrifuge at 12000 rpm for 10 min to pellet
the debris then add equal volume of Chloroform: Isoamyl alcohol (24:1 v/v) to the supernatant and gently vortex for
10 min and centrifuge 13000 rpm for 10 min. Transfer the supernatant into 0.7 volume of ice-cold isopropanol and
0.15 volume ammonium acetate to precipitate DNA at -200C for 30 min.Washing done twice by adding 500μL of
70% chilled ethanol to remove ions and then from absolute ethanol. Centrifuge at 13000 rpm for 1 min to pellet the
DNA, then air dry and re-suspend in 50μL of TE buffer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอและแยก:โพรโทคอลรายงาน โดยวิธี CTAB ดอยล์และดอยล์ (1987) ถูกจ้าง ด้วยปรับเปลี่ยนต่อไปนี้: ใช้50-60 มิลลิกรัมอาหารสดใบของกระเจี๊ยบเขียว และ grinded ด้วยไนโตรเจนเหลว หลัง thawing ดินตัวอย่างในปูนกับการต่ำ CTAB แยกบัฟเฟอร์ (1.5 ml/ตัว อย่าง) กับ 0.2% 2-betamercaptoehanol (ตารางที่ 1) ฟักที่ 650C สำหรับ1 ชั่วโมง หลังจากนั้นเพิ่ม 1.5μL ของ RNase และฟักที่ 370 C สำหรับ 20 นาทีเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 rpm สำหรับ 10 นาทีไปยังเม็ดกับเศษนั้นเท่ากับปริมาตรของคลอโรฟอร์ม: Isoamyl แอลกอฮอล์ (24:1 v/v) supernatant และเบา ๆ vortex สำหรับเครื่องหมุนเหวี่ยง 13000 rpm สำหรับ 10 นาทีและ 10 นาทีโอน supernatant ที่เป็นปริมาตร 0.7 ของ isopropanol ฉ่ำ และacetate แอมโมเนียปริมาณ 0.15 การ precipitate ดีเอ็นเอที่-200 C สำหรับ 30 นาที ทำซักสองครั้ง โดยการเพิ่ม 500μL ของเอทานอล 70% แช่เอาประจุและ จากเอทานอลที่สมบูรณ์แล้ว เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 13000 รอบต่อนาทีใน 1 นาทีให้เม็ดดีเอ็น เอ แล้วอากาศแห้ง และการระงับใน 50μL บัฟเฟอร์ TE

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอการสกัดและการแยก:
โปรโตคอลรายงานโดยดอยล์และวิธี CTAB ดอยล์ (1987) ได้รับการจ้างงานที่มีการปรับเปลี่ยนต่อไปนี้: ใช้
50-60mg
ใบสดของกระเจี๊ยบเขียวและบดด้วยไนโตรเจนเหลวหลังจากละลายตัวอย่างในพื้นปูนที่มีการสกัดCTAB อบอุ่น บัฟเฟอร์ (1.5ml / ตัวอย่าง) ที่ 0.2% 2 betamercaptoehanol (ตารางที่ 1) ฟักไข่ที่ 650C สำหรับ
1 ชั่วโมงหลังจากที่เพิ่ม1.5μLของ RNase และฟักไข่ที่ 370C เป็นเวลา 20 นาที หมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10
นาทีเพื่อให้เม็ดเศษแล้วเพิ่มปริมาณที่เท่ากันของคลอโรฟอร์ม: isoamyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (24: 1 v / v) จะใสและค่อยๆน้ำวนสำหรับ
10 นาทีและ centrifuge 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที โอนใสลง 0.7 ปริมาณของ isopropanol เย็นและ
0.15 ปริมาณแอมโมเนียมอะซิเตทที่จะเกิดการตกตะกอนดีเอ็นเอที่ -200C 30 min.Washing ทำครั้งที่สองโดยการเพิ่ม500μLของ
70% เอทานอลแช่เย็นเพื่อลบไอออนและจากเอทานอลที่แน่นอน หมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1
นาทีเพื่อให้เม็ดดีเอ็นเอแล้วอากาศแห้งและre-ระงับใน50μLของบัฟเฟอร์ TE

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดดีเอ็นเอและการแยก :
พิธีสารรายงานโดย& ctab ดอยล์ดอยล์ ( 1987 ) คือใช้วิธีการต่อไปนี้จะปรับเปลี่ยน : เอา
50-60mg ใบกระเจี๊ยบสดและบดด้วยไนโตรเจนเหลว หลังจากละลายดินตัวอย่างในครกด้วย
ctab ตั้งสกัดบัฟเฟอร์ ( 1.5ml / ตัวอย่าง ) 0.2% 2-betamercaptoehanol ( โต๊ะ 1 ) พักที่ 650c สำหรับ
1 ชั่วโมง หลังจากนั้นเพิ่ม 15 ลิตร และบ่มเพาะμเลสที่ 370c 20 นาที เครื่อง 12 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที เพื่อเม็ด
เศษแล้วเพิ่มปริมาณคลอโรฟอร์ม : แอลกอฮอล์ในปริมาณเท่ากัน ( 24 : 1 v / V ) เพื่อนำและค่อยๆ Vortex สำหรับ
10 นาทีซึ่งเป็นเวลา 10 นาทีและ 10 , 000 รอบต่อนาทีโอนสูงเป็น 0.7 ปริมาณของน้ำแข็ง เย็นและปริมาณแอมโมเนียมอะซิเตทไอโซโพรพานอล
0.15 ตกตะกอน DNA ที่ - 200 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีซักผ้าเสร็จสองครั้งโดยการเพิ่ม 500 μ l
70% เอทานอลเพื่อลบไอออนแช่เย็นแล้วแน่นอนจากเอทานอล เครื่อง 8 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 1 นาที เพื่อเม็ด
ดีเอ็นเอแล้ว อากาศแห้ง และระงับใน 50 μ l TE buffer