Materials and methods2.1. Organism

Materials and methods
2.1. Organism and growth conditions
Bacillus spp., potent protease (SBP-114) and lipase (RK-2) producers
were isolated from the soil by enrichment and selective
screening on skim milk agar plate and tributyrin agar plate
respectively. These strains were identiﬁed by MIDILABS (New York,
DE, USA) as Bacillus licheniformis and B. subtilus based on 500-bp
analysis and on the partial 16S rRNA gene alignment with the Gene
Bank database (ncbi, 2012) (). The organisms were cultivated at
37 1
C in a bacteriological incubator for 24 h and subsequently
maintained at 4

C in a B.O.D incubator (Yorko, Deluxe-10) by
routine transfers on nutrient agar slants at pH value of 7.0.
2.2. Enzyme production in a bioreactor
The enzymes used for dehairing (protease) and degreasing
(lipase) were produced and optimized in a 300 L stirred bioreactor
(Scigenics, India) with a working volume of 220 L, separately. The
modiﬁed base medium (pH-7) used for protease production contained
(gL
K
2
HPO
4
1
): wheat bran (2); soybean meal (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); and MgSO
4
.7H
O (0.10). The medium
used for lipase production contained (g/L): sunﬂower oil (2);
glucose (2); peptone (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); and MgSO
O
(0.8 mM) (pH 8). These media were sterilized separately in situ at
121
C for 20 min and inoculated with 2.0% of the seed inoculum
(nutrient broth) (OD

660nm
PO
y 0.600). Fermentation for protease
production was carried out at 37 1

4
4
(1.0);
.7H
C for 24 h and for lipase
2
30 1
C for 36 h. Rest of the parameters remained same for both
the enzyme production. The impeller speed was initially adjusted to
350 rpm and compressed sterile air was sparged into the medium at
constant rate of 0.6-

The dissolved oxygen was not allowed to
fall below a ﬁxed set point of 40% by cascading in both the cases.
VVM.
Samples were withdrawn periodically at 2 h intervals and analysed
for protease and lipase production. The fermentation parameters,
such as temperature, pH, dissolved oxygen and airﬂow
were continuously monitored using microprocessor-controlled
probes. The fermentation broth was centrifuged at 8000 g for
20 min at 4
C to obtain cell free broth, containing lipase and
protease respectively. The cell pellet was discarded and the crude
enzyme was used for dehairing and degreasing experiments.

The crude protease and lipase rich broth were further concentrated
four times separately by ultraﬁltration (using Spintrex) using
10 kDa MWCO membrane cartridge.
2.2.1. Protease assay
The protease activity was measured by the procedure as
described by Meyers and Ahearn (1977) with some modiﬁcations
(Saran et al., 2007). One unit of protease was equivalent to the
amount of enzyme required to release 1
mg of tyrosine per mL per
minute under standard assay conditions.
2.2.2. Lipase assay
Lipase activity in the culture ﬁltrate was determined spectro-
photometrically using p-nitrophenyl palmitate as the substrate
using the procedure of Winkler and Stuckman (1979). One International
Unit (IU) of lipase activity was deﬁned as the amount of
enzyme required to release 1
mMofp-nitro phenol per mL per
minute under the standard assay conditions.
2.3. Internally quenched ﬂuorescent substrate speciﬁc method
In order to further conﬁrm that B. licheniformis protease is
subtilisin-like serine protease with low-collagenase activity, the
concentrated protease samples were evaluated by internally
quenched ﬂuorescent method. This method is based on the use of
designed, internally quenched ﬂuorescent ‘universal’ protease
substrates, which contain several speciﬁc cleavage sites. Application
of a combination of ﬂuorescence and mass spectral analysis
permits the proﬁling of proteolysis.
2.4. Dehairing & degreasing of animal skins and hides
2.4.1. Preparation of animal skins and hides
Goat skin, sheep skin and buffalo hide were obtained from the
local slaughter house. For storage, the skins were rubbed with twice
their weight in salts and stored in cold room at 4
C for 2e6 months
to prevent putrefaction. The skins were cut to a size of 1 sq. ft
(0.093 m
2

) for experiments. The salted skins and hides were
soaked, for a period of 6 h in water to eliminate salt, blood, and dirt
and to gain moisture lost during curing process.
2.4.2. Experimental
The paste method was followed in all the studies for the beam
house operations of the leather industry (Fig. 4A,B). The skins/hides
after application of enzymes were loosely covered with single layer
of polythene sheets and kept at room temperature (30 2
C) for
24 h. Dehairing and degreasing were checked periodically up to
24 h. To check the dehairing potential, hair was removed using a
blunt end spatula. The efﬁcacy of the dehairing enzyme at different
parameters (temperatures, pH, and enzyme concentrations)
was optimized for 100% dehairing. The scale of dehairing was
observed as follows: a) þ slight dehairing, b) þþ moderate

C in a B.O.D incubator (Yorko, Deluxe-10) by
routine transfers on nutrient agar slants at pH value of 7.0.
2.2. Enzyme production in a bioreactor
The enzymes used for dehairing (protease) and degreasing
(lipase) were produced and optimized in a 300 L stirred bioreactor
(Scigenics, India) with a working volume of 220 L, separately. The
modiﬁed base medium (pH-7) used for protease production contained
(gL
K
2
HPO
4
1
): wheat bran (2); soybean meal (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); and MgSO
4
.7H
O (0.10). The medium
used for lipase production contained (g/L): sunﬂower oil (2);
glucose (2); peptone (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); and MgSO
O
(0.8 mM) (pH 8). These media were sterilized separately in situ at
121
C for 20 min and inoculated with 2.0% of the seed inoculum
(nutrient broth) (OD

660nm
PO
y 0.600). Fermentation for protease
production was carried out at 37  1

4
4
(1.0);
.7H
C for 24 h and for lipase
2
30  1
C for 36 h. Rest of the parameters remained same for both
the enzyme production. The impeller speed was initially adjusted to
350 rpm and compressed sterile air was sparged into the medium at
constant rate of 0.6-

The dissolved oxygen was not allowed to
fall below a ﬁxed set point of 40% by cascading in both the cases.
VVM.
Samples were withdrawn periodically at 2 h intervals and analysed
for protease and lipase production. The fermentation parameters,
such as temperature, pH, dissolved oxygen and airﬂow
were continuously monitored using microprocessor-controlled
probes. The fermentation broth was centrifuged at 8000 g for
20 min at 4
C to obtain cell free broth, containing lipase and
protease respectively. The cell pellet was discarded and the crude
enzyme was used for dehairing and degreasing experiments.

The crude protease and lipase rich broth were further concentrated
four times separately by ultraﬁltration (using Spintrex) using
10 kDa MWCO membrane cartridge.
2.2.1. Protease assay
The protease activity was measured by the procedure as
described by Meyers and Ahearn (1977) with some modiﬁcations
(Saran et al., 2007). One unit of protease was equivalent to the
amount of enzyme required to release 1
mg of tyrosine per mL per
minute under standard assay conditions.
2.2.2. Lipase assay
Lipase activity in the culture ﬁltrate was determined spectro-
photometrically using p-nitrophenyl palmitate as the substrate
using the procedure of Winkler and Stuckman (1979). One International
Unit (IU) of lipase activity was deﬁned as the amount of
enzyme required to release 1
mMofp-nitro phenol per mL per
minute under the standard assay conditions.
2.3. Internally quenched ﬂuorescent substrate speciﬁc method
In order to further conﬁrm that B. licheniformis protease is
subtilisin-like serine protease with low-collagenase activity, the
concentrated protease samples were evaluated by internally
quenched ﬂuorescent method. This method is based on the use of
designed, internally quenched ﬂuorescent ‘universal’ protease
substrates, which contain several speciﬁc cleavage sites. Application
of a combination of ﬂuorescence and mass spectral analysis
permits the proﬁling of proteolysis.
2.4. Dehairing & degreasing of animal skins and hides
2.4.1. Preparation of animal skins and hides
Goat skin, sheep skin and buffalo hide were obtained from the
local slaughter house. For storage, the skins were rubbed with twice
their weight in salts and stored in cold room at 4
C for 2e6 months
to prevent putrefaction. The skins were cut to a size of 1 sq. ft
(0.093 m
2

) for experiments. The salted skins and hides were
soaked, for a period of 6 h in water to eliminate salt, blood, and dirt
and to gain moisture lost during curing process.
2.4.2. Experimental
The paste method was followed in all the studies for the beam
house operations of the leather industry (Fig. 4A,B). The skins/hides
after application of enzymes were loosely covered with single layer
of polythene sheets and kept at room temperature (30  2
C) for
24 h. Dehairing and degreasing were checked periodically up to
24 h. To check the dehairing potential, hair was removed using a
blunt end spatula. The efﬁcacy of the dehairing enzyme at different
parameters (temperatures, pH, and enzyme concentrations)
was optimized for 100% dehairing. The scale of dehairing was
observed as follows: a) þ slight dehairing, b) þþ moderate

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

วัสดุและวิธีการ2.1. สิ่งมีชีวิตและเจริญเติบโตออกซิเจนบาซิลลัส โปรติเอสมีศักยภาพ (SBP-114) และผลิตเอนไซม์ไลเปส (RK-2)แยกจากดิน โดยการเพิ่มคุณค่า และเลือกคัดกรองบนแผ่นวุ้นนมพร่องมันเนยและแผ่นวุ้น tributyrinตามลาดับ สายพันธุ์เหล่านี้ถูก identiﬁed โดย MIDILABS (นิวยอร์กเดอ สหรัฐอเมริกา) เป็นบาซิลลัส licheniformis และ B. subtilus อิง 500 bpวิเคราะห์และคล้องบางส่วน 16S rRNA ยีนมียีนฐานข้อมูลธนาคาร (ncbi, 2012) () สิ่งมีชีวิตที่ถูกปลูกที่37 1C ในตู้อบที่แบคทีเรีย สำหรับ 24 ชั่วโมง และในเวลาต่อมา4C ในตู้อบที่ B.O.D (Yorko, Deluxe-10) โดยโอนเป็นประจำบนอาหารวุ้นเอียงที่ค่า pH 7.02.2 การผลิตเอนไซม์ในถังปฏิกรณ์ชีวภาพแบบเอนไซม์ที่ใช้สำหรับ dehairing (น้ำย่อย) และไข(เอนไซม์ไลเปส) ผลิต และเพิ่มประสิทธิภาพในถังปฏิกรณ์ชีวภาพแบบ 300 L กวน(Scigenics อินเดีย) กับทำเสียงของ 220 L แยกต่างหาก การmodiﬁed ฐานกลาง (pH 7) ใช้สำหรับการผลิตโปรติเอสที่มีอยู่(gLK2HPO41): รำข้าวสาลี (2); กากถั่วเหลือง (15); KH(3.0); นา2ดังนั้น4(2.0); และ MgSO4.7HO (0.10) สื่อใช้สำหรับผลิตเอนไซม์ไลเปสที่มีอยู่ (กรัม/ลิตร): น้ำมัน sunﬂower (2);กลูโคส (2); peptone (15); NH4ไม่ใช่322(3.0); และ MgSOO(0.8 มม.) (pH 8) สื่อเหล่านี้ได้ผ่านการฆ่าเชื้อแยกต่างหากในแหล่งกำเนิดที่121C 20 นาที และ inoculated ร้อยละ 2.0 ของ inoculum เมล็ด(สารอาหารน้ำซุป) (OD660nmPOy 0.600) หมักสำหรับโปรติเอสการผลิตดำเนินการ 37 144(1.0);.7HC สำหรับ 24 ชม และเอนไซม์ไลเปส230 1C สำหรับ 36 เหลือพารามิเตอร์อยู่เดียวกันสำหรับทั้งสองการผลิตเอนไซม์ ความเร็วใบพัดเริ่มปรับปรุงการ350 rpm และบีบอัดอากาศที่ผ่านการฆ่าเชื้อคือ sparged เป็นสื่อที่คงอัตรา 0.6-ออกซิเจนละลายน้ำไม่ได้รับอนุญาตให้ลดลงต่ำกว่าจุดที่ตั้งใน ﬁxed 40% โดยซ้อนในทั้งสองกรณีVVMถอนเป็นระยะ ๆ ในช่วงเวลา 2 ชม. และวิเคราะห์ตัวอย่างสำหรับการผลิตโปรติเอสและไลเปส พารามิเตอร์การหมักเช่นอุณหภูมิ pH ออกซิเจนละลาย และ airﬂowได้รับการดูแลโดยใช้ไมโครโปรเซสเซอร์ควบคุมรบ น้ำซุปหมักเป็นผลิตภัณฑ์ที่ 8000 กรัมสำหรับ20 นาทีที่ 4C รับเซลล์ซุปฟรี ที่ประกอบด้วยเอนไซม์ไลเปส และโปรติเอสตามลำดับ เม็ดเซลล์ถูกละทิ้ง และยังดิบเอนไซม์ถูกใช้สำหรับ dehairing และการทดลองไขโปรติเอสที่ดิบและน้ำซุปที่อุดมไปด้วยเอนไซม์ไลเปสได้ต่อไปเข้มข้นครั้งที่สี่แยก โดยใช้ ultraﬁltration (ใช้ Spintrex)10 kDa MWCO เยื่อตลับ2.2.1. ทดสอบโปรติเอสกิจกรรมโปรติเอสโดยวัดจากกระบวนการเป็นอธิบาย โดยริสเมเยอร์สและ Ahearn (1977) กับ modiﬁcations บาง(Saran et al. 2007) หนึ่งหน่วยโปรติเอสได้เทียบเท่ากับการปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปล่อย 1มก.ของไทโรซีนต่อมิลลิลิตรต่อนาทีภายใต้สภาวะทดสอบมาตรฐาน2.2.2. เอนไซม์ไลเปส assayกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสใน ﬁltrate วัฒนธรรมถูกกำหนดโตโฟโต-photometrically ใช้ p nitrophenyl palmitate เป็นพื้นผิวใช้ขั้นตอนของ Winkler และ Stuckman (1979) นานาชาติหนึ่งหน่วย (IU) กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปล่อย 1ฟีนอลไนโต mMofp ต่อมิลลิลิตรต่อนาทีภายใต้สภาวะทดสอบมาตรฐาน2.3 ภายในดับ ﬂuorescent พื้น speciﬁc วิธีเพื่อที่จะเพิ่มเติม conﬁrm โปรติเอสที่ B. licheniformisโปรติเอสเหมือน subtilisin รอบเส้นใยประสาทกับกิจกรรม collagenase ต่ำ การตัวอย่างโปรติเอสที่เข้มข้นถูกประเมินโดยภายในดับ ﬂuorescent วิธี วิธีนี้เป็นไปตามการใช้ตัวทดลองภายใน ﬂuorescent 'สากล' โปรติเอส การออกแบบพื้นผิว ซึ่งประกอบด้วยหลายเว็บไซต์ความแตก speciﬁc แอพลิเคชันชุดของ ﬂuorescence และการวิเคราะห์สเปกตรัมมวลอนุญาตให้ proﬁling ของ proteolysis2.4. Dehairing และไขของหนังสัตว์และหนัง2.4.1. เตรียมหนังสัตว์และหนังผิวของแพะ แกะผิวและควายซ่อนได้รับจากการศพในท้องถิ่น สำหรับเก็บ สกินถูกลูบกับสองในเกลือ และเก็บไว้ในห้องเย็นที่ 4C 2e6 เดือนเพื่อป้องกัน putrefaction สกินถูกตัดให้มีขนาด 1 ตารางฟุต(0.093 m2) สำหรับการทดลอง กินเค็มและซ่อนแช่ ระยะเวลา 6 ชม.ในน้ำเพื่อกำจัดเกลือ เลือด และสิ่งสกปรกและได้รับความชื้นที่สูญเสียในระหว่างกระบวนการบ่ม2.4.2. ทดลองวิธีการวางตามมาในการศึกษาสำหรับคานบ้านการดำเนินงานของอุตสาหกรรมเครื่องหนัง (รูปที่ 4A, B) สกิน/ซ่อนหลังจากแอพลิเคชันของเอนไซม์ได้หลวม ๆ คลุมชั้นเดียวpolythene แผ่น และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (30 2ค) สำหรับ24 h. Dehairing และไขถูกตรวจสอบเป็นระยะ ๆ ถึง24 ชม การตรวจ dehairing อาจเกิดขึ้น ผมถูกเอาออกโดยใช้การโคนปลายทื่อ Efﬁcacy ของเอนไซม์ dehairing ที่แตกต่างกันพารามิเตอร์ (อุณหภูมิ pH และความเข้มข้นของเอนไซม์)คือเหมาะสำหรับ dehairing 100% มาตราส่วนของ dehairing คือสังเกตดังนี้:) þเล็กน้อย dehairing ข) þþปานกลาง

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

วัสดุและวิธีการ
2.1 สิ่งมีชีวิตและการเจริญเติบโตเงื่อนไข
Bacillus spp. น้ำย่อยที่มีศักยภาพ (SBP-114) และเอนไซม์ไลเปส (RK-2) ผู้ผลิต
ที่แยกได้จากดินโดยการเพิ่มปริมาณและเลือก
คัดกรองบนแผ่นวุ้นนมพร่องมันเนยและ tributyrin จานเลี้ยงเชื้อ
ตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ถูกระบุ Fi ed โดย MIDILABS (New York,
DE, USA) เป็น licheniformis Bacillus และ B subtilus บนพื้นฐาน 500 bp
วิเคราะห์และในส่วนการจัดตำแหน่งของยีน 16S rRNA กับยีน
ฐานข้อมูลธนาคาร (NCBI 2012) () สิ่งมีชีวิตที่ได้รับการปลูกฝังที่
37? 1
ซีในศูนย์บ่มเพาะแบคทีเรียเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและต่อมา
เก็บรักษาไว้ที่ 4
?
C ในที่ประชุมคณะกรรมการศูนย์บ่มเพาะ (Yorko, Deluxe-10) โดย
การโอนเงินเป็นประจำในอาหารเลี้ยงเชื้อ slants ที่ค่า pH 7.0.
? 2.2 การผลิตเอนไซม์ในระบบถังหมัก
เอนไซม์ที่ใช้ในการ dehairing (protease) และล้างไขมัน
(เอนไซม์ไลเปส) มีการผลิตและเพิ่มประสิทธิภาพใน 300 L หมักแบบกวน
(Scigenics อินเดีย) มีปริมาณการทำงานของ L 220 แยก
ฐาน Modi Fi เอ็ดกลาง (pH-7) ใช้สำหรับการผลิตเอนไซม์โปรติเอมี
(gL
K
2
HPO
4
1
): รำข้าวสาลี (2); กากถั่วเหลือง (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); และ MgSO
4
.7H
O (0.10) สื่อที่
ใช้สำหรับการผลิตเอนไซม์ไลเปสที่มีอยู่ (g / L): ดวงอาทิตย์ FL Ower น้ำมัน (2);
กลูโคส (2); เปปโตน (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); และ MgSO
O
(0.8 มิลลิเมตร) (pH? 8) สื่อเหล่านี้ได้ผ่านการฆ่าเชื้อที่แยกจากกันในแหล่งกำเนิดที่
121
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีและเชื้อด้วย 2.0% ของเชื้อเมล็ด
(สารอาหารน้ำซุป) (OD
?
660nm
PO
Y 0.600) หมักน้ำย่อย
ผลิตได้ดำเนินการที่ 37? 1
?
4
4
(1.0);
.7H
เซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและเอนไซม์ไลเปส
ที่ 2
วันที่ 30? 1
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 36 ชั่วโมง ส่วนที่เหลือของพารามิเตอร์ที่ยังคงเหมือนเดิมสำหรับทั้ง
การผลิตเอนไซม์ ความเร็วในการผลักดันการปรับขั้นต้น
350 รอบต่อนาทีและอัดอากาศผ่านการฆ่าเชื้อถูก sparged เข้ากลางที่
อัตราดอกเบี้ยคงที่ของ 0.6-
?
ออกซิเจนที่ละลายในน้ำไม่ได้รับอนุญาตที่จะ
ลดลงต่ำกว่า Fi คงจุด 40% ที่กำหนดโดยซ้อนในทั้งสองกรณี.
VVM
ตัวอย่างที่ถูกถอนออกเป็นระยะที่ 2 ช่วงเวลาชั่วโมงและวิเคราะห์
สำหรับโปรติเอสและเอนไซม์ไลเปสผลิต พารามิเตอร์หมัก
เช่นอุณหภูมิค่า pH, ปริมาณออกซิเจนละลายน้ำและอากาศ FL โอ๊ย
ถูกตรวจสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ไมโครโปรเซสเซอร์ที่ควบคุม
ยานสำรวจ น้ำซุปหมักถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8000 กรัมสำหรับ
20 นาทีที่ 4
C เพื่อให้ได้น้ำซุปฟรีมือถือที่มีเอนไซม์ไลเปสและ
โปรติเอสตามลำดับ เม็ดเซลล์ถูกทิ้งและน้ำมันดิบ
เอนไซม์ที่ใช้สำหรับ dehairing และการทดลองล้างไขมัน.
?
โปรติเอสมันดิบและน้ำซุปที่อุดมไปด้วยเอนไซม์ไลเปสมีความเข้มข้นอีก
ครั้งที่สี่แยกโดย ltration Fi พิเศษ (ใช้ Spintrex) โดยใช้
10 ตลับเมมเบรน kDa MWCO.
2.2.1 โปรติเอสทดสอบ
กิจกรรมโปรติเอสโดยวัดจากวิธีการที่
อธิบายโดยเมเยอร์สและ Ahearn (1977) กับบางไพเพอร์ Modi Fi
(สราญ et al., 2007) หนึ่งหน่วยของน้ำย่อยเป็นเทียบเท่ากับ
ปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย 1
mg ของซายน์ต่อมิลลิลิตรต่อ
นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน.
2.2.2 เอนไซม์ไลเปสทดสอบ
กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสใน ltrate วัฒนธรรม Fi ถูกกำหนด spectro-
photometrically ใช้ palmitate P-Nitrophenyl เป็นสารตั้งต้น
ที่ใช้ขั้นตอนของเคลอร์และ Stuckman นี้ (1979) หนึ่งระหว่าง
Unit (IU) ของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสเป็นนิยามปริมาณของ
เอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย 1
mMofp-ไนโตรฟีนอลต่อมิลลิลิตรต่อ
นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน.
2.3 ภายในดับชั้น uorescent ตั้งต้น speci วิธี Fi C
เพื่อ Con เพิ่มเติม Fi RM ว่า B. licheniformis น้ำย่อยเป็น
subtilisin เหมือนน้ำย่อยซีรีนที่มีฤทธิ์ต่ำคอลลาที่
ตัวอย่างน้ำย่อยเข้มข้นได้รับการประเมินโดยภายใน
ดับชั้นวิธี uorescent วิธีการนี้จะขึ้นอยู่กับการใช้งานของ
การออกแบบภายในชั้นดับ uorescent 'สากล' น้ำย่อย
พื้นผิวซึ่งมีหลายเว็บไซต์แตกแยก speci Fi C การประยุกต์ใช้
การรวมกันของ uorescence ลอริด้าและการวิเคราะห์สเปกตรัมมวล
อนุญาตให้ Fi Pro หลิงของ proteolysis.
2.4 dehairing และล้างไขมันของหนังสัตว์และซ่อน
2.4.1 การเตรียมการของหนังสัตว์และซ่อน
ผิวแพะแกะผิวและควายซ่อนที่ได้รับจาก
โรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่น สำหรับการจัดเก็บสกินที่ถูกถูด้วยสองครั้ง
น้ำหนักของพวกเขาในเกลือและเก็บไว้ในห้องเย็นที่อุณหภูมิ 4
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2e6 เดือน
เพื่อป้องกันไม่ให้เน่าเปื่อย สกินถูกตัดกับขนาดของ 1 ตาราง. ฟุต
(ม 0.093
2
?
) สำหรับการทดลอง สกินเค็มและซ่อนถูก
แช่เป็นเวลา 6 ชั่วโมงในน้ำเพื่อกำจัดเกลือในเลือดและสิ่งสกปรก
และความชื้นที่จะได้รับหายไปในระหว่างกระบวนการบ่ม.
2.4.2 ทดลอง
วิธีการวางตามมาในการศึกษาทั้งหมดสำหรับคาน
การดำเนินงานที่บ้านของอุตสาหกรรมเครื่องหนัง (รูป. 4A, B) สกิน / กลอง
หลังจากการประยุกต์ใช้เอนไซม์ถูกปกคลุมด้วยคับชั้นเดียว
ของแผ่นพลาสติกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (30? 2
C) สำหรับ
24 ชั่วโมง dehairing และล้างไขมันได้รับการตรวจสอบเป็นระยะถึง
24 ชั่วโมง ในการตรวจสอบที่มีศักยภาพ dehairing ผมจะถูกลบออกโดยใช้
ไม้พายปลายทู่ cacy Fi EF ของเอนไซม์ dehairing ที่แตกต่างกัน
พารามิเตอร์ (อุณหภูมิ pH และความเข้มข้นของเอนไซม์)
ได้รับการปรับให้เหมาะสมกับ 100% dehairing ขนาดของ dehairing ถูก
ตั้งข้อสังเกตดังนี้ก) TH dehairing เล็กน้อยข) þþปานกลาง
?

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

วัสดุและวิธีการ2.1 . สิ่งมีชีวิตและเงื่อนไขการเจริญเติบโตBacillus spp . ที่มีศักยภาพ ( sbp-114 ) และเอนไซม์โปรติเอส ( rk-2 ) ผู้ผลิตที่แยกได้จากดินโดยการเลือกและการคัดกรองในหางจานวุ้นนมและ tributyrin วุ้นแผ่นตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ identi จึงเอ็ดโดย midilabs ( นิวยอร์กเดอ , USA ) และ Bacillus licheniformis subtilus 500 BP ตามพ.การวิเคราะห์ในส่วนเบส 16S rRNA ยีนสอดคล้องกับยีนฐานข้อมูลของธนาคาร ( ncbi 2012 ) ( ) สิ่งมีชีวิตปลูกที่37 1C ในศูนย์บ่มเพาะแบคทีเรีย 24 H และในภายหลังรักษา 4C ใน b.o.d ฟักไข่ ( yorko deluxe-10 , โดยโอนตามปกติบนอาหารเลี้ยงเชื้อสารอาหาร slants ที่ค่า pH 7.0 .2.2 . การผลิตเอนไซม์ในถังปฏิกรณ์ชีวภาพเอนไซม์ที่ใช้ใน dehairing ( เอส ) และล้างไขมัน( เอนไซม์ ) ถูกผลิตและเพิ่มประสิทธิภาพในถังปฏิกรณ์กวน 300 ล.( scigenics , อินเดีย ) กับปริมาณการทำงานของ 220 ลิตร แยกต่างหาก ที่โมไดจึงเอ็ดฐานปานกลาง ( ph-7 ) ใช้สำหรับการผลิตโปรตีนที่มีอยู่( GLเค2เจริญ4 .1) : รำข้าวสาลี ( 2 ) ; กากถั่วเหลือง ; ( 15 ) KH( 3.0 ) นา2ดังนั้น4 .( 2.0 ) ; และ MgSO4 .. 7HO ( 0.10 ) ปานกลางใช้สำหรับการผลิตไลเปสประกอบด้วย ( กรัม / ลิตร ) : Sun น้ำมัน ower ﬂ ( 2 )กลูโคส ( 2 ) ; เปปโตน ( 15 ) ; นเ4 .ไม่3 .22( 3.0 ) และแมกนีเซียมซัลเฟตโอ( 0.8 มิลลิเมตร ) ( pH 8 ) สื่อพวกนี้ฆ่าเชื้อในแหล่งกำเนิดที่แยกต่างหาก121C เป็นเวลา 20 นาทีและใส่กับ 2.0 % ของปริมาณเมล็ดพันธุ์( ซุปสารอาหาร ) ( ตัวอย่าง660nmโปY 0.600 ) หมักดอง โปรติเอสดำเนินการใน 37 1 การผลิต4 .4 .( 1.0 ). 7HC เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และไลเปส230 1C เป็นเวลา 36 ชั่วโมงส่วนที่เหลือของพารามิเตอร์ยังคงอยู่เหมือนกันสำหรับทั้งสองการผลิตเอนไซม์ . ความเร็วในประเทศปรับ350 รอบต่อนาทีและอากาศอัดปลอดเชื้อได้ sparged ลงในสื่อที่อัตราคงที่ - 0.6ออกซิเจนละลายน้ำก็ไม่ได้อยู่ด้านล่างจึง xed จุดตั้ง 40% โดย cascading ในทั้งสองกรณีการให้ .ตัวอย่างที่ถูกถอนเป็นระยะ ๆในช่วงเวลา 2 ชั่วโมงและวิเคราะห์การผลิตเอนไซม์โปรติเอส . การหมักพารามิเตอร์เช่นอุณหภูมิ , pH , ปริมาณออกซิเจนที่ละลายในน้ำและอากาศﬂ โอ๊ยมีการตรวจสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ไมโครโปรเซสเซอร์ควบคุมเครื่องมือตรวจสอบ ส่วนน้ำหมักอยู่ที่ระดับ 8 , 000 กรัมสำหรับ20 นาที 4C เพื่อให้ได้น้ำซุปฟรีเซลล์ ประกอบด้วยเอนไซม์และโปรตีน ตามลำดับ เซลล์เม็ด ถูกทอดทิ้ง และดิบเอนไซม์ที่ใช้ dehairing ล้างไขมันและการทดลองการสร้างเอนไซม์ไลเปสดิบและน้ำซุปเข้มข้น ได้รวยสี่ครั้งโดยแยกเป็นพิเศษ จึง ltration ( ใช้ spintrex ) โดยใช้10 กิโล mwco เยื่อตลับหมึก2.2.1 . โปรการทดสอบการสร้างวัดโดยขั้นตอนกิจกรรมบรรยายโดย เมเยอร์ ahearn ( 1977 ) และบางจึงทำให้โมดิ( ศรัณย์ et al . , 2007 ) หนึ่งหน่วยของเอนไซม์โปรตีเอสคือเทียบเท่ากับปริมาณของเอนไซม์ ต้องปล่อย 1มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรต่อแต่อย่างใดนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน2.2.2 . มีการทดสอบไลเปสในวัฒนธรรมจึง ltrate Spectro - มุ่งมั่นphotometrically ใช้ p-nitrophenyl Palmitate เป็น พื้นผิวโดยใช้วิธีการของตัวแทน และ stuckman ( 1979 ) หนึ่งระหว่างประเทศหน่วย ( IU ) ของกิจกรรมเอนไซม์คือ เดอ จึงเป็นยอดของเน็ดเอนไซม์ต้องปล่อย 1mmofp ไนโตรฟีนอลต่อมิลลิลิตร ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน2.3 ภายใน ดับﬂ uorescent พื้นผิวประเภทจึง C วิธีเพื่อส่งเสริมคอนจึง RM ที่ B . licheniformis ติคือเอนไซม์คอลลาจีเนสติด้วยซับทิลิซินชอบกิจกรรมต่ำเข้มข้นโปรตีนตัวอย่าง ได้แก่ ภายในดับﬂ uorescent วิธี วิธีนี้จะขึ้นอยู่กับการใช้ของออกแบบภายใน ดับﬂ uorescent " สากล " โปรติเอสพื้นผิวซึ่งมีหลายประเภทจึง C การเว็บไซต์ ใบสมัครของการรวมกันของ uorescence ﬂและการวิเคราะห์สเปกตรัมมวลใบอนุญาต Pro จึง หลิง โปรตีโ ลซิส .2.4 . dehairing & การล้างคราบไขมันจากหนังสัตว์และซ่อนเครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การเตรียมผิวหนังสัตว์และซ่อนหนังแพะ หนังแกะและควายซ่อนได้จากโรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่น สำหรับกระเป๋า , หนังถูกลูบกับ 2ของน้ำหนักในเกลือและเก็บไว้ในห้องเย็น 4C 2e6 เดือนเพื่อป้องกันการเน่าเปื่อย หนังถูกตัดขนาด 1 ตร. ฟุต( 0.093 ม.2) สำหรับการทดลอง หนังเค็มและซ่อนอยู่แช่ เป็นเวลา 6 ชั่วโมงในน้ำเพื่อกำจัดเกลือ เลือด และดินและเพื่อให้ได้รับความชื้นที่เสียไปในระหว่างขั้นตอนการบ่ม .2.4.2 . ทดลองวางวิธีตามในการศึกษาทั้งหมดสำหรับคานการดำเนินงานบ้านอุตสาหกรรมเครื่องหนัง ( รูปที่ 4 , B ) สกิน / ซ่อนหลังจากการประยุกต์ใช้เอนไซม์อย่างหลวม ๆปกคลุมด้วยชั้นเดี่ยวแผ่น polythene และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง ( 30 2องศาเซลเซียส24 ชั่วโมง dehairing และการล้างไขมันถูกตรวจสอบเป็นระยะ ๆ ขึ้นตลอด 24 ชั่วโมงเพื่อตรวจสอบ dehairing ศักยภาพ ผมถูกลบออกโดยใช้ปลายทู่ไม้พาย . ผจึง cacy ของ dehairing เอนไซม์ที่แตกต่างกันพารามิเตอร์ ( อุณหภูมิ , pH และความเข้มข้นของเอนไซม์ )คือเหมาะสำหรับ 100 % dehairing . ขนาดของ dehairing คือสังเกตดังนี้ : ) þเล็กน้อย dehairing , B ) þþปานกลาง

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.