3.3. Kinetic analysis of α-glucosid

3.3. Kinetic analysis of α-glucosidase inhibition by C1 and C2
C1 and C2 were selected for further kinetic inhibition experiments
against yeast α-glucosidase since it wielded a remarkable inhibitory
activity. For kinetic studies, enzyme was incubated with designated
concentrations of substrate pNPG in the absence (control) or presence
of IC20, IC40 and IC60 inhibitory concentrations of C1 and C2. Mode of inhibition, [Km] and [Vmax] values were determined by graphical means
using Lineweaver–Burk plots. Lineweaver–Burk plots revealed that the
intersecting point for different concentrations of C1 (Fig. 2A) and C2
(Fig. 2B) arises from the same x-intercept as uninhibited enzyme
other than diverse slopes and y-intercepts. With the increasing concentrations of C1 and C2, both the slope and the vertical axis intercept
increased, whereas, the horizontal axis intercept (−1/ Km) remained
the same. The kinetic results established that C1 and C2 retarded
the maximum velocity (Vmax) of the reaction (with increasing concentrations) catalysed by α-glucosidase without much change in Km values
(Table 2). These results indicated that the mechanism of α-glucosidase
inhibition was reversible, corresponding to the classical pattern of noncompetitive inhibition. The inhibitory constant (Ki), determined from
Dixon plots for α-glucosidase was 1.61 and 2.87 μg of C1 and C2
respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3 การเคลื่อนไหววิเคราะห์ด้วยกองทัพ-glucosidase ยับยั้งโดย C1 และ C2เลือก C1 และ C2 สำหรับการทดลองยับยั้งการเคลื่อนไหวเพิ่มเติมยีสต์ด้วยกองทัพ-glucosidase ตั้งแต่ wielded ที่โดดเด่นกับลิปกลอสไขกิจกรรมการ ศึกษาเดิม ๆ เอนไซม์ถูก incubated มีกำหนดความเข้มข้นของ pNPG พื้นผิวในการขาดงาน (ควบคุม) การแสดงตนของ IC20, IC40 และ IC60 ลิปกลอสไขความเข้มข้นของ C1 และ C2 วิธีการยับยั้ง, [Km] และ [Vmax] ค่าถูกกำหนดด้วยกราฟิกใช้ Lineweaver – Burk ลงจุด Lineweaver – Burk ผืนเปิดเผยที่จะอินเตอร์เซกกันจุดแตกต่างความเข้มข้นของ C1 (Fig. 2A) และ C2(Fig. 2B) เกิดขึ้นจากเดียวกัน x จุดตัดแกนเป็นเอนไซม์ยิ่งอื่น ๆ หลากหลายลาดและ y intercepts มีความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ C1 และ C2 ความชันและแกนตั้งดักเพิ่มขึ้น ขณะที่ จุดตัดแกนแกนแนวนอน (−1 / Km) ยังคงเหมือนเดิม สร้างผลลัพธ์เดิม ๆ ที่ปัญญาอ่อนของ C1 และ C2ความเร็วสูงสุด (Vmax) ของปฏิกิริยา (ด้วยการเพิ่มความเข้มข้น) catalysed ตามด้วยกองทัพ-glucosidase โดยไม่เปลี่ยนแปลงมากในค่า Km(ตารางที่ 2) ผลลัพธ์เหล่านี้ระบุที่ที่กลไกด้วยกองทัพ-glucosidaseยับยั้งการย้อนกลับ ที่สอดคล้องกับรูปแบบคลาสสิกของ noncompetitive ยับยั้งได้ ลิปกลอสไขคง (Ki), กำหนดจากผืนนดิกซันสำหรับด้วยกองทัพ-glucosidase 1.61 และ 2.87 μg C1 และ C2ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 การวิเคราะห์การเคลื่อนไหวของการยับยั้งα-glucosidase โดย C1 และ C2
C1 และ C2
ได้รับการคัดเลือกสำหรับการทดลองการยับยั้งการเคลื่อนไหวต่อไปกับยีสต์α-glucosidase
เนื่องจากอาวุธที่น่าทึ่งยับยั้งกิจกรรม สำหรับการศึกษาเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวเอนไซม์ถูกบ่มกับกำหนดความเข้มข้นของพื้นผิว pNPG ในกรณีที่ไม่มี (ควบคุม) หรือการแสดงตนของIC20, IC40 และ IC60 ยับยั้งความเข้มข้นของ C1 และ C2 โหมดของการยับยั้ง [กม] และ [Vmax] ค่าถูกกำหนดโดยวิธีการแบบกราฟิกโดยใช้แปลงLineweaver-Burk แปลง Lineweaver-Burk เปิดเผยว่าจุดตัดสำหรับความเข้มข้นแตกต่างกันของC1 (รูป. 2A) และ C2 (รูป. 2B) เกิดขึ้นมาจากที่เดียวกัน x ตัดไม่ถูกยับยั้งเอนไซม์เป็นอื่นนอกเหนือจากเนินเขาที่มีความหลากหลายและy ที่ดัก ด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ C1 และ C2 ทั้งความลาดชันและตัดแกนแนวตั้งที่เพิ่มขึ้นในขณะที่การตัดแกนนอน (-1 / กิโลเมตร) ยังคงอยู่เหมือนเดิม ผลการเคลื่อนไหวที่ยอมรับว่า C1 และ C2 ปัญญาอ่อนความเร็วสูงสุด(Vmax) ของปฏิกิริยา (ที่มีความเข้มข้นเพิ่มขึ้น) ตัวเร่งปฏิกิริยาโดยα-glucosidase โดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงมากนักในค่ากิโลเมตร(ตารางที่ 2) ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่ากลไกของα-glucosidase ยับยั้งก็กลับสอดคล้องกับรูปแบบคลาสสิกของการยับยั้งทั้งผอง คงยับยั้ง (Ki) กำหนดจากแปลงดิกสันสำหรับα-glucosidase เป็น 1.61 และ 2.87 ไมโครกรัมของ C1 และ C2 ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 . จลนศาสตร์การวิเคราะห์ของแอลฟากลูโคซิเดสยับยั้งโดย C1 และ C2
C1 และ C2 คัดเลือกต่อไปจลนศาสตร์การยับยั้งการทดลอง
กับแอลฟาในยีสต์ เพราะใช้มากว่า
กิจกรรม สำหรับการศึกษาจลนศาสตร์เอนไซม์ถูกบ่มกับเขต
ความเข้มข้นของพื้นผิวในการ pnpg ( ควบคุม ) หรือการแสดงตนของ ic20
,ic40 ic60 ยับยั้งและความเข้มข้นของ C1 และ C2 โหมดของการยับยั้ง [ KM ] และ [ ] ค่า Vmax ซึ่งกราฟิกหมายถึง
ใช้ไลน์วีเวอร์–เบิร์กทั้งหมด ไลน์วีเวอร์–เบิร์กแปลงพบว่า
ตัดจุดสำหรับความเข้มข้นต่างๆ ( รูปที่ 2A ) C1 และ C2
( รูปที่ 2B ) เกิดขึ้นจาก x-intercept เดียวกับไม่ถูกยับยั้งเอนไซม์
นอกจากลาดที่หลากหลายและ y-intercepts .ด้วยการเพิ่มความเข้มข้นของ C1 และ C2 ทั้งความลาดชันและตัดแกน
เพิ่มขึ้น ในขณะที่ ตัดแกนแนวนอน ( − 1 / km ) ยังคง
เหมือนกัน ผลจากการก่อตั้งว่า C1 และ C2 ปัญญาอ่อน
ความเร็วสูงสุด ( Vmax ) ของปฏิกิริยา ( เพิ่มความเข้มข้น catalysed แอลฟากลูโคซิเดส ) โดยปราศจากการเปลี่ยนแปลงมากใน km ค่า
( ตารางที่ 2 )ผลการทดลองนี้ชี้ให้เห็นว่ากลไกของการ ยับยั้งแอลฟากลูโคซิเดส
ผันกลับได้ สอดคล้องกับรูปแบบคลาสสิกของการไม่แข่งขัน . ยับยั้งคงที่ ( Ki ) พิจารณาจาก
ดิกสันแปลงแอลฟากลูโคซิเดสเป็น 1.61 2.87 กรัม μ C1 และ C2
ตามลำดับ